植物组织培养 第一章试题 2

第1章《实验室及基本操作》复习题及参考答案

一、填空：

1、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水发生器、酸度计等。

★2、培养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分）、③植物生长调节物质、④碳水化合物、⑤其它物质。

3、培养基最常用的碳源是蔗糖，使用浓度在1%-5% 常用3 %。

4、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养基渗透压。

5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L 之间。

6、驯化的目的：在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮，提高苗的移裁成活率。

★7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值

高：有利于根的形成和愈伤组织的形成；

低：有利于芽的形成。

8、培养基灭菌一般在108 kPa的压力下，锅内温度达121 ℃，维持20-30 min。

9、选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。

10、诱导胚状体比诱导芽的优点：(1)数量多、(2)速度快、(3)结构完整。

11、试管苗的生态环境：高温且恒温、高湿、弱光、无菌。

12、培养基中加入活性炭的目的：利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响。

★13、筛选培养基的方法：单因子试验法、多因子试验法、光谱实验法

★14、植物培养技术：灭菌、接种、培养、驯化四个环节

★15、试管苗的驯化注意：基质、温、光、水、肥、气的综合管理

二、名词解释：

1、MS培养基（MS culture medium）：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。

★2、母液：是欲配制液的浓缩液。配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。好处: ①保证各物质成分的准确性②配制时的快速移取③便于低温保藏。

3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。

4、玻璃化现象（vitrification phenomenon）：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

5、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

6、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

7、接种：在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。

三、问答题

1、一般组织培养的操作工序：

（1）、培养器皿的清洗；

（2）、培养基的配制、分装和高压灭菌；

（3）、无菌操作——材料的表面灭菌和接种；

（4）、将培养物放到培养室培养；

（5）、试管苗的驯化、移栽和初期管理。

★2、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？并列举常见的种类

(1) 生长素类：主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化；促进细胞伸长；诱导

根的分化，促进生根。如：IAA（吲哚乙酸）；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)

(2）细胞分裂素类：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。抑制衰老，减少叶绿素分解，有保鲜效果。如：包括6—BA(6—苄基腺嘌呤)、Kt ( 激动素)、Zt (玉米素)等。

★3、常用的培养基有哪些？说明其特点

(1）MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高

(2)white培养基：无机盐浓度较低，适于生根培养。

(3)N6培养基：KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。广泛应用于禾谷类植物的花

粉和花药培养。

(4）B5培养基：主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。适宜双子叶植物特别是木本植物的培养

★4、如何配制MS培养基？

(1）配制母液：一般母液配成比所需浓度高10-100倍的浓缩液，配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

(2)配制方法：

①将母液按顺序摆放

②取适量的蒸馏水加入配制容器中

③按需要量依次取母液及生长调节物质

④加入蔗糖（30g/L）溶解

⑤定容

⑥调pH值

⑦加琼脂(6-10g/L)，完全融化后，分装至培养瓶中，封口

⑧高压灭菌

★5、如何对外植体进行表面消毒？

(1) 将需要的材料用水洗干净。

(2) 表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。

(3) 灭菌剂处理：0.1%升汞10分钟、或在2%次氯酸钠液中浸泡20-25分钟。

(4) 用无菌水冲洗3-5次左右

6、接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求？

(1) 光照：愈伤组织的诱导不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般12－16h/d，光照

度1000－5000lx。

(2) 温度：一般25±2℃

(3) 湿度：培养室内的湿度要求保持70％－80％的相对湿度。

7、论述离体培养污染产生的原因及防治措施。

污染：污染原因从病源分面主要有细菌和真菌和两大类。

原因：（1）外植体材料消毒不彻底

（2）培养基灭菌不彻底