尿液蛋白质定量测定方法及临床意义(精)

尿液蛋白质定量测定方法及临床意义
[ 11-05-31 11:39:00 ] 作者：杨桂平编辑：studa090420
【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白质,每天排出量在
150mg 以下,其中以白蛋白占多数,随不同病种有一定量的球蛋白和其它蛋白。

随着肾病科研工作的开展,以观察患者每天排出蛋白质的量以示病情的变化,因此尿液蛋白质定量在临床上有实际应用价值,已成为医院化验室常规的检验项目。

【关键词】尿液蛋白质检测
1 丽春红-S法
尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀，将沉淀物溶解于碱性溶液中，此时溶液呈紫色，显色深度与蛋白质浓度成正比。

1.1试剂
三氯乙酸-丽春红-S试剂原液：称取丽春红-S 1.0 g，加入到
1 000 ml 300 g／L三氯乙酸中溶解。

三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液：将原液用蒸馏水按1：10稀释，放置室温稳定数月。

蛋白定性试剂。

0.2 mol／L氢氧化钠溶液。

蛋白标准曲线：把定值蛋白稀释成不同的浓度，按操作测定其吸光度，以吸光度为横坐标，以稀释后的蛋白浓度为纵坐标绘制标准曲线。

1.2操作先做尿蛋白定性试验，以适当稀释标本。

在试管中加入100μl标本，再加入1 ml三氯乙酸一丽春红-S应用液，混匀后以3 000 r ／min离心15分钟，吸去上清液，倒置于洁净滤纸上。

在沉淀中加入
0．2 mol／L氢氧化钠溶液l ml，用560 nm波长测定其吸光度，查标准曲线的蛋白含量。

1.3参考值46.5±18．1 mg／L
1.4注意事项：尿液如被稀释应乘以稀释倍数。

尿中血红蛋白含量>5 mg／L时影响结果。

离心后上清必须全部弃去，若沉淀中夹带有丽春红-S影响比色结果。

2 双缩脲比色法
以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质，在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物，与标准液比色即可得出尿中蛋白质的含量。

2.1试剂
蛋白沉淀液：称取磷钨酸7.5 g，加入30 ml蒸馏水、95％乙醇385 ml、浓盐酸25 ml。

双缩脲液：(1)称取枸橼酸钠34．6 g，无水碳酸钠20 g，加入
120 ml蒸馏水使其溶解；(2)称取硫酸铜3．46 g，加入20 ml蒸馏水使其溶解。

将(1)、(2)混合，加入蒸馏水至200 ml，备用。

0．75 mol／L氢氧化钠溶液。

蛋白标准液(1．5 g／L)：称取150 mg结晶型冻干人血清白蛋白，加入100 ml的3 g／L苯甲酸溶液溶解。

2.2操作取5 ml 24小时混合尿液，2 500～3 000 r／min离心5分钟，取上清备检。

混匀放入56℃水浴15分钟，取出后离心，倾上清留沉淀。

0．75 mol／1
NaOH 1．5 1．5 1．5
双缩脲液0．1 0．1 0．1
各管混匀置室温10分钟，在540 nm波长，以空白管调“0”比
色。

2.3结果计算尿蛋白含量(g／L)=测定管吸光度÷标准管吸光度×1．5
2.4参考值<150 mg／24 h尿、
2.5注意事项：记录24小时尿量，将尿液混合后再离心。

先做尿标本蛋白定性试验，若为阳性再做本试验。

尿蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。

若疑有药物干扰时，可将尿蛋白沉淀物用无水乙醇洗涤3次再操作。

3 考马斯亮蓝法
在酸性介质中考马斯亮蓝与尿液中的蛋白质NH3+基团结合，发生由棕色到蓝色的颜色变化，光谱吸收峰由465 nm移至595 nm。

与标准液相比即可测出尿蛋白质含量。

3.1试剂
考马斯亮蓝溶液：(1)称取75 mg考马斯亮蓝G-250溶于40 ml甲醇中；(2)加入蒸馏水800 ml、85％的浓硫酸100 ml、浓盐酸5 ml；(3)称取30 mg十二烷基磺酸钠，溶于(2)中；(4)加蒸馏水至1 000 ml，用滤纸过滤至棕色瓶中，室温保存。

蛋白标准液(1g/L) 以3g/L苯甲酸溶液稀释蛋白质标准。

3.2操作
留取24小时尿标本混匀，取5 ml尿液离心后取上清备检。

室温放置5分钟，以空白管调“0”，波长600 nm读取光密度。

3.3结果计算
尿蛋白质含量(g／L)=测定管吸光度÷标准管吸光度×1．0
3.4参考值(20．6～172．6)mg／24 h
3.5注意事项：考马斯亮蓝溶液要定期新鲜配制，过滤后才可使用。

测定标本时应同时测定蛋白质标准管。

尿中的水杨酸类药物、麝香草酚和去污剂等可产生颜色干扰。

尿标本蛋白质定性试验在(+++)以上需稀释后测定。