单核增生李斯特氏菌检测概述

• 废弃：在废弃前应先采取净化措施，高压 废弃：在废弃前应先采取净化措施，高压
蒸汽灭菌、化学消毒、焚烧等；
• 储存：在有适当标记的密封容器内储存。 储存：在有适当标记的密封容器内储存。
检测程序 ---增菌 ---增菌
目前常用的单核增生李斯特氏菌检测 增菌肉汤主要有半量Fraser肉汤、 Fraser肉 增菌肉汤主要有半量Fraser肉汤、 Fraser肉 FB）、UVM（ 汤（FB）、UVM（Modified University of Vermont broth，也叫UVM1）、LEB broth，也叫UVM1 UVM1）、LEB （Listeria enrichment broth）和BLEB broth）和BLEB （buffered Listeria enrichment broth） broth）
• 分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等， 分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX等，
1996年至1999年，因单核增生李斯特氏菌回收的食 1996年至1999年，因单核增生李斯特氏菌回收的食 品种类（来源：USDA及FDA报告） 品种类（来源：USDA及FDA报告）
致病性及其治疗
• 该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流
感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼 吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发 热、抽搐、昏迷、自然流产或死婴、脑膜炎、败 热、抽搐、昏迷、自然流产或死婴、脑膜炎、败 血症直至死亡。
• 不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化 不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化
生物学特性
---血清型 ---血清型
• 根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单 根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单
增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、 增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、 1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、 1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、 4c、4d、 4c、4d、4e 和“7”。
• 对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死， 对碱和盐抵抗力强，60-70℃ 20min可杀死，
70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、 70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、 2.5%福尔马林20min 2.5%福尔马林20min 可杀死此菌；
• 湿热灭菌（121℃，至少15min）和干热灭菌 湿热灭菌（121℃，至少15min）和干热灭菌
UVM
• UVM只有选择性没有区别性 UVM只有选择性没有区别性 • 加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄，作为选择性 加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄，作为选择性
因子。虽然其中含有七叶灵，但是没有添 加柠檬酸铁铵，不能发生黑色的颜色反应。
LEB和 LEB和BLEB
• 只有选择性没有区别性 • LEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、 LEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、
半量Fraser肉汤和Fraser肉汤 半量Fraser肉汤和Fraser肉汤
• 具有选择性和区别性。 具有选择性和区别性。 • 加入柠檬酸铁铵和七叶灵，起到区别的作用。李斯特 加入柠檬酸铁铵和七叶灵，起到区别的作用。李斯特
氏菌可以水解七叶灵，与培养基中的铁离子反应，使 培养基变黑，可直观的从培养液的颜色就可以判断是 否有单核李斯特氏菌的生长。
（160-170℃，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线 160-170℃，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线 和γ射线敏感； 射线敏感； 性）、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。
• 该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素（已产生抗
流行病学
• 分布百度文库广泛存在于自然界中，土壤、地表 分布：广泛存在于自然界中，土壤、地表
• 致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、 致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、
3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。 3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。
生物学特性
---抵抗力 ---抵抗力
• 该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青
储饲料和食品中能长期存活；
单核增生李斯特氏菌 检测概述
张惠媛
2005年 2005年6月
内容
• 简介李斯特氏菌属 • 单核增生李斯特氏菌生物学特性 • 流行病学 • 致病性 • 实验室危害及其预防 • 检测程序 • 快速检测方法
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新 的分类学研究表明，其分为六个种： 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 无害李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi） 在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核 在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核 增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动 增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动 物发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类 的李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中 的李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中 最有检测意义的是单核增生李斯特氏菌。
• 氯化锂、吖啶黄和萘啶酮酸作为选择性因子。 氯化锂、吖啶黄和萘啶酮酸作为选择性因子。 • 半量Fraser肉汤与Fraser肉汤所用的添加剂一样 半量Fraser肉汤与Fraser肉汤所用的添加剂一样
半量Fraser肉汤：萘啶酮酸10mg/L，吖啶黄12.5mg/L 半量Fraser肉汤：萘啶酮酸10mg/L，吖啶黄12.5mg/L Fraser肉汤：萘啶酮酸20mg/L，吖啶黄的25mg/L Fraser肉汤：萘啶酮酸20mg/L，吖啶黄的25mg/L
实验室危害
• 不是一种普遍的与实验室相关的传染病，
