高压蒸汽灭菌器

第一节 微生物的分离 和培苏养教版选修1
微生物培养基的配制和灭菌
微生物培养基的配制和灭菌
•目的要求 •实验材料 •实验程序
目的要求
• 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配 制过程。
• 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加 压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
• 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作 及操作方法。
培养基的配制原则
碳源（carbon source）凡是提供微生物营养所需的碳
元素（碳架）的营养源，称为碳源。
碳源物质的功能：构成细胞物质；为机体提供整个生
理活动所需要的能量（异养微生物）。
微生物的碳源谱
无机含碳化合物：如CO2和碳酸盐等。 有机含碳化合物：糖与糖的衍生物、脂类、醇类。有机酸、 烃类、芳香族化合物以及各种含氮的化合物。
1.加富培养基：加富培养基是指在普通培养基里加过血、 血清、动物（或植物）组织液或其他营养物质（或生长 因子）的一类营养丰富的培养基，用以培养某种或某类 营养要求苛刻的异养微生物 2.选择培养基：选择培养基是根据某种或某一类群微生 物的特殊营养需要或对某种化合物的敏感性不同而设计 出来的一类培养基。利用这种培养基可以将某种或某类 微生物从混杂的微生物群体中分离出来。 3.鉴别培养基：普通培养基中加入能与某种代谢产物发 生反应的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征 性变化，以区别不同的微生物
培养基的配制原则
氮源(nitrogen source) 凡是提供微生物营养所需的氮元
素的营养源，称为氮源。
氮源物质的主要作用是合成细胞物质中含氮物质，少
数自养细菌能利用铵盐、硝酸盐作为机体生长的氮源与能源， 某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的条件下，也可以利用 氨基酸作为能源物质。
实验室常用的无机氮源有碳酸铵、硝酸盐、硫酸铵、尿素、 蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等。生产上常用的氮源有硝酸盐、 铵盐、尿素、氨以及蛋白含量较高的鱼粉、蚕蛹粉、黄豆饼 粉、花生饼份、玉米浆等。
培养基的配制原则
• 一、营养成分 • 二、PH值 • 三、渗透压 • 四、氧化还原电位
培养基的配制原则
一、营养成分
1. 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基， 如自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的 无机物质组成。异养做生物的培养基至少需要含有一种 有机物质。
按微生物的主要类群来说，又有细菌、放线菌、酵 母菌和霉菌之分。它们所需要的培养基成分也不同，分 别称为牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号合成培养基，麦芽 汁培养基，查氏合成培养基。
培养基的配制原则
能源
指能为微生物的生命活动提供最初能量来源的营 养物或辐射能。
微生物的能源谱：
化学物质 能源谱：
有机物：化能异养微生物的能源（同碳源） 无机物：化能自养微生物的能源（不同于碳源）
辐射能：光能自养和光能异养微生物的能源
培养基的配制原则
化能自养微生物的能源物质都是一些还原态的无机物 质，例如：NH4+、NO2-、S、H2S、H2、Fe2+ 等，能利用 这些物质作为能源的全部是细菌，如：硝酸细菌、亚硝酸 菌、硫化细菌、硫细菌、铁细菌、硫细菌、氢细菌和铁细 菌等。这些无机养料常常是双功能的（如： NH4+ 既是硝 酸细菌的能源，又是它的氮源。）
实验程序
• 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌方法
实验程序1:培养基的配制
• 培养基 • 培养基的配制原则 • 培养基的种类 • 培养基来自百度文库配制方法和步骤 • 培养基的配方及配制 • 无菌水的制备
培养基是人工配制的适合于不同微生物
生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。它 是进行科学研究，发酵生产微生物制品等 的基础 。
各营养物质之间的浓度比：培养基中各营养物质 之间的浓度比直接影响微生物的生长与繁殖和（或） 代谢产物的形成与积累，尤其是碳氮比（C／N）（碳 氮比一般指培养基中元素碳与元素氮的比值，有时也 指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之比）的影 响更为明显。
培养基的配制原则
二.控制培养基的PH值
各类微生物生长的最适pH各不相同，细菌 与放线菌生长的pH在7—7.5之间，酵母菌与霉菌 生长的pH值在4-5之间。
培养基的配制原则
四、氧化还原电位
• 氧化还原电位越高，培养基的氧化活动越 强，在厌氧菌培养中，加入还原剂，可降 低自由氧的毒害。
培养基的种类
• 据组成成分可分为:
• 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成 • 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然
物质配制而成 • 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
实验材料
• 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；
可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O等。
• 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线 杀菌灯。
• 其它：天平、牛角匙、电炉、2MHCl、2MNaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三 角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸 管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物 质的利用和代谢产物的形成与积累，常会改变培 养基的pH值，为了维持培养基pH值的相对恒定， 通常采用下列两种方式： 内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的 碳酸盐；调节培养基的碳氮比。 外源调节：按实际需要流加酸或碱液
培养基的配制原则 三、渗透压
• 注意营养物质要有适合的浓度，不能太低 满足不了生长的需要，太高则渗透压太大， 也会抑制微生物的生长
• 从培养基的物理状态可分为
1.液体培养基：不加凝固剂（常用凝固剂为琼脂）的液 体状态培养基 • 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的 固体状态的培养基或农副产品培养基 • 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂 而成的半固体状培养基。
培养基的配制原则
按照培养基的用途，可将其分为
有机营养物常有双功能或三功能作用，既是异养微生 物的能源，又是它们的碳源或氮源。
辐射能是单功能的，只为光能微生物提供能源。
培养基的配制原则
2.注意各种营养物质的浓度与配比
营养物的浓度：在一般情况下，浓度合适的营养 物质才对微生物表现出良好作用，浓度大时对微生物 生长起抑制作用，浓度小时不能满足微生物生长的需 要。