色谱定量计算三种方法,归一化法,内标法和外标法

色谱法是根据色谱峰的面积或高度进行定量分析的。色谱定量计算方法很多，目前比较广泛应用的有归一化法、内标法和外标法。

1. 归一化法

如果试样中所有组分均能流出色谱柱并显示色谱峰，则可用此法计算组分含量。设试样中共有n个组分，各组分的量分别为m1，m2，……，m n，则i种组分的百分含量为：

归一化法的优点是简便、准确，进样量的多少不影响定量的准确性，操作条件的变动对结果的影响也较小，对组分的同时测定尤其显得方便。缺点是试样中所用的组分必须全部出峰，某些不需定量的组分也需测出其校正因子和峰面积，因此应用受到一些限制。

2. 内标法

当试样中所有组分不能全部出峰，或只要求测定试样中某个或几个组分时，可用此法。

准确称取m(g)试样，加入某种纯物质ms(g)作为内标物，根据试样和内标物的质量比m s/m及相应的色谱峰面积之比，基于下式可求组分i的百分含量W i%：

因为

所以

内标物的选择条件是：内标物与试样互溶且是试样中不存在的纯物质；内标物的色谱峰既处于待测组分峰附近，彼此又能很好地分开且不受其它峰干扰；加入量宜与待测组分量相近。

内标法的优点是定量准确，操作条件不必严格控制，且不象归一化法那样在使用上有所限制。缺点是必须对试样和内标物准确称重，比较费时。

3. 外标法(亦称标准曲线法)

该法是在一定色谱操作条件下，用纯物质配制一系列不同的浓度的标准样，定量进样，按测得的峰面积对标准系列的浓度作图绘制标准曲线。进行试样分析时，在与标准系列严格相同的条件下定量进样，由所得峰面积从标准曲线上即可查得待测组分的含量。

外标法的优点是操作和计算简便，不需要知道所有组分的相对校正因子，其准确度主要取决于进样量的准确和重现性，以及操作条件的稳定性。