目前只有少数有报道的案例发生；
• 直接摄取是最普遍的一种感染方式，除此 直接摄取是最普遍的一种感染方式，除此
之外，暴露在该菌高浓度的气溶胶中，也 可通过眼睛和破损的皮肤、粘膜进入体内 造成感染。
注意事项
• 生物安全2级，操作时应有相应的防污染设 生物安全2
边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大， 变得不透明。
• 在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰 7%的血平板上，菌落通常也不大，灰 • 在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)琼 0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)琼
白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β 白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶 血环。 血环。 脂上，用45° 脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解 剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰 色。
• 由该菌造成的脑膜炎的致死率可高达70%，败血 由该菌造成的脑膜炎的致死率可高达70%，败血
症的死亡率达50%，围产期或新生儿感染的死亡 症的死亡率达50%，围产期或新生儿感染的死亡 率超过80%，怀孕期妇女的感染，母亲通常能存 率超过80%，怀孕期妇女的感染，母亲通常能存 活下来。 或与氨基糖苷类抗生素一起用药。
施，在进行可能产生气溶胶的操作时，应 在生物安全柜内完成；
• 在直接接触有感染性的材料时，必须穿着
实验服，戴手套和护目镜；
• 怀孕的妇女应避免接触传染物。 怀孕的妇女应避免接触传染物。
操作要求
• 溅洒：使气溶胶沉降，穿着防护服装，用 溅洒：使气溶胶沉降，穿着防护服装，用
纸巾轻轻覆盖溅洒处，加入1%次氯酸钠溶 纸巾轻轻覆盖溅洒处，加入1%次氯酸钠溶 液，由周边向中心加，在清理之前要留充 足的接触时间（30min 足的接触时间（30min）； 30min）；
增生李斯特氏菌，4 8%的水产品、5 增生李斯特氏菌，4-8%的水产品、5-10% 的奶及其产品、30%以上的肉制品及15% 的奶及其产品、30%以上的肉制品及15% 以上的家禽均被该菌污染。
• 相关食品：鲜奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤 相关食品：鲜奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤
其是软奶酪）、冰激凌、生的蔬菜、发酵 过的生肉制作的香肠、生的和加工过的禽 肉、各种生的肉类、生的和烟熏的鱼肉。 约有85-90%的病例是由被污染的食品引起 约有85-90%的病例是由被污染的食品引起 的。
• 抗生素治疗，用青霉素或氨苄青霉素注射给药，
感染人群
• 感染剂量未知，但与该菌的毒力和易感人群的年
龄、免疫状态有关。
• 易感者：
孕妇/胎儿— 孕妇/胎儿—围产期和新生儿的感染； 接受皮质激素、抗癌剂治疗、器官移植 治疗、 艾滋病患者等免疫缺损者； 癌症病人— 癌症病人— 尤其是白血病的患者； 不太常见的报道— 不太常见的报道—糖尿病、肝硬化、哮喘和溃疡 性结肠炎的患者； 年纪较大的人； 没有免疫缺陷的健康的人，食用污染该菌尤其是 大量污染该菌的食品后，也有患病的危险。
• 20-25℃以4根周生鞭毛运动，在37℃只有较少的 20-25℃ 根周生鞭毛运动，在37℃ • 无芽孢、无荚膜。
生物学特性
---培养特性 ---培养特性
• 兼性厌氧； • 在20--25℃培养有动力，穿刺培养2-5天可 20--25℃培养有动力，穿刺培养2
见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下 可见翻跟斗运动。
水、污水、废水、青储饲料、动植物及其 食品中均有该菌存在，所以动物很容易食 入该菌，并通过口腔入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播
• 寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳 寄主范围：哺乳动物、鸟类、鱼类、甲壳
类和昆虫
流行病学
• 据报道，有1-10%的人类肠道中存在单核 据报道，有1 10%的人类肠道中存在单核
• 生长温度范围为2-42℃（也有报道在0℃能 生长温度范围为2 42℃（也有报道在0
缓慢生长），最适培养温度为35--37℃ 缓慢生长），最适培养温度为35--37℃。
• pH范围pH4.4-pH9.6。 pH范围pH4.4-pH9.6。
生物学特性
---培养特性 ---培养特性
• 在固体培养基上，菌落初始很小，透明，
生物学特性
---菌体形态及染色特征 ---菌体形态及染色特征
• 革兰氏阳性； 革兰氏阳性； • 小的、类似球形杆菌，0.4~0.5×0.5~2µ m，在有 小的、类似球形杆菌，0.4~0.5×0.5~2µ
些培养基中稍弯，两端钝圆，单个、成短链、细 胞彼此连成V 胞彼此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排 列，在较老的或生长不良的培养物中，可能形成 丝状； 鞭毛或1 鞭毛或1根鞭毛；
萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入 萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入 的丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不 丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不 含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应
• BLEB是在LEB基础上加入缓冲体系：磷酸二 BLEB是在LEB基础上加入缓冲体系：磷酸二
氢钾和磷酸氢二钠
检测程序 ---分离 ---分离
生物学特性
---生化反应 ---生化反应
• 触酶阳性，氧化酶阴性。 触酶阳性，氧化酶阴性。 • 能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、
乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖 乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖 （迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵木 （迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵木 糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉 子糖、卫矛醇和纤维二糖。 氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟 氨酸均阴性，VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。 氨酸均阴性，VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。
致病机理
• 单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致病性
与毒力机理如下： 1、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠 细胞与巨噬细胞； 2、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧 化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物 （为杀菌的毒性游离基团）分解； 3、溶血素，即李氏杆菌素O，可以从培养物上清液 溶血素，即李氏杆菌素O 中获得，有α 中获得，有α和β两种，为毒力因子。