微生物酵素抑菌功效研究

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香料香精化妆品
2008年 8 月第 4期
FLAVOUR FRA GRANC EC OSMETIC S Au gust, 2008, NO 4
研究报告
微生物酵素抑菌功效研究
作 者 100037 任 清
* *
北京工商大学植物资源研究开发重点实验室 , 北京 ……… 董银卯 于晓艳 潘 妍 刘永国
通讯作者简介
酵素 ( enzy me) , 又称为 酶! , 是生物体内 的催 化剂。人体内 有许多种酵素 , 它们互 相协同, 使 人 体的新陈代谢、 能量摄 取、 成长和 繁殖等生命现 象 能够有条不紊地进 行。所以身体 中酵素的多少 及 其活性高低 , 对人体的青春、 健康、 衰老及疾病有重 要影响。 微生物酵素 是以新鲜蔬菜、 水果为原 料, 经 多 种益生菌发酵而产生的, 含有丰富的酶、 维生素、 矿 物质和次生代谢产物的微生物制剂。 痘, 即痤疮, 是最常见的皮肤问题之一, 易发于 面部、 胸前和上背部等 皮质分泌旺盛 的部位, 而 且 青春期多见 , 主要表现为白头粉刺、 黑头粉刺、 炎性
样 品 2% 膏状酵素 抑制率 菌 种 014 015 016 50. 07 97. 35 98. 46 67. 65 32. 43 无 抑制率 / % 2% 粉状酵素 抑制率 / %
2. 3
对面部菌的抑制 用取样器刮 取受试者洗面前 后的面部菌进 行
培养。作为对照的空白液体培养液澄清, 表明实验 过程中配制的液体 培养基未染菌。洗面前刮菌 培 养液、 洗面后刮菌培 养液的试管有 明显浑浊现象。 将试管中菌液涂布到固体培养基中。 12 h 后, 空白 固体平板均没有微生物生长 , 表明实验过程中配制 的固体培养基平板、 取样器均未染菌。四名受试者 使用普通洗面奶洗面后的菌液涂 板上的细菌生 长 总数与洗面前菌液涂板上的细菌 生长总数无明 显 差别 , 证明洗面奶中添加的各种洗涤剂无任何除菌 效果 ; 使用膏状酵素洗面奶和粉状酵素洗面奶洗面 后的菌液涂板上的细菌生长总数 明显少于洗面 前 菌液涂板上的细菌生长总数 , 差别肉 眼可见, 表 明 添加膏状酵素和粉状酵素的洗面 奶有较好的除 菌 功效 , 且膏状 酵素洗 面奶 效果优 于粉 状酵 素洗 面 奶。典型受试者固体培养基培养微生物结果如图 1 至图 3 所示。 3 小 结 实验通过液体培养法 证明膏状酵素 与粉状酵 素都有一定的抑制痤疮的功效。此外 , 将酵素作为 一种抑菌有效成分加入化妆品或洗浴用品中, 还可 以起到有效的抑菌功效。 从上世纪 80 年代开始, 人们利用现代生物技术 提取对皮肤有益的酵 素, 将其加 入美容产品中 , 以 加强肌肤 的机能, 改善皮肤状况。目前, 国外的许 多化妆品品 牌, 如欧洲 碧欧 泉, 日本 的资 生堂、 高 丝, 韩国的 T he f ace shop 等都推出了酵素化妆品系 列。就我国国内而言 , 对酵素的 研究并不多 , 相关 资料也 非常少。作 为一种 纯天 然的、 安 全性 较高 的、 多功能的 化妆品原料, 酵素的发展前 景是十分 广阔和乐观的。
任清( 1969 ) , 男, 讲师, 博士 , 主要 从事天然活性成分的分离提取及化 妆品的开发研究 。


采用液体培养法 , 对两种微生物酵素抑菌 功效进行评价。结果表明 : 膏状 酵素对大肠 杆菌、 铜绿假单胞 菌、 金 黄色葡萄球
菌以及三种痤疮病原菌 ( 014 、 015 、 016 ) 的抑制率 分别为 19 . 21 % 、 33. 20 % 、 38 . 01% 、 50. 07 % 、 97 . 35% 、 98. 46 % , 粉状 酵素分 别为 33 . 15% 、 0、 5 . 02% 、 67 . 65% 、 32 . 43 % 、 0 。通过对使用酵素洗 面奶前 后人面 部菌的分 离培养 也可以 看出 , 膏状酵 素和粉 状酵素都有一定的抑菌功效。
关键词
微生物酵素 抑菌 痤疮
Evaluation on the Байду номын сангаасnti germ Efficacy of Microbial Ferment
DON G Y inm ao Y U X iaoy an PA N Yan L I U Yongg uo R EN Qi ng
*
