单增李斯特氏菌检测详解PPT课件
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李斯特菌感染PPT课件
李斯特菌感染临 床观察
基本概述
• 李斯特菌（学名：Listeria monocytogenes），又名单核球增多性 李斯特菌、李氏菌，是一种兼性厌氧 细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯 特菌是革兰氏阳性菌，属厚壁菌门， 取名自约瑟夫·李斯特。它主要以食 物为传染媒介，是最致命的食源性病 原体之一 。
• 3．溶血素，即李斯特杆菌溶血素O，可以从 培养物上清液中获得，为SH活化的细胞溶素， 有 α和β两种，为U
2019/7/11
临床表现
1、脑膜炎是本病最常见的表现形式。起病 可急可缓。新生儿可在通过产道时或产 后被感染，产后1～3周发病，主要表现 为拒食、多哭、易激惹、高热、恶心、 呕吐、嗜睡、惊厥、囟门突出及脑膜刺 激征。成人患者常表现高热、头痛、恶 心、呕吐、颈强直、昏迷，个别病人还 可出现抽搐、偏瘫、脑疝。白细胞增高 以粒细胞为主，偶见单核细胞增高。脑 脊液改变与其他化脓性脑膜炎相似。
特点
• 1、季节性特点：春季可发生，而发病 率在夏、秋季呈季节性增长。
• 2、分布广：存在于土壤、水域(地表 水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、 鱼、鸟、野生动物、家禽。
• 3、生存环境可塑性大：能在2-42℃下 生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰 箱冷藏室内较长时间生长繁殖。
• 4．适应范围大：酸性、碱性条件下都 适应。
防控措施
• 1、李斯特菌通常存在于潮湿区域和辅助 清洗设备中，例如：地面、排水沟、洗 涤池、天花板、冷凝水、拖把、海绵、 盐水冷冻设备及剥皮机。因此，控制李 斯特氏菌的数量对减少深加工过程中的 污染是很有必要的。
• 4、孕妇患李斯特氏菌病后可能表现为亚 临床型，亦可有急性发热而与流感相似， 有时又类似肾盂肾炎。病情多不严重，但 妊娠5个月后发病者，胎儿可能受严重影 响。
基本概述
• 李斯特菌（学名：Listeria monocytogenes），又名单核球增多性 李斯特菌、李氏菌，是一种兼性厌氧 细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯 特菌是革兰氏阳性菌，属厚壁菌门， 取名自约瑟夫·李斯特。它主要以食 物为传染媒介，是最致命的食源性病 原体之一 。
• 3．溶血素，即李斯特杆菌溶血素O，可以从 培养物上清液中获得，为SH活化的细胞溶素， 有 α和β两种，为U
2019/7/11
临床表现
1、脑膜炎是本病最常见的表现形式。起病 可急可缓。新生儿可在通过产道时或产 后被感染，产后1～3周发病，主要表现 为拒食、多哭、易激惹、高热、恶心、 呕吐、嗜睡、惊厥、囟门突出及脑膜刺 激征。成人患者常表现高热、头痛、恶 心、呕吐、颈强直、昏迷，个别病人还 可出现抽搐、偏瘫、脑疝。白细胞增高 以粒细胞为主，偶见单核细胞增高。脑 脊液改变与其他化脓性脑膜炎相似。
特点
• 1、季节性特点：春季可发生，而发病 率在夏、秋季呈季节性增长。
• 2、分布广：存在于土壤、水域(地表 水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、 鱼、鸟、野生动物、家禽。
• 3、生存环境可塑性大：能在2-42℃下 生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰 箱冷藏室内较长时间生长繁殖。
• 4．适应范围大：酸性、碱性条件下都 适应。
防控措施
• 1、李斯特菌通常存在于潮湿区域和辅助 清洗设备中，例如：地面、排水沟、洗 涤池、天花板、冷凝水、拖把、海绵、 盐水冷冻设备及剥皮机。因此，控制李 斯特氏菌的数量对减少深加工过程中的 污染是很有必要的。
• 4、孕妇患李斯特氏菌病后可能表现为亚 临床型，亦可有急性发热而与流感相似， 有时又类似肾盂肾炎。病情多不严重，但 妊娠5个月后发病者，胎儿可能受严重影 响。
单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
产等。它广泛存在于自然界中。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都可被污染。 该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 其易感人群主要为孕妇、老人、新生儿和免疫缺陷人群。大多数发达国家人类李斯特菌病 发生率约为每一百万人2-15例，死亡率为13-34% 加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌病暴发，导致十几人死亡。很多国家都 已经采取措施来控制食品中的单增李斯特氏菌，并制定了相应的标准。
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征
选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈.
PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
协同溶血试验 (cAMP):
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯特菌 , 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板 中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金黄色葡萄 球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血也增强, 而伊氏 李斯特菌（L.ivanovii）在马红球菌附近的溶血增 强。
PALCAM琼脂
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征
选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈.
PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
协同溶血试验 (cAMP):
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯特菌 , 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板 中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金黄色葡萄 球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血也增强, 而伊氏 李斯特菌（L.ivanovii）在马红球菌附近的溶血增 强。
PALCAM琼脂
单增李斯特氏菌检测详解
鉴定
血清学检验 菌悬液于80℃水域中加热1h，离心弃上清， 剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清 学玻片凝集试验。
单核细胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B， 1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C， 4D，4E，7
质量控制
每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株 进行质量控制。 样品制备的同时，在空白对照FB1增菌液中 加入新鲜配制的每毫升含有10个～100个单 核细胞增生李斯特氏菌的稀释液1mL和阴性 培养物，按检验程序进行同步检验。
鉴定
溶血试验
刺种7％羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核
细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性
对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～ 48h。
单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环
西尔李斯特氏菌
窄小的β溶血环
绵羊李斯特氏菌
大的β溶血环
其他
不溶血
鉴定
动力试验 穿刺SIM半固体培养基，于室温（20℃～25℃）
显色培养基
CHROMagarTM Listeria上单细胞增生李斯特 氏菌菌落特征
225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取 1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二 次增菌25h±1h。
VIDAS快速筛选（可选）
FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。
分离培养
取增菌液一环，划线分离于选择性培养基 OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。
报告结果
协同溶血试验、血清学试验可根据需要进 行，常规检验可不进行这些试验。
报告阳性结果：检出单核细胞增生李斯特 氏菌。
食品中单增李斯特菌检测
食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。
2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。
基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。
单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。
李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。
此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。
人也可作为无症状携带者。
据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。
李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。
多单在，有时是V字型排列。
无芽孢，不产生荚膜。
在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。
在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。
本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。
对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。
加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。
在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。
在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。
在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。
不形成菌环、菌膜。
在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。
李斯特菌的检验ppt课件
2019
.
11
临床表现
• 感染LM的孕妇多表现有宫内感染并可发 生早产、流产、死胎，预后险恶。产下 的婴儿常在24~72h内死亡。
• 有时可侵犯上呼吸道而呈现咽峡炎的症 状，常伴有局部淋巴腺炎。
• 可引起人的心内膜炎，并可感染皮肤、 眼睛、泌尿道而引起皮肤损伤、结膜炎、 尿道炎等症状。
2019
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12
18
李斯特菌鉴定
• 除个别菌外，触酶阳性，氧化酶阳 性，水解七叶苷，不水解尿素、明 胶和，其不它产种生类糖H2产S、酸吲。哚。发酵葡萄糖
• 属的鉴定：革兰染色，湿标本中的 翻转运动试验，触酶阳性，发酵D葡萄糖产酸，水解七叶苷，VP阳性， 甲基红阳性。
2019
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19
李斯特菌鉴定
