实验三、细菌的致病性
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（前，后30min）
• 注意事项：肛温的测量
（体温计使用、肛门位置)
兔耳缘静脉注射
兔耳部血管分布清晰。兔耳中央为动脉，耳外缘 为静脉。内缘静脉深不易固定，故不用。外缘静脉 表浅易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手 指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈，左手食指和中指 夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及 小指垫在下面，右手持注射器连6号针头尽量从静脉 的远端刺入，移动拇指于针头上以固定针头，放开 食指和中指，将药液注入，然后拔出针头，用手压 迫针眼片刻。
实 验 三
细 菌 的 致 病 性
细 菌 的 致 病 作 用
细菌的毒力物质
菌 体 结 构
侵袭力
侵 袭 性 物 质 外 毒 素
毒
素
内 毒 素
细菌的侵袭力的构成
菌体表面结构
荚膜 、微荚膜及糖萼 菌毛或非菌毛粘附素
侵袭性物质
侵袭性蛋白及侵袭性酶类
细 菌 所 产 生 的 毒 素
外毒素： 内毒素：
游离血浆凝固酶——试管法
材料与方法：
实 验 兔 血 浆：０．２ｍｌ 金葡菌菌液：０．１ｍｌ 对 照 兔血浆：０．２ｍｌ 肉 汤：０．１ｍｌ
混
匀
３７ ℃ ，１小时
内毒素的发热试验
• 试验动物：家兔
(正常体温范围 38.5-39.5 0C)
• 菌液： 伤寒杆菌培养液
（加热处理，取0.5-1ml）
• 结果观察：注射前后肛温的变化
兔耳缘静脉注射
操作
• 内毒素发热反应
准备
• 鲎试验
上次实验结果观察
内毒素检测方法——鲎试验
• 试剂：鲎试剂
内毒素、生理盐水
• 试验结果观察：
鲎试验(+)：出现凝固
药敏试验
（抗生素敏感试验）
目的要求:
1、了解抗生素敏感试验的操作方法 2、初步作为抗生素敏感试验结果的 判断 3、了解常用抗生素的抗菌谱
敏感情况
抗药 中度敏感 高度敏感 抗药 中度敏感 高度敏感
其它抗生素
纸片法
• 材料：
1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾 杆菌、绿脓杆菌 2、培养基：普通琼脂平板 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉 素1单位，其它抗生素为10微克
绿 脓 杆 菌
葡 萄 球 菌
大 肠 杆 菌
判断：
抑制菌圈直径 （mm） 青霉素 <10 10-20 >20 <10 10-15 >15
细菌致病作用的实验内容
血浆凝固酶实验
试管法 玻片法
Baidu Nhomakorabea
内毒素发热反应及鲎试验
血 浆 凝 固 酶
• 是致病性葡萄球菌产生的一种侵袭 性物质
• 具有抗吞噬作用及血清中杀菌物质 对细菌的杀灭作用
• 使感染局灶化
血浆凝固酶的种类及检测方法
• 游离血浆凝固酶
—— 试管法检测
• 结合血浆凝固酶
—— 玻片法检测
内毒素与外毒素的比较
种类
来源
内毒素
革兰阴性菌
外毒素
革兰阳性菌部及分革兰阴性菌 活菌分泌或细菌溶解散出 蛋白质
存在部位 细胞壁成分、细菌裂解释出 化学成分 脂多糖
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用 弱、各种内毒素作用大致相同， 强、对机体组织器官有选择性， 引起休克，发热，DIC等 引起特殊临床表现 抗原性 弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素 强，能刺激机体形成抗毒素， 经甲醛脱毒后能形成类毒素
• 注意事项：肛温的测量
（体温计使用、肛门位置)
兔耳缘静脉注射
兔耳部血管分布清晰。兔耳中央为动脉，耳外缘 为静脉。内缘静脉深不易固定，故不用。外缘静脉 表浅易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手 指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈，左手食指和中指 夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及 小指垫在下面，右手持注射器连6号针头尽量从静脉 的远端刺入，移动拇指于针头上以固定针头，放开 食指和中指，将药液注入，然后拔出针头，用手压 迫针眼片刻。
实 验 三
细 菌 的 致 病 性
细 菌 的 致 病 作 用
细菌的毒力物质
菌 体 结 构
侵袭力
侵 袭 性 物 质 外 毒 素
毒
素
内 毒 素
细菌的侵袭力的构成
菌体表面结构
荚膜 、微荚膜及糖萼 菌毛或非菌毛粘附素
侵袭性物质
侵袭性蛋白及侵袭性酶类
细 菌 所 产 生 的 毒 素
外毒素： 内毒素：
游离血浆凝固酶——试管法
材料与方法：
实 验 兔 血 浆：０．２ｍｌ 金葡菌菌液：０．１ｍｌ 对 照 兔血浆：０．２ｍｌ 肉 汤：０．１ｍｌ
混
匀
３７ ℃ ，１小时
内毒素的发热试验
• 试验动物：家兔
(正常体温范围 38.5-39.5 0C)
• 菌液： 伤寒杆菌培养液
（加热处理，取0.5-1ml）
• 结果观察：注射前后肛温的变化
兔耳缘静脉注射
操作
• 内毒素发热反应
准备
• 鲎试验
上次实验结果观察
内毒素检测方法——鲎试验
• 试剂：鲎试剂
内毒素、生理盐水
• 试验结果观察：
鲎试验(+)：出现凝固
药敏试验
（抗生素敏感试验）
目的要求:
1、了解抗生素敏感试验的操作方法 2、初步作为抗生素敏感试验结果的 判断 3、了解常用抗生素的抗菌谱
敏感情况
抗药 中度敏感 高度敏感 抗药 中度敏感 高度敏感
其它抗生素
纸片法
• 材料：
1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾 杆菌、绿脓杆菌 2、培养基：普通琼脂平板 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉 素1单位，其它抗生素为10微克
绿 脓 杆 菌
葡 萄 球 菌
大 肠 杆 菌
判断：
抑制菌圈直径 （mm） 青霉素 <10 10-20 >20 <10 10-15 >15
细菌致病作用的实验内容
血浆凝固酶实验
试管法 玻片法
Baidu Nhomakorabea
内毒素发热反应及鲎试验
血 浆 凝 固 酶
• 是致病性葡萄球菌产生的一种侵袭 性物质
• 具有抗吞噬作用及血清中杀菌物质 对细菌的杀灭作用
• 使感染局灶化
血浆凝固酶的种类及检测方法
• 游离血浆凝固酶
—— 试管法检测
• 结合血浆凝固酶
—— 玻片法检测
内毒素与外毒素的比较
种类
来源
内毒素
革兰阴性菌
外毒素
革兰阳性菌部及分革兰阴性菌 活菌分泌或细菌溶解散出 蛋白质
存在部位 细胞壁成分、细菌裂解释出 化学成分 脂多糖
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用 弱、各种内毒素作用大致相同， 强、对机体组织器官有选择性， 引起休克，发热，DIC等 引起特殊临床表现 抗原性 弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素 强，能刺激机体形成抗毒素， 经甲醛脱毒后能形成类毒素