基因沉默原理

目录

RNAi及基因沉默原理

百奥迈科（Biomics）RNAi产品与服务一览

1.siRNA生物合成

1.1 全位点siRNA表达文库构建服务

1.2 RNAi载体构建技术服务

1.3 Gene Target TM siRNA Set

2.siRNA化学合成

2.1 化学合成siRNA简介

2.2 siRNA设计

2.3 百奥迈科(Biomics) siRNA产品简介

2.4 普通siRNA oligo

2.5 荧光标记siRNA oligo

2.6 化学修饰siRNA oligo

2.7 miRNA的化学合成

2.8 RNAi系列优惠套餐

2.9 siRNA对照

3.RNAi病毒包装

3.1 腺病毒载体包装

3.2 慢病毒载体包装

3.3 其他类型病毒载体包装

4.哺乳动物细胞siRNA转染

4.1 转染方法

4.2 转染步骤

4.3 转染优化及注意事项

5.mRNA水平检测基因沉默

5.1 mRNA的提取/制备

5.2. 实时定量荧光PCR

6蛋白质水平检测基因沉默

6.1 Western blot

6.2 ELISA

6.3 免疫荧光

7.其他相关服务

7.1 稳定细胞筛选服务

7.2 细胞增殖毒性检测服务

7.3 细胞凋亡检测服务

7.4 DNA测序

8.RNAi相关产品

8.1 RISO TM RNA抽提试剂

8.2 其他

RNAi及基因沉默原理

RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA (double-strandedRNA，dsRNA) 引发的转录后基因静默机制。其原理是：RNaseIII核酶家族的Dicer，与双链RNA结合，将其剪切成21 - 25nt及3'端突出的小干扰RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后siRNA与RNA 诱导沉默复合物(RNA - induced silencing complex，RISC) 结合，解旋成单链，活化的RISC 受已成单链的siRNA引导，序列特异性地结合在靶mRNA上并将其切断，引发靶mRNA的特异性分解，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。

百奥迈科（Biomics）RNAi产品与服务一览

1.siRNA 生物合成

1.1全位点siRNA表达文库构建服务

本公司拥有自主知识产权的全位点siRNA文库构建技术，能够从全长cDNA构建包含所有有效结合位点，长度分布于19 - 23bp的靶基因的siRNA分子库，亦可以模仿体内Dicer酶切割长度为21 - 23bp的分子库，适用于高通量功能基因及相关药物靶点筛选。

1.1.1构建流程：

1）客户可选：

z提供靶基因的cDNA克隆。

z提供靶基因的相关信息(基因的mRNA序列或Genbank Accession Number)。

z也可在本公司的cDNA产品目录中，挑选靶基因cDNA克隆。

2）进行siRNA文库构建，抽样测序验证。

3）根据客户要求提供相应的文库产品。

4）将其连同抽样报告、产品说明书一起寄送到客户手中。

A.HBV Polymerase Domain siRNA表达文库位点分布（随机抽样测序）

Polymerase Domain (984bp):

B.构建的Survivin基因全位点siRNA表达文库，文库抽样基因沉默(qPCR)筛选结果：

该数据显示，本公司siRNA文库位点分布的随机性，可以更好地找到最优的靶点。

s1-s8: Randomly selected siRNA sequences from Biomics library

s9/s10/s11: The published siRNA sequences

target-off: Negative control

un-transfect: Untreated normal control

1.2RNAi载体构建技术服务

1.2.1技术特点：

1）多种siRNA表达载体，可以在细胞内直接转录出siRNA，行使其RNAi功能，包括：z U6启动子表达载体；

z H1启动子表达载体；

z U6、H1双启动子表达载体；

z CMV启动子表达载体；

2）载体带有GFP标签可以监测转染效率。构建好的siRNA表达载体可直接用于转染细胞进行RNAi实验;

3）本公司还可根据客户需要提供各种商业化表达载体;

4）本公司可以为客户构建线性siRNA表达载体，shRNA表达载体，miRNA表达载体以及病毒型RNAi载体。

1.2.2构建流程：

1）siRNA靶点设计；

z客户提供靶基因的siRNA序列，由本公司将其克隆到siRNA表达载体上。

z客户提供靶基因的相关信息（基因的mRNA序列或Genbank Accession No.），根据客户要求，本公司设计高效特异性的3-4条针对靶基因的siRNA。

2）合成设计好的DNA并退火形成双链DNA，克隆到客户要求的载体上。

3）通过测序进行验证。

4）构建成功的siRNA质粒连同测序报告、产品说明书一起寄送到客户手中。

注：可根据客户要求提供siRNA的阳性及阴性对照质粒。

1.2.3质量保证：

符合设计要求的siRNA序列测序结果。

基于载体的RNAi实验示意图