AFB1免疫亲和柱使用说明书
免疫亲和柱使用方法
免疫亲和柱使用方法
免疫亲和柱是一种常用的分离纯化蛋白质的工具，其原理是利用抗体与目标蛋白质的特异性结合，将目标蛋白质从混合物中分离出来。
下面将介绍免疫亲和柱的使用方法。
一、实验前准备
1. 准备所需的免疫亲和柱、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、目标蛋白质混合物和其他必要的实验用品。
2. 检查免疫亲和柱是否完整，无损坏或泄漏。
3. 在使用前，将免疫亲和柱放置在4℃下保存，以保持其稳定性。
二、样品处理
1. 样品处理前，应将目标蛋白质从细胞或组织中提取出来，并进行初步的纯化。
2. 样品中应去除杂质，如细胞碎片、核酸、脂质等。
3. 样品应在适当的缓冲液中进行处理，以保持其稳定性和活性。
三、免疫亲和柱的使用
1. 将免疫亲和柱放置在离心管中，并加入足够的洗涤缓冲液，使其完全润湿。
2. 将样品加入免疫亲和柱中，并让其在室温下静置一段时间，以便抗体与目标蛋白质结合。
3. 将未结合的蛋白质和其他杂质用洗涤缓冲液洗掉，以保持免疫亲和柱的纯度。
4. 用洗脱缓冲液洗脱目标蛋白质，以得到高纯度的目标蛋白质。
四、注意事项
1. 在使用免疫亲和柱前，应先进行实验室安全培训，并遵守实验室安全规定。
2. 在使用免疫亲和柱时，应注意避免柱子干燥，以免影响其性能。
3. 在使用免疫亲和柱时，应注意洗涤缓冲液和洗脱缓冲液的浓度和pH
值，以保证其最佳效果。
4. 在使用免疫亲和柱时，应注意避免样品中的高浓度盐类和其他杂质，以免影响柱子的性能。
总之，免疫亲和柱是一种非常有用的分离纯化蛋白质的工具，其使用
方法简单易行，但需要注意一些细节问题，以保证其最佳效果。
免疫亲和固相萃取柱
免疫亲和固相萃取柱温馨提示：该文档是小主精心编写而成的，如果您对该文档有需求，可以对它进行下载，希望它能够帮助您解决您的实际问题。
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M1免疫亲和柱使用说明书
2013版苏微黄曲霉毒素M1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1, 从而对黄曲霉毒素M1样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
【产品性能】柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素M1（AFM1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFM1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFM1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFM1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用乙腈洗脱AFM1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL 玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（whatman934-AH，直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：乙腈（色谱级）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】----乳：将试样在水浴中加热至35℃~37℃。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
至少收集20mL试样。
----乳粉：称取10g样品（精确至0.01g）,置于250mL 的烧杯中。
将50mL已预热到50℃的水加入乳粉中，搅拌溶解。
若乳粉不能完全溶解，将烧杯在50℃的水浴中放置至少30min，仔细混匀。
将溶解的乳粉冷却至20℃，移入100ml容量瓶中，用少量的水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶中，再用水定容至刻度。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
免疫亲和柱应用说明
免疫亲和柱的应用说明1. 应用背景免疫亲和柱是一种用于分离和纯化特定蛋白质的生物技术工具。
它基于免疫学原理，利用抗体的高选择性与抗原结合，从复杂的混合物中富集目标蛋白质。
免疫亲和柱广泛应用于生物医学研究、临床诊断和制药工业等领域。
2. 应用过程免疫亲和柱的应用过程主要包括以下几个步骤：2.1 制备免疫亲和柱制备免疫亲和柱时，首先需要选择适当的抗体作为固定相。
常见的固定相材料包括琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
将抗体与固定相材料共价结合，形成具有高亲和性的固定相。
2.2 样品预处理在进行样品处理之前，通常需要对样品进行预处理。
这可能涉及去除细胞碎片、细胞核酸或其他非目标蛋白质的步骤。
预处理步骤的目的是减少样品中的干扰物，提高目标蛋白质的纯度。
2.3 样品加载将经过预处理的样品加载到免疫亲和柱上。
