RNA提取trizol试剂盒说明书
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注：各种样品的最大使用量（1ml Trizol）
操作步骤：
1. 在液氮中将组织(单头飞虱)研磨成粉末，趁液氮尚未挥发光时，将粉末转移到1.5ml离心管中。细胞经计数后直接加入离心管，然后5000rpm室温离心去上清。每100mg组织或5×106个细胞加1ml的Trizol。注意：如果组织量（1-10mg）或细胞数很少（1×102-1×104），在样品中加入800μl的Trizol，用枪头反复抽吸混匀，再加入糖原（终浓度为250μg/ml），剧烈振荡或用匀浆器匀浆。
2. 用1ml针筒，26-G号（6#）针头抽吸匀浆液两次以剪切基因组DNA，然后直接从针筒中将样品转移到无菌1.5-ml离心管中。
3. 加入200μl氯仿/异戊醇（24:1）或氯仿，剧烈振荡混匀30秒。
4. 台式离心机上，12000rpm，室温离心5分钟。
5. 将上清液小心转移到RNase-free 1.5ml 离心管中，加入等体积的异丙醇，室温下放置5分钟。（注意：不要吸取任何中间层物质，否则会出现染色体DNA污染）
6. 台式离心机上，12000rpm，室温离心5分钟。
7．小心移去上清液，防止RNA沉淀丢失。
8. 用70%酒精洗涤两次，每次700μl，12000rpm，室温离心2分钟。
9. 尽可能彻底地吸走上清，防止RNA沉淀丢失。
10. 真空离心干燥3-5分钟，或放在室温下使酒精完全挥发。
11. 沉淀用30-50μl DEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶，68℃处理10分钟。对于胰腺，肾等组织中RNase含量很高，沉淀用100%去离子甲酰胺溶解。12．DNA的分析和定量：
（1）测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。按1 OD=40μg RNA计算RNAD的产率：OD260/280在1.8-2.0视为抽提的RNA纯度很高。若需精确量化，只有浓度在4μg/ml以上的样品适于用光度计测定。
（2）进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。
注意：很少量的样品中加入糖原以提高RNA的产率。糖原（＜4μg/ml）的存在，不影响cDNA第一链的合成，也不影响PCR。