器官移植的实验诊断

器官移植的实验诊断

(一)器官移植的相关概念

供体(donor)与受体或宿主(recipient/host)

宿主抗移植物反应(host versus graft reaction/disease, HVGR/D)与移植物抗宿主反应(graft versus host disease, GVHD)

主要组织相容性复合物(major histocom-patibility complex, MHC)与主要组织相容性抗原(MHA)/人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA), 引起最主要最严重的排斥反应

(二)移植前检测

⒈血型鉴定：

ABO血型：正反定型

Rh血型：弱D型

——遵循输血原则，避免预存抗体导致的超急排

⒉HLA配型：HLA-A、B、C、DRB1、DQB1

高分辨分型(high resolution)：骨髓移植

低分辨分型(low resolution)：心/肺/肾移植

HLA基因分型技术

➢序列特异性引物法（Sequence Special Primer，SSP）

➢序列特异性寡核苷酸探针法（Sequence special oligonucleotide probe，SSO）

➢DNA序列测定法（Sequencing-Based Typing，SBT）

➢Luminex流式技术-序列特异性寡核苷酸探针反向杂交法（FLOW-SSOP ）

➢基因芯片或微阵列技术（Genechip）

⒊群体反应抗体(panel reactive antibody, PRA)

ELISA法：用已知抗原检测特异性抗体，根据机体免疫状况选择供者，决定手术时机。识别不可接受的抗原型别

未致敏:0-10%；轻度致敏:11-30%；中度致敏:31-50%；高度致敏:＞51%

⒋淋巴细胞毒交叉试验(complement dependent cytotoxicity ,CDC)

方法：受者血清+供者淋巴细胞(混合/T/B淋巴细胞）

混合淋巴细胞死亡数＜10%→阴性，＞50%→阳性10~50%时参照患者PRA及供者HLA相合程度

T淋巴细胞毒反应→>10%→阳性

B淋巴细胞毒反应→>10%阳性→酌情考虑

——阳性者为肾移植禁忌

(三)移植后常见检测项目

1.移植排斥反应(HVGR)监测

(1)PRA检测：指导用药，监测排斥

(2)外周血T细胞及其亚群检测

T细胞总数、CD4+T细胞、CD8+T细胞

CD4+/CD8+T细胞↑＞1.2→排斥机会↑

CD4+/CD8+T细胞↓＜1.08→感染机会↑

(3)NK细胞毒活性监测：急性排斥发生→NK细胞毒活性↑

(4)细胞因子及粘附分子测定：急性排斥发生→IL-2、4、6、IFN-γ、TNF

2.骨髓移植后GVHD监测

(1)嵌合状态检测

动态观察和评价受者植入状态的有效指标

染色体核型分析

红细胞抗原

HLA

限制性长度片段的多态性(RFLP)

可变数目串联重复序列(VNTR)

微卫星DNA / 短串联重复序列(short tandem repeats,STR )：23对染色体上选取16个特异性位点

完全嵌合——混合嵌合——受者型(移植失败)

(2)其它实验室检测：骨髓象、肝功、三大常规等

3.感染监测

(1)病毒感染：巨细胞病毒CMV，EB病毒、单纯疱疹病毒HSV，带状疱诊病毒VZV

——抗原检测：免疫组化、PCR

——抗体检测：ELISA

(2)细菌感染：G-菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌

——涂片镜检、细菌培养、药敏试验等

——培养结果滞后/阳性率低→肺炎

(3)真菌感染：念珠菌属、曲霉菌为主

——外周血或骨髓或无菌体液中可检出，病理学检查可作为直接依据

——早期诊断困难→全身感染→真菌败血症

(4)器官移植术后早期经验性抗感染治疗

各种感染的发生率高

临床表现无特异性，培养结果滞后，难以早期确诊

延误治疗常导致病死率增加

4.免疫抑制剂的血药浓度监测

环孢霉素(cyclosporin,CsA)

他莫克斯(tacrolimus,FK506)

霉酚酸酯，骁悉(mycophenolate mofetil,MMF)

(1)免疫抑制剂的特点

治疗窗口窄

药物强度大

药物毒性大不同患者的血药浓度有差异

个体差异大同一患者不同时期有差异

用药次数

合并用药情况

(2)不同移植类型用药经验不同

(3)不同检测方法的参考区间不同：高效液相色谱、毛细管电泳法、化学发光、放免、酶免、免疫荧光偏振等

(四)常见器官移植的实验诊断

1.肾移植

(1)ABO/Rh血型鉴定：同型相合的原则

(2)CDC试验：阳性结果是移植禁忌

(3)PRA检测：高PRA患者择期手术或治疗

(4)HLA配型：美国器官分配网“点记分”方法，(lowresolution)

HLA-A、B、DR三个座位上基因全配合记10点

B和DR无错配记7点

A和B无错配记6点

B或DR1个错配记3点

B+DR2个错配记2点

B+DR3个错配记1点

——DR位点配合程度与肾移植近期存活呈正相关

——B位点配合程度与肾移植远期存活呈正相关

2.造血干移植（严格配型）