目标蛋白质会与固定相上的抗体结合，而非特异性结合的蛋白质则会通过洗涤步骤被去除。
2.4 洗涤通过洗涤步骤可以去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质。
洗涤缓冲液通常包含一些成分，如盐类、洗涤剂等，以提高选择性和纯度。
2.5 目标蛋白质的洗脱通过改变条件，如pH值、离子强度或添加竞争性抗原等，可以使目标蛋白质与抗体解离。
这样就可以将目标蛋白质从免疫亲和柱上洗脱下来。
2.6 纯化和分析得到目标蛋白质后，可以对其进行进一步纯化和分析。
常见的方法包括SDS-PAGE凝胶电泳、Western blotting等。
3. 应用效果免疫亲和柱在生物医学研究、临床诊断和制药工业等领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用情况：3.1 生物医学研究免疫亲和柱可用于纯化目标蛋白质，从而方便进行其结构和功能的研究。
通过纯化获得高纯度的蛋白质样品，可以进行进一步的结晶、质谱分析、活性测定等实验。
3.2 临床诊断在临床诊断中，免疫亲和柱可用于检测特定蛋白质标志物。
例如，通过使用抗体偶联的免疫亲和柱，可以富集血液中的肿瘤标志物，并通过后续分析方法（如ELISA）进行定量检测。
MS-Clean黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
MS-Clean黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
概要：
黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的真菌毒素，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物，对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力最强，还能引起突变和导致畸形。
世界各国对食品及饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
测定原理：
此免疫亲和柱以抗体-抗原特异性反应为基础，含有和黄曲霉毒素B1抗体结合在一起的凝胶。
上样时，经提取、过滤、稀释后的样品缓慢地通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱，在柱内黄曲霉毒素B1与抗体结合，其他物质不会结合而直接流出。
此后洗涤免疫亲和柱，完全除去未结合的其他物质。
最后加入甲醇，将黄曲霉毒素B1释放并洗脱，再注入到分析仪器中进行检测。
适用范围及用途：
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1检测的净化。
可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA等定量分析，适合谷物、食品和饲料等样品。
液相色谱测定条件：
检测器：荧光检测器
激发/发射波长：360 nm/440 nm 流动相：甲醇:水 = 45:55
流速：0.8 mL/min
进样量：20 uL
柱温：30 ℃
反应时间：10 min
用进样器吸取20 uL黄曲霉毒素标准工作溶液注入高效液相色谱
仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素标准溶液的高效液相色谱图。
产品参数及规格：。
免疫亲和柱安全操作及保养规程
免疫亲和柱安全操作及保养规程免疫亲和柱是生物化学实验中广泛使用的一种基础性工具，其主要作用是通过单克隆抗体或多克隆抗体与靶分子特异性结合来实现其分离、纯化和检测。
然而，在使用免疫亲和柱的过程中，安全操作和日常保养是至关重要的。
下面将详细介绍免疫亲和柱的安全操作及保养规程。
免疫亲和柱的安全操作在使用免疫亲和柱的过程中，要重视安全问题。
以下是免疫亲和柱安全操作的相关规定：1. 实验前准备在进行免疫亲和柱的实验前，需要检查免疫亲和柱的外观是否完好无损，并检查各种试剂和仪器是否符合使用要求。
进行实验时，应按照实验指导书的要求准备好试剂，避免自行调配和调整。
2. 操作前的准备在进行免疫亲和柱的操作前，应做好个人防护措施。
工作场所和仪器应保持干净整洁，并保持室内良好的通风和空气流通。
同时，工作中需要佩戴手套、口罩、防护眼镜等必要的防护措施。
3. 操作过程中的注意事项在进行免疫亲和柱的操作过程中，需要注意以下几点：•操作过程中应避免直接接触免疫亲和柱的管柱，以免对其造成破损和污染；•操作过程需要使用高纯水、冰浴、40%甲醇等试剂，所以使用过程中需要注意防止出现错误使用和误操作；•操作过程需要进行菌落计数、过滤、同步凝集等步骤，需要注意操作顺序的合理性和正确性；•操作结束后需及时将废液和废料清理干净，将免疫亲和柱存放在相应的位置上，并进行记录和标记。
免疫亲和柱的保养在使用免疫亲和柱的过程中，保养免疫亲和柱也是很重要的。
以下是免疫亲和柱的保养规程和注意事项：1. 免疫亲和柱的保存免疫亲和柱保存有一定的要求，在不使用时需要注意以下几点：•闲置时应贮存在低温干燥处，避免光照、摩擦和震动等不良因素的影响；•贮藏期不宜过长，并且需要定期检查是否有渗漏和破损的情况，及时进行更换或修理；•长期闲置的免疫亲和柱需要反复冲洗，保证其工作性能和稳定性。
