干扰素制备的工艺流程1

我听了人们的议论，也感到疑惑难决：如果只 能救活一人，究竟应该救妻子呢，还是救孩子?
于是我去拜访那个农民，问他当时是怎么想的 。
❖ 他答道：“我什么也没想。洪水袭来，妻子 在我身过，我抓住她就往附近的山坡游。当 我返回时，孩子已经被洪水冲走了。”
❖ 我琢磨着农民的话，如果当时这个农民 稍有迟疑，可能一个都救不了；所谓人生的 抉择不少便是如此。
❖ 干扰素是目前最主要的抗病毒感染和抗肿瘤生物制 品。
·
干扰素的合成
❖ 一、基因工程菌的组建 1、如何构建基因工程菌？也就是DNA重组
克隆单元操作步骤。 切、接、转、增、检
2、切之前还需要做什么？ 获取目的cDNA
❖ 1、干扰素cDNA的获得
全RNA
寡dT—纤维柱
mRNA
产生干扰素的白细胞
5%~23%蔗 糖密度梯度 离心提取12
基因工程药物的制造实例
什么是干扰素？
❖ 概念(interferon,IFN)：机体免 疫细胞产生的一类细胞因子，是 机体受到病毒感染时，免疫细胞 通过抗病毒应答反应而产生的一 组结构类似、功能接近的生物调 节蛋白。
干扰素的作用？
❖ 一、抗增生作用：这是干扰素能用于治疗多种肿瘤 的原因。 二、抗病毒作用：当我们的机体感染病毒时，体内 会产生大量的干扰素。 三、免疫调节作用 四、抗纤维化作用 五、干扰素还有抗新血管增生、促进细胞凋亡等多 种功能
精提
冻干
成品检定
成品包装
(P73)
制备的过程及要求： （1）发酵 （2）产物提取纯化 （3）质量控制标准和要求（P74）
❖ 小故事
❖ 抉择
一个农民从洪水中救起了他的妻子，他的孩子 却被淹死了。
事后，人们议论纷纷。有的说他做得对，因为 孩子可以再生一个，妻子却不能死而复活。有的说 他做错了，因为妻子可以另娶一个，孩子却不能死 而复活。
❖ 步骤二：若想进一步筛选出重组子，可采用负选择 （详情请看《基因工程》P59）。
但由于生产中要用已知干扰素DNA片段作为探针挑 选富有干扰素的cDNA克隆，所以不需要进行负选 择。
二、基因工程干扰素的制备
❖ 制备基因工程ɑ-干扰素工艺流程如下：
启开种子
制备种子液
发酵培养
粗提
分装
半成品检定
半成品制备
S mRNA
什么叫12 S mRNA？
12S mRNA
反转录成cDNA
2、基因工程菌的组建
目的cDNA
Apr
切
pBR322质粒
Tcr Tcr
干Байду номын сангаас素
产
接
Tcr
用已知干扰素 DNA片段作为 探针挑选
转
大肠杆菌K12
抗性筛选？
增
检
受体菌的抗性筛选
❖ 步骤一：将细菌涂布到含四环素的培养基上培养， 就可得到质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落 。
❖ 感悟：很多事情根本没有错与对，也容 不得你去细想错与对，如果过于犹豫或过于 在乎别人的想法，你可能什么事也做不成。