微生物检测原理

1、胆盐乳糖培养基原理

蛋白胨为氮源、乳糖为碳源，胆酸盐为抑制剂（抑制革兰氏阳性细菌），溴甲酚紫指示剂（变黄则细菌产酸）该培养基为选择性培养基，选择性生长利用乳糖为碳源的革兰氏阴性菌，根据是否产酸产气判断样品是否为大肠菌群。

2、玫瑰红纳培养基原理

胨提供碳氮源，葡萄糖提供能源，磷酸二氢钾提供缓冲剂，硫酸镁提供微量元素，玫瑰红纳未选择抑菌剂，可抑制细菌的生长，并可减缓莫些霉菌生长过而导致菌落蔓延生长通常黑曲霉为孢子黑色白色念珠菌为奶油色

3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基原理

酵母浸出粉提供B族维生素能促进酵母生长

4、靛基质实验原理

莫些细菌可能分解蛋白质中的色氨酸生成吲哚，吲哚的存在可用显色表现，吲哚对对二甲基氨基苯醛结合成玫瑰吲哚

5、乙酰甲基甲醇生成实验(v-p)

莫些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸缩合脱羧生成乙酰甲基甲酸，乙酰甲基甲酸可在强碱条件下被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的瓜基生成红色化合物

6、枸橼酸盐利用实验原理

不同的细菌有不同的酶，分解产物各有差异，以枸橼酸纳为唯一碳源于Ph为7的培养基上，产气杆菌分解枸橼酸生成碳酸盐，是培养基由中性变为碱性培养基中指示剂溴麝香草酚蓝（ptb)有浅绿色变为深蓝色，此为枸橼酸利用实验阳性，大肠杆菌因不能利用为阴性

7、曙红亚甲基蓝琼脂平板实验原理

蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；琼脂是培养基凝固剂；曙红钠和亚甲蓝是抑菌剂和pH指示剂，可抑制革兰氏阳性菌，在酸性条件下产生沉淀，形成紫黑色菌落或具黑色中心的外围无色透明的菌落

MUG培养基在大肠杆菌中检测的原理

8、一种基于荧光方法检测大肠杆菌的ＭＵＧ培养基，其主要组分和含量（重量份）为：ＭＵＧ０．０３０－０．１，乳糖３－１０，ｐＨ值为７．０－７．５。由于本发明在培养基中加入胆盐，可抑制部分革兰氏阳性细菌的生长，有利于大肠杆菌的生长。在培养基中加入乳糖，同时考察培养液产气和产荧光两个因素，大大减少假阳性，提高检测准确性。

微生物限度检查法

附录ⅪJ 微生物限度检查法

微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检

查方法，包括染菌量及控制菌的检查。

供试品应随机抽样。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。

检查的全过程，均应严格遵守无菌操作，严防再污染。

除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25

～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。

检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。

培养基及其制备方法

除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。

1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法（附录Ⅺ H）

2.玫瑰红钠琼脂培养基

胨5g 玫瑰红钠0.0133g

葡萄糖10g 琼脂15～20g

磷酸二氢钾1g 水1000ml

硫酸镁0.5g

除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。

3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)

胨10g 琼脂15～20g

酵母浸出粉5g 水1000ml

葡萄糖20g

除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。

4.胆盐乳糖培养基(BL)

胨20g 磷酸二氢钾 1.3g

乳糖5g 牛胆盐 1.3g

氯化钠5g （或去氧胆酸钠0.5g）

磷酸氢二钾 4.0g 水1000ml

除乳糖、牛胆盐外,取上述成分，混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,

煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。

5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)

营养琼脂培养基100ml 曙红钠指示液2ml

20％乳糖溶液5ml 亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml

取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液,

摇匀，倾注平皿。

6.麦康凯琼脂培养基(MacC)

胨20g 1％中性红指示液3ml

乳糖10g 琼脂15～20g

牛胆盐5g 水1000ml

氯化钠5g

除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌,冷至60℃，倾注平皿。

7.4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide，MUG)培养基

胨10g 磷酸二氢钾0.9g

硫酸铵5g 磷酸氢二钠（无水） 6.2g

硫酸锰0.5mg 亚硫酸钠40mg

硫酸锌0.5mg 去氧胆酸钠1g

硫酸镁0.1g MUG 75mg

氯化钠10g 水1000ml

氯化钙50mg

8、磷酸盐葡萄糖胨水培养基

胨7g 葡萄糖5g

磷酸氢二钾 3.8g 水1000ml

取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管，121℃灭

菌15分钟。

9、枸橼酸盐培养基

氯化钠5g 枸橼酸钠（无水）2g

硫酸镁0.2g 溴麝香草酚蓝指示液20ml

磷酸氢二钾 1.0g 琼脂15～20g

磷酸二氢铵1g 水1000ml

除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为6.9±0.1，加入

琼脂，加热溶化,加入指示液，混匀。分装于小试管,灭菌,置成斜面。

注：所用琼脂应不含游离糖，用前用水浸泡冲洗。

10、无菌对氨基苯甲酸试液取对氨基苯甲酸0.1g，加入含有10ml水的带塞试管中,121℃灭菌

20分钟。

11、玫瑰红钠试液取玫瑰红钠试液0.1g，加水使溶解成75ml。

无菌枸橼酸钠－氯化钠试液取枸橼酸钠0.5g，加0.9％氯化钠溶液10ml，121℃灭菌20分

钟。

12、草酸铵试液取草酸铵1g，加水溶解使成100ml。

13、α-萘酚乙醇试液取α-萘酚6.0g，加无水乙醇溶解使成100ml。

14、靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛5.0g，加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶

解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，或取对二甲氨基

苯甲醛1.0g，加入95％乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸20ml徐徐滴入。

15、稀释剂

0.9％无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。

16、靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛5.0g，加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶

解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，或取对二甲氨基

苯甲醛1.0g，加入95％乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸20ml徐徐滴入。

17、稀释剂

0.9％无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟

18、无菌磷酸盐缓冲液(pH7.2) 取磷酸氢二钠25.8g与磷酸二氢钠4.4g，加水稀释至1000ml，

121℃灭菌20分钟。

19、指示液

20、中性红指示液取中性红1.0g，研细，加95％乙醇60ml使溶解，再加水至100ml。

变色范围pH6.8～8.0（红→黄）。

21、甲基红指示液取甲基红0.1g，加95％乙醇300ml,使溶解后，加水至500ml,即得。

22、亚甲蓝指示液取亚甲蓝0.5g，加水溶液使成100ml。

酚磺酞指示液取亚甲蓝0.5g，加1mol/L氢氧化钠溶液2.82ml，使溶解，再加水至100ml。

变色范围pH6.8～8.4（黄→红）。

23、溴甲酚紫指示液取溴甲酚紫1.6g，加95％乙醇溶解使成100ml。

变色范围pH5.2～6.8（黄→紫）。

24、溴麝香草酚蓝指示液取溴麝香草酚蓝0.4g,加1mol/L氢氧化钠溶液0.64ml使溶解,再加水至100ml。变色范围pH6.0～7.6（黄→蓝）。

25、酸性品红指示液取酸性品红0.5g，加水100ml使溶解,再逐渐加1mol/L氢氧化钠溶液16ml，每加1滴均应将溶液充分摇匀后再加第2滴,直至溶液呈草黄色；于沸水内保持15分钟，再静置2小时，滤过，即得。变色范围pH6.0～7.4（黄→红）。

26、口服固体高密度聚乙烯瓶检验标准指示液取曙红钠2.0g，加水溶解使成100ml。