2. 免疫亲和柱的清洗和再生对于已经使用过一段时间的免疫亲和柱，需要进行清洗和再生。
亲和层析柱使用说明
亲和层析柱使用说明货号名称规格说明DS0101亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）DS0103亲和层析柱3ml DS0106亲和层析柱6ml DS0110亲和层析柱10ml DS0130亲和层析柱30ml DS0150亲和层析柱50ml 一、产品说明亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用1，抗体纯化纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
黄曲霉毒素净化柱使用手册最新
黄曲霉毒素B/G免疫亲和净化柱使用手册目录1、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书2、样品处理方法3、柱后衍生技术4、实验操作注意事项5、主要技术指标和参数6、黄曲霉毒素分析实验室配置7、参考文献8、欧盟相关规定中黄曲霉毒素的限量表9、附件AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书LCTech 公司的AflaCLEAN TM免疫亲和净化柱采用单克隆抗体技术，预先在净化柱壁涂布了黄曲霉毒素B和G的抗体，当提取样品液过净化柱时，黄曲霉毒素就会被吸附保留在柱子上，而其他杂质则被排除，然后再用甲醇将黄曲霉毒素从净化柱上洗脱下来进行黄曲霉毒素检测分析的前处理，适用于食品，饲料以及相关原料中黄曲霉毒素检测时，样品的净化处理，特点是适用范围广，平行性好，回收率高，重新性好，操作简单，性价比高。
一、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱产品组成1、AflaCLEAN TM净化柱25支/盒2、批次证书和使用说明书二、实验准备1、样品处理方法：详见：“样品处理方法”2、试剂配制（1）样品提取溶剂：甲醇/水（4/1，v/v）（2）5mmol磷酸盐缓冲溶液（PBS）（pH7.2）母液配制：1）称取50.14gNa2HPO4.12H2O溶解于700ml水中。
2）称取9.66gNaH2PO4.1H2O溶解于350ml水中。
3）将上述两种溶液进行混合并加入42.5gNaCl，配制成pH7.2 5mmol 磷酸盐缓冲溶液（3）1mmol磷酸盐缓冲溶液(PBS)（pH7.2）工作液配制：取200ml 的5mmol磷酸盐缓冲溶液（pH7.2）稀释于800ml水中。
（4）磷酸盐缓冲溶液（PBS）/吐温(Tween)配制：取8ml吐温-20稀释于92mlpH7.2磷酸盐缓冲溶液中（5）HPLC 流动相配制：水/甲醇/乙腈（60/30/15,v/v）三、实验步骤1、净化柱平衡：将净化柱于室温中放置15min以上，平衡至室温。
免疫亲和柱操作流程
免疫亲和柱操作流程一、准备工作。
在开始操作免疫亲和柱之前呢，咱们得先把要用的东西都准备好哦。
就像做饭之前得把食材和厨具都备好是一个道理呀。
首先呢，得有免疫亲和柱，这可是主角呢。
然后就是咱们的样品啦，不管是液体样品还是经过处理的固体样品提取物之类的，都要准备好哦。
还有呀，像移液枪、洗耳球这些小工具可不能少，它们就像小助手一样，在操作过程中能帮大忙呢。
另外，收集管也得准备好，毕竟最后要把处理好的东西收集起来呀。
二、样品处理。
这一步也很重要哦。
如果是液体样品，那要看看有没有杂质呀。
要是有一些大颗粒或者其他不应该在里面的东西，可能得先过滤一下呢。
就像喝果汁，如果里面有果肉块太大，喝起来就不太舒服啦，所以要把它处理得更细腻一些。
要是固体样品的话，那可就复杂一点喽。
要把固体变成可以用的提取物，这可能就需要用到一些化学试剂或者特殊的处理方法啦。
比如说要把它溶解在合适的溶剂里，这个溶剂的选择也很有讲究呢，就像给衣服选合适的洗涤剂一样，得选能把样品“洗干净”的溶剂。
而且呀，处理完之后还要保证样品的浓度合适，不能太浓也不能太稀，太浓了免疫亲和柱可能会“吃不消”，太稀了又可能检测不到东西啦。
三、免疫亲和柱的平衡。
免疫亲和柱就像一个小房子，在住人之前得打扫一下，让它处于一个比较好的状态。
这时候呢，要用合适的缓冲液来平衡免疫亲和柱。
这个缓冲液就像清洁剂一样，能把免疫亲和柱里面的一些残留物质清理掉，同时也能让它适应接下来要处理的样品的环境。
把缓冲液慢慢地加到免疫亲和柱里，让它缓缓地流过柱子，就像给小房子慢慢浇水一样，要温柔一点哦。
一般来说呢，可能需要加个几毫升的缓冲液，具体的量可以根据免疫亲和柱的说明书来确定啦。
四、上样。
好啦，准备工作都做好了，就可以把咱们的样品加到免疫亲和柱里啦。
这个过程也要小心一点哦。
如果是用移液枪加样的话，要控制好速度和量。
就像给花浇水，不能一下子倒太多，也不能太慢。
慢慢地把样品加到免疫亲和柱里，让样品和免疫亲和柱里的物质充分接触。
(整理)黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱说明书 (四合一)
苏微黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2）免疫亲和柱说明书1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2, 从而对黄曲霉毒素样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