• 种的鉴定：窄的β溶血环，CAMP表 现和金黄色葡萄球菌有协同溶血作 用，不发酵木糖，微量鉴定系统 API-Listeria（法国生物梅里埃）和 Micro-IDListeria（OrganonTeknika）， 菌落DNA探针杂交。
• 血清型分型确认。
2019
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20
致病力检测
• 动物试验可用于分离的李斯特菌的潜在 毒力，如小鼠腹膜内接种、兔眼结膜接 种（Anton）试验、鸡胚绒毛膜尿囊接种。 但并非是常规的，因为大多数刚分离出 的单核细胞增生性李斯特菌株都有毒力。
• 已经建立了一种敏感的免疫抑制小鼠模 型，少量的有毒力菌即可导致小鼠在3d 内死亡。
• 脑脊液中及组织中单核细胞增生性李斯特菌的DNA 能以PCR方法检测。应该在专门的实验室中操作， 方法的敏感性、特异性高，当抗生素的使用影响细 菌的分离时尤其有用。
2019
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41
LM的实验室检测方法
食品微生物检验——单增李斯特菌
食品微生物检验——单增李斯特菌食品中单增李斯特检测技术李斯特氏菌属包括七个种：单核细胞增生李斯特氏菌绵羊李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌威尔斯李斯特氏菌西尔李斯特氏菌格氏李斯特氏菌默氏李斯特氏菌其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏菌无致病性。
单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。
它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。
它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх 1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状。
兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性。
该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。
该菌营养要求不高，在20--25℃培养有动力，穿刺培养2－5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8－4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45度角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
发酵多种糖类，产酸不产气。
如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
单核增生李斯特氏菌检测
在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整 齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。 在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色， 刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。 在0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)琼脂上， 用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察， 菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
单核增生李斯特氏菌 检测概述
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类 学研究表明，其分为六个种： 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 绵羊（伊氏）李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 英诺克（无害）李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi） 在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增生 李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物发 病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的李 斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最有检 测意义的是单核增生李斯特氏菌。
LB和BLB
只有选择性没有区别性
LEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、 萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入 的丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不 含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应 BLB是在LB基础上加入缓冲体系：磷酸二 氢钾和磷酸氢二钠
检测程序---分离
分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX 等。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有β－D－ 葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七叶灵， 产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应而使菌落为 棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性 李斯特氏菌病都能发生这种反应
单核增生李斯特氏菌检测概述
革兰氏阳性； 小的、类似球形杆菌，0.4~0.5×0.5~2µm，在有些
培养基中稍弯，两端钝圆，单个、成短链、细胞彼 此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排列， 在较老的或生长不良的培养物中，可能形成丝状； 20-25℃周生鞭毛运动，在37℃只有较少的鞭毛或1根
鞭毛；
无芽孢、无荚膜。
第三页，共48页。
内容
简介李斯特氏菌属 单核增生李斯特氏菌生物学特性 流行病学 致病性 实验室危害及其预防 检测程序 快速检测方法
第一页，共48页。
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类学
研究表明，其分为六个种：
单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 绵羊（伊氏）李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 英诺克（无害）李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）
第七页，共48页。
生物学特性
---血清型
