8_9个月SD大鼠小胶质细胞的纯化分离培养

#论 著#

8-9个月SD 大鼠小胶质细胞的纯化分离培养

耿 慧 钟 远

=摘要> 目的 建立培养8-9个月SD 大鼠大脑皮层小胶质细胞的方法。方法

以M cCarthy 的方法为

基础,并加以改进,采用振摇结合贴壁分离法纯化小胶质细胞;CD11b 免疫细胞化学染色对纯化的小胶质细胞纯度进行鉴定;相差显微镜下进行细胞形态观察和细胞计数;CCK-8比色法检测纯化的小胶质细胞在不同时间点的活力和增殖。结果 培养的8-9个月SD 大鼠大脑皮层小胶质细胞,纯度达到95%,培养过程中未出现明显的增殖。结论 8-9个月SD 大鼠大脑皮层的小胶质细胞在体外亦可成功培养,为小胶质细胞在老年疾病中的研究奠定了基础的。

=关键词>

小胶质细胞;细胞培养;衰老;阿尔茨海默病

中图分类号:R 331 文献标识码:A 文章编号:1006-351X (2010)02-0152-03

The pr i m ary cu lture m e thod for isolation of m icrogli a fro m 8-9m on th rats GE N G H u i ,Z H ONG Yuan .D epart m entof G e ronti s m,the S i x t h P eop le s 'H osp ita l o f Shangha i Ji ao t ong U n i ve rs i ty ,Shangha i 200233,Ch i na Correspond i ng au thor : ZHONG Y uan ,Ema i:l zhongyuan60@yahoo

=Abstract > O bjective T o se t up an easy and e ffecti ve m ethod for pr i m ary cu lti vate and pur ifi cation of the m i crog lia cells .M eth ods

Based on class i ca lm i crog li a pri m ary cu lture m e t hod o fM cCa rt hy ,and w e i m proved th i s

m ethod .In the l a ter pur ifi cation phase o f ce ll cu lti va tion ,m i crog lias w ere parall y ope ra ted and culti v ated w ith m echan ical separa ti on m ethod .M orpho log i c changes and the nu mber of ce lls were reco rded under the sa m e m agn ifi ed fi e l d o f scope .The acti v ity and t he pro liferati on w ere exam i ned by C ell Counting K it .R es u lts P resen t m od ifi ed

m ethod stead ily produced m icrog li a from 8-9m ont h SD rat w ith hi gh pur it y.N o sign ificant pro lifera ti on w as found i n

nor m a l cu lt ura l cond iti on .Con clusi on

The m i crog lia ce lls i solated from 8-9m ont h SD rat can a lso be cu lti vated

successfull y i n v itro ,prov i ding a basis f o r furt her research o f the m icrog lia i n A l zhe i m er d i sease .

=K ey words >

M icrog li a ;Ce ll culture ;A g i ng ;A lz he i m er s 'disease

作者单位:200233上海,上海交通大学附属第六人民医院老年科通信作者:钟远,Em ai:l z hongyuan60@yahoo .co

小胶质细胞是脑内的免疫效应细胞,大约占中枢神经系统脑实质胶质细胞数量的10%。研究表明,小胶质细胞与脑外伤、脑肿瘤、脑缺血、阿尔茨海默病(A lzhei m er s 'd isease ,AD)、帕金森病与实验性自身免疫性脑脊膜炎等中枢神经系统疾病有关。小胶质细胞的纯化分离培养对于离体条件下进行小胶质细胞的实验研究具有广泛的实用价值。但由于其细胞数目所占比例较小,在体外较难分裂增殖,研究多采用新生大鼠源性的小胶质细胞。但是已有研究证实新生鼠源性的小胶质细胞在很多生物学特性上跟成年鼠的小胶质细胞有很大的差别。为了深入研究小胶质细胞在阿尔茨海默病等老化相关性疾病中的作用,本文以M c Carthy 的方法为基础并加以改进,在体外成功培养成年SD 大鼠源性的小胶质细胞,为小胶质细胞在增龄性疾病

中作用的研究奠定了基础。

材料和方法

一、实验动物和试剂

1.实验动物

成年SD 大鼠(8-9月龄),上海实验动物中心提供。

2.试剂

D M

E M /F12高糖培养基(含双抗,青霉素100U /m ,l 链霉素100U /m l),胰蛋白酶(G I BCO 公司),优质胎牛血清(H yclone 公司),小鼠抗大鼠CD11b 单克隆抗体,DAB 显色试剂盒(武汉博士德公司),CCK-8试剂盒(日本同仁化工)。

二、实验方法

1.混合胶质细胞培养

8-9月龄SD 大鼠无菌条件下开颅取脑,取两侧大脑半球用冷D-H anks 溶液清洗并仔细剔除脑膜及血