2、产品性能柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
3、测定原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，免疫亲和柱中抗体与毒素结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用乙腈洗脱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成：标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----组织匀浆机（或摇床）----粉碎机----分样筛----100mL/10mL量筒----50mL漏斗----针筒----快速定性滤纸----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）----样品瓶----转接头（配3ml免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇，氯化钠，乙腈，蒸馏或去离子水。
6、注意事项：----黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。
----使用过的容器及黄曲霉毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%,V/V）浸泡过夜。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----2~8℃储存，不得冻存。
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）7、样品处理：方法：适用于玉米、花生或中药等样品----玉米花生或中药等样品粉碎，过2mm分样筛；----25g过筛粉碎的样品加入5g 氯化钠与125mL 60%甲醇-水溶液混匀；----高速匀浆1min（或用摇床剧烈振荡20min），用快速定性滤纸过滤；----用20mL蒸馏水稀释10mL滤液，再用微纤维滤纸过滤；----取15mL上样检测。
总黄曲霉毒素免疫亲和柱
总黄曲霉毒素免疫亲和柱总黄曲霉毒素（Aflatoxin B1，AFB1）是一种由黄曲霉菌（Aspergillus flavus）和黄曲霉素菌（Aspergillus parasiticus）产生的一种强烈致癌的化合物。
该化合物在人类和动物体内会引起多种癌症，如肝癌、食管癌、胃癌等。
因此，检测和去除环境和食品中的总黄曲霉毒素对于保障人类健康至关重要。
为了检测和去除总黄曲霉毒素，研究人员开发了多种方法，其中之一就是使用总黄曲霉毒素免疫亲和柱。
这种免疫亲和柱是通过利用特异性抗体对总黄曲霉毒素进行捕捉，从而实现检测和去除的目的。
总黄曲霉毒素免疫亲和柱的制备过程通常包括以下步骤：首先，需要获得针对总黄曲霉毒素的特异性抗体。
这可以通过免疫小鼠（如小鼠、兔子等）或体外合成的方法获得。
然后，将抗体与固相材料（如琼脂糖、硅胶等）结合，形成免疫亲和柱。
接下来，将待测样品加入免疫亲和柱中，允许总黄曲霉毒素与抗体结合。
最后，用适当的缓冲液洗脱并收集样品，得到含有总黄曲霉毒素的纯净溶液。
总黄曲霉毒素免疫亲和柱的检测原理是基于特异性抗体与总黄曲霉毒素的亲和作用。
一旦待测样品中存在总黄曲霉毒素，它们会与免疫亲和柱中的抗体结合。
通过洗脱的步骤，可以将结合的总黄曲霉毒素从样品中分离出来，从而完成检测过程。
除了检测相关，总黄曲霉毒素免疫亲和柱还可以用于去除总黄曲霉毒素。
已经结合总黄曲霉毒素的免疫亲和柱可以用于净化食品和饲料，去除其中的毒素。
这是因为抗体与毒素之间的结合力较强，可以有效地捕捉和去除总黄曲霉毒素。
总的来说，总黄曲霉毒素免疫亲和柱是一种有效的工具，可以用于检测和去除环境和食品中的总黄曲霉毒素。
通过结合特异性抗体和固相材料，免疫亲和柱可以捕捉和去除总黄曲霉毒素。
然而，需要注意的是，免疫亲和柱的制备过程较为繁琐且耗时，因此需要进行全面的实验准备和操作。
对于总黄曲霉毒素的免疫亲和柱的研究和应用仍在不断发展中。
随着技术的不断进步，相信将有更多的改进和创新，提高总黄曲霉毒素的检测和去除效果，进一步保障人类的健康安全。
免疫亲和柱 柱容量 afb1
免疫亲和柱柱容量 afb1免疫亲和柱（Immunaffinity Column）是一种常用的柱层析技术，用于富集和纯化特定的分子或化合物。
本文将以AFB1（黄曲霉毒素B1）为例，介绍免疫亲和柱的原理、应用和优势。
AFB1是一种由黄曲霉菌产生的黄曲霉毒素，对人和动物具有较高的毒性。
由于其对人体健康的潜在危害，监测和分析AFB1在食品和环境样品中的含量变得尤为重要。
传统的分析方法包括高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC），但这些方法需要复杂的前处理步骤和昂贵的设备，且分离效果有限。
而免疫亲和柱作为一种快速、高效的富集和纯化技术，被广泛应用于黄曲霉毒素的检测和分析。
免疫亲和柱的原理是利用特定的抗体与目标分子之间的高度选择性结合。