( Beijing T echnolog y and Business U niversity , Beijing Key L aborat ory of Plant Resources Resear ch and De v elo pm ent, Beijing 100037, China)
研究报告
1 材料与方法 1. 1 实验材料与仪器 材料 : 膏状酵素 ( 紫红 色 ) 和粉状酵素 ( 白 色 ) , 由北京保罗科技发展有限公 司提供; 大肠杆菌、 铜 绿假单胞菌、 金黄色葡萄球菌 疮患者面部痤疮中分离。 仪器 : 厌氧培养箱 YQX #型号, 上海新苗医疗 器械制造有限公司; 其它均为实验室常规仪器。 1. 2 致化妆品腐败菌抑制实验 大肠杆菌、 铜绿假单胞菌、 金黄色 葡萄球菌 是 最常见的导致化妆品腐败的菌株。 实验方法为 : 配制 L B 液体培养基 ; 在培养基中 加入菌液, 使菌的最 终浓度为 10 cfu/ mL ; 在 37 ∃
样 品 2% 膏状酵素 抑制率 菌 种 大肠杆菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 19. 21 33. 20 38. 01 33. 15 无 5. 02 抑制率 / % 2% 粉状酵素 抑制率 / %
[ 3]
, 本实验室保存 ; 三
种痤疮相关病原菌 ( 014、 015、 016) , 本实验室从 痤
Abstract Ev aluate the ant i ger m efficacy o f tw o kinds of micro bial ferment thr ough liquid culture. T he results sho wed that the anti ger m eff icacy of the pasty o ne o n EC, PA , SA, 014 , 015 , 016 ( thr ee kinds of ger m lead to acnes) w ere 19. 21 % , 33 . 20 % , 38. 01 % , 50. 07 % , 97. 35 % , 98. 46 % respectively; and the po wder o ne wer e 33 . 15 % , 0, 5. 02 % , 67. 65 % , 32 . 43 % , 0 , respectively. Cultiv ate t he ger m which was separated from people s faces befo re and after w ashing using micr obial ferment facial w ash, we could see that bo th of the pasty and the po wder micr obial ferment hav e the ability of anti g erm. Key words micro bial fer ment anti g erm acne
恒温摇床中培养 24 h 后, 在 600 nm 下测吸光度; 最 后计算抑制率。其中设置样品 ( 液体培养基 + 药品 + 菌) 、 空白 ( 液体培 养基 ) 、 对照 1 ( 液体 培养基 + 菌) 、 对照 2( 液体培养基 + 药品 ) 各三组平行 , 每组 取其平均值。抑制率公式为: 抑制率= 100% 1. 3 样品- 对照 2 % 100% 对照 1- 空白
痤疮相关病原菌抑制实验 实 验 方 法 为: 配 制 厌 氧 培 养 基 ( 酵 母 浸 粉
0. 5% 、 葡萄糖 0. 5 % 、 L 胱氨酸 0. 05 % 、 硫乙醇酸钠 0. 05% 、 蛋白 胨 1. 5% 、 NaCl 0. 25 % 、 琼 脂 1. 8% , pH = 7. 0 ) ; 接入痤疮相关病原菌, 使菌的最终浓度 为 106 cfu/ m L; 在厌氧培养箱中 37 ∃ 培养 48 h 后 , 在 600 nm 下测吸光度; 最后计算抑制率。其 中设 置样品 ( 液体培养基 + 药品 + 菌 ) 、 空白 ( 液体 培养 基) 、 对照 1( 液体培养基 + 菌) 、 对照 2 ( 液体培养基 + 药品) 各三组平行 , 每组取其平均 值。抑制率 公 式为 : 抑制率= 100% 1. 4
收稿日期 : 2008 01 11