根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增 李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、 1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、 4e 和“7”。
致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、 3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。
血平板
单核增生李斯特氏 菌 ATCC 19117
36h，35℃培养
第三十页，共48页。
血平板
无害李斯特氏菌 ATCC 33090
36h，35℃培养
第三十一页，共48页。
血平板
培养基中稍弯，两端钝圆，单个、成短链、细胞彼 此连成V形，或成群的细胞沿长轴方向平行排列， 在较老的或生长不良的培养物中，可能形成丝状； 20-25℃周生鞭毛运动，在37℃只有较少的鞭毛或1根
鞭毛；
无芽孢、无荚膜。
第三页，共48页。
内容
简介李斯特氏菌属 单核增生李斯特氏菌生物学特性 流行病学 致病性 实验室危害及其预防 检测程序 快速检测方法
第一页，共48页。
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类学
研究表明，其分为六个种：
单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 绵羊（伊氏）李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 英诺克（无害）李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）
第七页，共48页。
生物学特性
---血清型
根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增 李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、 1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、 4e 和“7”。
致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、 3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。
血平板
单核增生李斯特氏 菌 ATCC 19117
36h，35℃培养
第三十页，共48页。
血平板
无害李斯特氏菌 ATCC 33090
36h，35℃培养
第三十一页，共48页。
血平板
6、单核增生李斯特氏菌检测
致病性及其治疗
该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流 感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼 吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发 热、抽搐、昏迷、自然流产或死婴、脑膜炎、败 血症直至死亡。 由该菌造成的脑膜炎的致死率可高达70%，败血 症的死亡率达50%，围产期或新生儿感染的死亡 率超过80%，怀孕期妇女的感染，母亲通常能存 活下来。
25g样品+225ml BLEB基础（加入丙酮酸钠）
30℃ 4hr
加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮
30℃ 24hr和48hr
划线接种OXA平板
35℃ 24hr-48hr
科玛嘉李氏菌显色培养基
35℃ 24hr
TSA-YE分纯
35℃ 24-48hr
过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发 酵试验（木糖、鼠李糖）
无
FDA
BLEB+Phy （30℃，4h ）
BLEB+Phy+ 三种抑菌剂 （30℃， 20/44h）
单核增生李斯特氏菌 检测概述
内 容
简介李斯特氏菌属 单核增生李斯特氏菌生物学特性 流行病学 致病性 实验室危害及其预防 检测程序 快速检测方法
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类 学研究表明，其分为六个种： 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 绵羊（伊氏）李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 英诺克（无害）李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi） 在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增生 李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物发 病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的李 斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最有检 测意义的是单核增生李斯特氏菌。
产单核细胞李斯特菌PPT课件
临床意义
产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种强致病性的食源性 病原菌,已被WHO列为4种主要的食源性疾病之 一
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SUCCESS
THANK YOU
2019/7/22
生物学特性
1.形态染色 2.培养特性 3.生化反应
5.抵抗力
革兰阳性短小杆菌，幼龄菌呈阳性，在陈旧培养基 中呈阴性。大小：0.5-2um×0.4-0.5um,通常成双排列， 偶尔可见双球菌或丝状。有鞭毛，不产生芽胞，一般 不形成荚膜，在含血清的葡萄糖蛋白胨水中形成黏多 糖荚膜。
本菌为兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通培养基上能生长。最是 生长温度为30~37℃。在4℃能生长故可进行冷增菌。在血琼脂平板上 于35℃经18~24h培养，能产生狭窄的β溶血环，菌落为灰白色，直径 1~2mm。在肉汤中均匀混浊生长，表面有薄膜形成。在半固体培养基 内，可出现倒伞形生长。
在土壤、粪便、和干草中能长期存 活。耐盐：200g/LNaCl溶液中长期存活， 耐碱：25g/LNaOH溶液中20Min才能杀 灭，不耐酸、热，60~70℃5~20Min可 死亡。对一般消毒剂敏感，70%乙醇 5min即可杀灭。
微生物学检验
直接涂片
200g/lNaCl心 脑浸汤增菌
标本
分离培养
血平板
35℃培养，在24h内科发酵多种糖类，如葡萄糖、果糖、麦芽糖和 水杨素，产酸不产气，甲基红和V-P反应阳性，触酶阳性，能水解精氨 酸产氨。不还原硝酸盐，不形成吲哚，不液化明胶和凝固血浆，不分 解尿素，能水解七叶苷，有时可产生硫化氢。
菌体及鞭 毛抗原不
相关主题
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19
CAMP (Staphylococcus aureus)
Listeria monocytogenes
Staphylococcus aureus
20
鉴定
API鉴定试验 可代替硝酸盐还原、MR-VP、三糖铁、糖发 酵、尿素酶和CAMP等试验。
21
鉴定
血清学检验 菌悬液于80℃水域中加热1h，离心弃上清， 剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清 学玻片凝集试验。
菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm， 在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍 成黑色，直径2mm～3mm，除在菌落周围有一 环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。
挑取5个或更多的可疑菌落，接种于TSA-YE。
6
鉴定
蓝色菌落检验 用45°斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现 蓝灰色到蓝色。 （设标准菌株对照）
23
报告结果
协同溶血试验、血清学试验可根据需要进 行，常规检验可不进行这些试验。
落动氢染验验试还试
酶色
验原验
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋/ ＋
三糖铁 试验
产酸， 不产H2S
糖发酵利用
葡麦七甘鼠木 萄芽叶露李糖 糖糖苷醇糖
＋＋＋－＋－
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ 不产H2S
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － V － ＋ 不产H2S
L. monocytogenes L. ivanovii
英诺克李斯特氏菌 L. innocua
威尔斯李斯特氏菌 L. welshimeri
西尔李斯特氏菌 L. seeligeri
格氏李斯特氏菌 L. grayi
蓝 典 过 革 溶 动 尿 硝 MR
色型氧兰血力素酸∣
菌 运 化 氏 试 试 酶 盐 VP
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － V ＋ ＋ 不产H2S
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ 不产H2S
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － ＋/ 产酸， ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋ 不产H2S
18
鉴定
协同溶血试验 （cAMP）
在羊血琼脂平板琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核
细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性
对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～ 48h。
单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环
西尔李斯特氏菌
窄小的β溶血环
绵羊李斯特氏菌
大的β溶血环
其他
不溶血
11
鉴定
动力试验 穿刺SIM半固体培养基，于室温（20℃～25℃）
威尔斯李斯 特氏菌
－ －
－
－ ＋
d ND ＋ ND ND －
2
样品的存放与制备
冷冻样品：应于2℃～5℃解冻，且不超过18小 时；若不能及时检验，应置于－15℃保存。
非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能 及时检验，应置于4℃冰箱保存，在24h之内检 验。
无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋 中加225mL FB1增菌液中，充分均质。
进出口食品中单核细胞增生 李斯特氏菌检测方法 SN/T 0184.1-2005
1
李斯特氏菌
特征
格氏李斯 英诺克李斯 特氏菌 特氏菌
β -溶血
－
－
CAMP
－
－
(Staphylococcus
aureus)
CAMP
－
－
(Rhodococcus
equi)
甘露醇
＋
－
α甲基-D－甘 ND
＋
露糖苷
L-鼠李糖
－
d
可溶性淀粉
＋
－
D-木糖
－
－
马尿酸盐水解 －
＋
硝酸盐还原
－
－
小鼠致病力
－
－
绵羊李斯特 氏菌
＋ －
＋
－ － － － ＋ ＋ － ＋
单核细胞增 生李斯特氏 菌 ＋ ＋
－
－ ＋
＋ － － ＋ － ＋
默氏李斯特 氏菌
－ －
－
＋ ND
d ＋ － － ＋ －
西尔李斯特 氏菌
＋ ＋
－
－ － － ND ＋ ND ND －
7
鉴定
典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状 杆菌，可见轻微的旋 转翻滚。 （设标准菌株对照）
注：压片法或悬滴法 暗光
8
鉴定
革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应
注：陈旧培养物多转为阴性。
9
鉴定
过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片
上，滴加1滴3％的过氧化氢溶液，李斯特氏 菌呈过氧化氢酶阳性反应。
培养48h。 李斯特氏菌有动力，呈典型的伞状生长。
12
鉴定
硝酸盐还原试验 接种于硝酸盐肉汤，于35℃培养5d。 李斯特氏菌为阴性。
13
鉴定
MR－VP试验 接种于MR－VP肉汤中，于35℃培养48h。 李斯特氏菌为阳性反应。
14
鉴定
三糖铁试验 接种于TSI，35℃培养5d。 李斯特氏菌斜面和底层产酸，不产硫化氢。
3
增菌培养
225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取 1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二 次增菌25h±1h。
4
VIDAS快速筛选（可选）
FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。
5
分离培养
取增菌液一环，划线分离于选择性培养基 OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。
单核细胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B， 1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C， 4D，4E，7
22
质量控制
每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株 进行质量控制。 样品制备的同时，在空白对照FB1增菌液中 加入新鲜配制的每毫升含有10个～100个单 核细胞增生李斯特氏菌的稀释液1mL和阴性 培养物，按检验程序进行同步检验。
15
鉴定
尿素酶试验 穿刺尿素琼脂斜面，于35℃培养5d。 李斯特氏菌尿素酶试验阴性。
16
鉴定
糖发酵试验 接种0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、 鼠李糖、木糖发酵管内，35℃培养24h～48h， 阴性继续培养到第5天。
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李斯特氏菌菌种鉴别特征
中文菌名
学名
单核细胞增生 李斯特氏菌
绵羊李斯特氏菌
划一直线，使两线平行，
在平行线上分别接种金黄 色葡萄球菌ATCC49444和 马红球菌ATCC6939，在两 线之间垂直接种，与两线 相近但不相交，于35℃培 养24h～48h后，观察相交 处溶血情况。
窄的β溶血带
L. monocytogenes
不溶血 宽的β溶血带
L. innocua
L. ivanovii