在免疫亲和柱中，固定化的抗体通过特异性结合与目标分子相互作用，从而将目标分子从复杂的样品基质中富集出来。
免疫亲和柱的填料通常是以高纯度的抗体固定在固定相上，形成高效的亲和层析柱。
使用免疫亲和柱进行AFB1的富集和纯化，通常包括以下步骤：首先，将样品与免疫亲和柱进行接触，使目标分子与柱上的抗体结合。
随后，通过洗脱步骤将非目标分子洗去，使得目标分子得以富集。
最后，从柱上洗脱目标分子，用于进一步的分析和检测。
免疫亲和柱在AFB1的分析中具有许多优势。
首先，免疫亲和柱具有高度的选择性和特异性，可以有效地富集和纯化目标分子，减少样品基质的干扰。
其次，免疫亲和柱具有较高的富集效率和灵敏度，可以在短时间内获得较低浓度的目标分子。
此外，免疫亲和柱操作简便，无需复杂的前处理步骤，适用于不同类型的样品。
然而，免疫亲和柱也存在一些局限性。
首先，柱容量是免疫亲和柱的重要参数之一，它决定了柱富集目标分子的能力。
较低的柱容量可能导致目标分子无法完全富集，影响后续的分析结果。
其次，免疫亲和柱的使用寿命有限，经过多次使用后，抗体的活性和选择性可能会下降，影响分析结果的准确性。
总结而言，免疫亲和柱是一种重要的分离和纯化技术，在AFB1等目标分子的富集和纯化中具有广泛的应用前景。
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备方法及其应用[发明专利]
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(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201410726880.0(22)申请日 2014.12.03B01J 20/24(2006.01)B01J 20/281(2006.01)B01J 20/30(2006.01)B01D 15/38(2006.01)G01N 30/02(2006.01)G01N 33/577(2006.01)C07K 16/14(2006.01)(71)申请人江苏省苏微微生物研究有限公司地址214000 江苏省无锡市滨湖区钱荣路7-1号(72)发明人张东升 袁艺 杨婷婷 张海涛龚燕 匡群 叶进 诸建国(74)专利代理机构北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400代理人高之波 邬玥(54)发明名称黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备方法及其应用(57)摘要本发明涉及一种黄曲霉毒素B 1(以下简称AFB 1)免疫亲和柱的制备方法及其应用其采用重组蛋白A 琼脂糖凝胶作为固相载体，载体上的重组蛋白A 与AFB 1抗体IgG 的Fc 段定向结合，再通过双功能结合剂二甲基庚二亚胺二盐酸盐(DMP)将其交联，形成亲和介质。
该亲和柱制备方法简单，成本低、可用作一次性使用。
由于使用重组蛋白A，经改造后含有一个C 末端半胱氨酸，可单一位点偶联于琼脂糖上，降低了空间位阻，增加了重组蛋白A 与AFB1抗体IgG 的结合能力，从而使抗体的Fab 端朝向外侧，抗原结合区域不受空间位阻干扰。
因此，柱子的负载量更大，产品更加稳定，通过定向偶联单抗有效利用率提高近一倍，且在柱容量不变的情况下IAC 柱体积缩减一半，使得制备总成本节约近30％。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书9页 附图4页(10)申请公布号CN 104437408 A (43)申请公布日2015.03.25C N 104437408A1.黄曲霉毒素B 1免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，该方法步骤如下:(1)固相载体的准备：将保存的重组蛋白A 琼脂糖凝胶抽干后，用PBS 缓冲液洗涤后，用PBS 缓冲液悬浮；(2)抗体与固相载体的偶联：a、将AFB 1单克隆抗体与步骤(1)中得到的固相载体重组蛋白A 琼脂糖凝胶室温下在垂直混匀器上混合1～3h ；b、反应结束后，用步骤a 溶液总体积3～4倍的PBS 缓冲液洗涤并抽干，得反应物；c、然后在步骤b 所得反应物中加入0.2mol/L 的三乙醇胺-硼酸溶液和二甲基庚二亚胺二盐酸盐DMP 固体粉末，室温下，在垂直混匀器上混匀1～3h ；d、用10～30mL 的0.2mol/L 的三乙醇胺-硼酸溶液洗涤一次，并用20～40mL、50mmol/L 的乙醇胺-硼酸溶液重新悬浮，室温下，在垂直混匀器上混匀4～6min ；e、用20～40mL 的PBS 缓冲液洗涤后，抽干，加入5～10mL 50mmol/L，pH3.0的甘氨酸-HCL 溶液，室温下，在垂直混匀器上混匀4～6min ；f、反应结束后，用10～30mL 的质量浓度为20％乙醇-水洗涤两次，最后用等体积的20％乙醇-水重新悬浮，得到混悬液；(3)装柱：取步骤(2)制备的混悬液进行装柱，沉降，安装筛板，用质量浓度为20％的乙醇-水密封，4℃保存，即得到黄曲霉毒素B 1免疫亲和柱。
中检食安：黄曲霉毒素B1B2G1G2M1M2免疫亲和柱
黄曲霉毒素B1/B2/G1/G2/M1/M2免疫亲和柱【用途】免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC 分析。