丘疹 , 严重的可以有结节和囊肿。痤疮的发病机理 有很多, 包括 : 皮质分泌过多、 毛囊皮脂腺导管角化 过度、 痤疮相 关病原菌增殖和过 度的免疫反应 , 此 外还与遗传及心理因素有关
[ 1]
。其中痤疮相关病原
菌的增殖是导致痤疮生长的一个重要原因 , 目前抑 制痤疮相关病原 菌的生长也是祛痘化妆 品抑制青 春痘的一个最主要途径。此外, 对致化妆品腐败菌 和人体面部菌的 抑制也是化妆品开发十 分关注的 问题。人的脸一直暴露在空气中, 会接触到无数细 菌, 因此酵素洗面奶的除菌效果成为测定洗面奶洗 净度的一项重要指标。测 定微生物酵素 对这三类 菌的抑制作用 , 对微生物酵素作为化妆品功效原料 的开发有十分重要的作用, 对其在化妆品中的利用 有十分重要的意义。 w ww . ffc journa l. co m ∀ 27 ∀
对痤疮相关病原菌的抑制 酵素对痤疮相关病原菌的抑制率如表 2 。膏状
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研究报告
酵素对三种菌的抑制率都较高 , 其中对 015 和 016 两种菌 的抑 制率几 乎达到 了 100 % 。粉 状酵素 对 014 和 015 两种菌的抑制率相对较高 , 对 016 抑制 率结果不太理想。由此可以看出 , 膏状酵素和粉状 酵素都可以作为治疗青春痘的功效成分, 其中膏状 酵素的祛痘效果较好。 表2 酵素对痤疮相关病原菌的抑制率
6 [ 2]
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FLAVOUR FRAGRAN CE COS METICS A ugu st, 2008, NO 4
去离子水至 100% , 用搅拌机搅拌至各项混合均匀, 洗面奶即配成。 待测的样品分别为浓度为 5 % 的膏状酵素和浓 度为 5% 的粉状酵素溶液。其中膏状酵素水溶性好 可直接溶解, 而粉状酵素中含有不溶于水的成分, 所 以在配制化妆品之前要先将粉状酵素进行预处理, 目 的是除去其中的不溶性成分。粉状酵素预处理流程 为: 于去离子水中加入一定量酵素 , 水浴下在 37 ∃ 搅 拌 10 min, 然后在 8 000 r/ min 下离心 10 min, 便得到 粉状酵素预处理液。普通洗面奶不加任何样品, 对比 酵素洗面奶, 排除洗面奶中洗涤剂的功效。配制洗面 奶搅拌时, 搅拌速度要尽可能慢, 以免剧烈搅拌使洗 面奶起沫, 影响洗面奶的质量。 1. 4 . 2 酵素抑菌实验测定方法 ( 1) 测试对象 选定四名受试者 , 均为在校大学 生, 平均 年龄 为 23 岁 , 其中一名 为干性皮肤 , 三名为油性 皮肤。 受测皮肤无明显伤口。 ( 2) 洗面奶抑菌效果的检测 实验方法参照文献 的方法。洗面前后, 用已灭 菌的取 样器刮取额头、 鼻两侧样品少 许, 置于盛有 5 mL 液体 LB 培养基的试管中。 37 ∃ 、 200 rpm/ min 振荡培养 16 h。观察试管中菌液的混浊度。将上述 试管中菌液分别稀释至 10 6 、 10 7 倍 , 取 100 L 菌液 涂布于固体 LB 培养基上, 37 ∃ 恒温培养 12 h~ 16 h 。 观察平板上菌落的生长密度、 形态。 2 2. 1 结果与分析 对致化妆品腐败菌的抑制 酵素对致化妆品腐败菌的抑制率如表 1, 膏状 酵素对三种菌均有一定的抑制率, 而粉状酵素只对 大肠杆菌有 一定的 抑制 , 对另 外两 种菌 几乎 没有 抑制。 样品- 对照 2 % 100% 对照 1- 空白 表 1 酵素对致化妆品腐败菌的抑制率
酵素洗面奶对面部菌的抑制实验 分别配制普通洗面奶、 膏状酵素洗面奶和粉状
1. 4. 1 洗面奶的配制 酵素洗面奶。配制方法如下: 将样品加入已搅拌至互溶的 C 14 S( 0. 1% ) + 甘油 ( 3. 0% ) , 混合后再依次加 入: EDT A ( 20% ) 、 CAB( 10% ) 、 6501 ( 5 % ) 、 M 550 ( 0. 5 % ) 、 葡 聚 糖 ( 3% ) 、 尿囊素 ( 0. 2 % ) 、 DMDMH ( 0. 2% ) 、 最后 加 ∀ 28 ∀ w ww . ffc journa l. co m 2. 2
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