亲和柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
本亲和柱可用于样品中黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2)的样品提取、净化。
【原理】测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
【柱容量及规格】柱容量：AFB1------300ngAFB2------300ngAFG1------300ngAFG2------300ngAFM1------100ngAFM2------100ng规格：1ml------25/50支装3ml------25/50支装【包装组成】每一个盒中包括各种规格黄曲霉毒素免疫亲和柱及1 份说明书。
【设备及耗材】（需要的材料但包装中不提供）----HPLC----衍生装置：如光化学衍生器、电化学衍生器、碘衍生装置----气控操作架----空气泵----天平----高速均质器（最高转速≥10,000r/min）或摇床----粉碎机----高速冷冻离心机（乳品检测用，可设置10℃，7,500r/min）----恒温培养箱或水浴锅（乳品检测用，可设置35℃～37℃）----分样筛：1mm 孔径----量筒：100mL/10mL----漏斗：50mL----注射器：10 mL/20mL----移液器或移液管：1mL----均质杯（或250mL 具塞锥型瓶）----样品瓶----快速定性滤纸----离心管：50ml（乳品检测用）----微纤维滤纸（Whatman 934-AH【贮藏条件及有效期】贮藏条件：2～8℃。
黄曲霉毒素b1免疫亲和柱
黄曲霉毒素b1免疫亲和柱黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1, AFB1）是由黄曲霉（Aspergillus flavus和Aspergillus parasiticus）等霉菌产生的一种有毒物质，其分子式为C17H12O6，分子量为312.3 g/mol，结构中有两个羟基、一个醛基和一个延伸的侧链结构。
黄曲霉毒素B1在高温高湿的环境下容易形成，常存在于生长于土壤和植物表面的黄曲霉菌中，例如腰果、棉花、稻谷、花生、大豆、玉米等植物中。
其毒性非常强，对人、动物和某些禽鸟都有毒害作用。
长期摄入或接触黄曲霉毒素B1的人和动物将会导致慢性中毒，并可能引发肝癌等重疾。
目前，对黄曲霉毒素B1的检测和分析已成为食品安全和动物养殖领域的一个热点问题。
传统的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、荧光分析法、酶联免疫法等，但这些方法需要昂贵的设备、复杂的试剂和专业的技术，且需要耗费较长的时间。
因此，研究发展一种简单、快速、高效的检测方法势在必行。
近年来，利用免疫亲和柱检测黄曲霉毒素B1的方法受到了广泛关注，该方法利用特异性抗体对黄曲霉毒素B1进行识别和分离，具有灵敏度高、重复性好、操作简便等优点。
其中，黄曲霉毒素B1免疫亲和柱是一种基于免疫亲和技术的检测手段，专门用于检测食品、饲料中的黄曲霉毒素B1。
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的工作原理是利用免疫亲和作用：将黄曲霉毒素B1与特异性抗体固定在免疫柱上，样品中的黄曲霉毒素B1与抗体发生特异性结合，其他物质则被快速洗脱，最终通过洗脱产物的吸收值或荧光强度等定量分析黄曲霉毒素B1的含量。
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备工艺和方法具有一定的技术难度，主要分为固相法和液相法两种。
固相法是将黄曲霉毒素B1固定在固相载体（如聚丙烯、硅胶等）上，再通过共价键或物理吸附的方式将抗体与固相载体结合，最终形成具有特定抗体亲和性的黄曲霉毒素B1免疫亲和柱。
液相法是将黄曲霉毒素B1修饰为衍生物（如半胱氨酸衍生物等），然后将抗体固定在固相载体上，最后通过液相方式将修饰后的黄曲霉毒素B1与抗体进行结合，形成黄曲霉毒素B1免疫亲和柱。
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2013版
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
使用说明书
【产品用途】
黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】
用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；
回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶
特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】
本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】
标准品（选配）。
25支/盒，1mL柱管/支；20支/盒，3mL柱管/支。
说明书1份。
【所需材料】（不提供）
（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】
（1）谷物、花生及其制品
----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
（2）酱油
----准确称取50.0g样品，加入2.5g氯化钠，
----加入甲醇-水溶液（8+2）至100mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----将滤液调至PH为中性。
----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。
（3）醋
----准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠，
----用pH7.0的磷酸盐缓冲液稀释至25.0mL，混匀，
----用定量滤纸过滤，
----加10.0mL滤液加入10.0mL pH7.0的磷酸盐缓冲液，混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤至滤液澄清，备用。
----将滤液调至PH为中性。
----准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱。
（4）植物油脂
----准确称取25.0g样品，加入5.0g氯化钠，
----加入甲醇-水（7+3）至125.0mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取15.0mL滤液加入30.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
（5）草药、香料及茶叶
----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，
----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
2013版
----准确移取10.0mL滤液并加入30.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取20.0mL混合液进行过亲和柱。
【亲和柱净化】
注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！
----将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；（3ml柱管去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与针筒固定后使用)
----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，准确移取混匀提取液注入注射器中，去掉下方堵头，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱）；
----先用10mL 0.1%的吐温20-PBS溶液清洗，再用10mL 10%甲醇-水清洗，（主要针对酱油、醋、饲料等颜色较深的样品，其他可略去）；
----用20mL 水冲洗柱子，弃去流出液，流速2滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；
----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。
收集全部洗脱液待测。
【检测方法】
（1）AFB1酶免试剂盒（苏微）检测
----用试剂盒中的样品稀释液以1:10稀释洗脱液（1份洗脱液+9份样品稀释液），取50μL进行测定。
注意：如果AFB1污染较严重，需要进一步稀释样品，洗脱液最终必须稀释到10%甲醇，详见试剂盒说明书。
（2）HPLC法检测
----可参考GB/T 18979-2003。
【注意事项】
（1）黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。
凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。
（2）不要使用过有效期的免疫亲和柱。
（3）免疫亲和柱应在2~8℃保存。
不要冷冻。
（5）按以上的提取过程，样品通过柱子的实际体积等于1g 原物质，分析方法的检测限可以通过改变进柱的样品体积而改变。
（6）称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议最低不少于5g样。
（7）黄曲霉毒素对光线敏感，因此样品及其提取液应当低温（2~8℃）、避光保存。
【保存期】
有效期为12个月。
生产日期见包装盒。
【缓冲溶液配制】
pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）：
3g Na2HPO4.12H2O，0.25g NaH2PO4.2H2O，8.7g NaCl，用水定容至1L。
pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）：
25mL 0.2mol/L磷酸二氢钾溶液与29.1mL 0.1 0.2mol/L的氢氧化钠溶液混匀后，用水定容至100mL。
0.1%的吐温20-PBS溶液：
取pH7.4的PBS溶液1L，加入100uL吐温。