使用循环制备液相色谱分离制备天然产物案例
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使用循环制备液相色谱分离制备天然产物案例
目录
1. 普通制备型HPLC与JAI循环制备HPLC的区别 2
2. 循环制备HPLC的分析案例 3
1）低聚糖KFA溶液 3 2）低聚糖A 4 3）Ecdysteroid系试样 5 4）冬虫夏草 6 5）一般天然物（生理活性物质）7 6）Saponin 皂角苷（药用人参提取物）8 7）西伯利亚产药用人参（Araliaceae果）1 10 8）西伯利亚产药用人参（Araliaceae果）2 11 9）Ethaboxam 12 10）Taxol 13 11）淫羊藿14 12）Tagatose（塔格糖），Galactose（半乳糖）的低聚物15
1．普通制备型HPLC与JAI循环制备HPLC的区别
表1. 普通制备型HPLC与JAI循环制备HPLC的比较项目普通制备HPLC JAI循环制备HPLC
循环次数以梯度法提高分离效果为主，
但仅可循环一次采用循环法提高分离效果，循环次数不限
溶剂消耗量 100～300 mL/min 3~5 mL/min
色谱柱寿命 2-3年H柱6-10年
理论塔板数一般为7000 一般为15000
检测器使用情况单独使用UV或RI检测器同时使用UV或RI检测器检测器的检测范围只在制备时可以检测制备和分析时均可使用
重复进样和自动循环可装配自动进样器两者均可装配
1）使用JAI独创的循环技术，通过将目标化合物在同一色谱柱内反复循环，直至使其完全分离和制备，相当于将试样注入更长色谱柱内的分离效果。其他公司的仪器由于在循环中检测池破损（JAI采用独特的检测池配置，不会因为压力变化而导致检测池破损）、试样扩散过大而不能实现循环功能。JAI的HPLC可进行数十次循环，甚至可通过卓越的循环功能而实现结构异构体的分离。
2）采用300mg进样量重复进样，不会影响分析精度；在具备自动进样装置条件下，每天可收集多达20g的纯化样品。
3）普通制备HPLC使用的分析柱一般2年左右就需要更换新柱。JAI的色谱柱使用聚合物系列填充物，因其吸附力弱，注入的试样不会在柱内残留，使用寿命比其他产品高出2倍以上，使用寿命超过六年，一般可使用六年到十年。
（汉城大学生物工学科：10年；延世大学：14年；DongSung化学：11年目前仍在使用中）
4）所配备的UV及RI检测器的动态范围很宽，分别配备分析柱和制备柱可以实现本系统分析、制备兼用。
5）JAI循环制备HPLC使用的GPC色谱柱理论塔板数很高，比普通的制备HPLC 分离性能好，溶剂使用量明显减少，仅为其他制备LC的十分之一，可以节省巨额的溶剂花费。
6）装备重复进样和自动循环等功能，设定好制备条件后可自动进样、循环分离，可以实现无人操作下的昼夜连续运转。
7）普通的制备色谱不具备循环功能不能实现难分离的糖类的制备，而JAI循环制备HPLC可以实现。这是因为糖类只有用RI检测器才能检出，其他公司的制备HPLC只有采用梯度法进行分离提纯，但梯度条件下RI检测器无法使用。
循环制备HPLC分析案例
1）低聚糖KFA溶液
★分析时间：2000年11月22日
★试样：KFA溶液
★制备目的：KFA溶液中的化合物分离/制备
★分析设备：循环制备HPLC（型号：LC-9101）
★分析条件：色谱柱－JAIGEL W-252柱（20Ф×500mm）
泵流速－3.5mL/min
溶剂－纯水（色谱级）
试样注入量：200mg/3mL
检测器：RI检测器
★ 结果：注入上述试样3mL连续4次循环分析后，得到Fig.1的图谱。
得到了A、B、C、D、E五个制备物馏分，制备物馏分E与标准试
样的保留时间以及NMR波谱一致，确认为同一化合物（图）
Fig.1 低聚糖（KFA溶液）的循环制备色谱
2）低聚糖A
★分析时间：2001年12月12日
★试样：低聚糖A
★制备目的：低聚糖的完全分离/制备
★分析设备：循环制备HPLC（型号：LC-9101）
★分析条件：色谱柱－JAIGEL W-252柱（20Ф×500mm）
泵流速－3.5mL/min
溶剂－纯水（色谱级）
试样注入量：200mg/3mL
检测器：RI检测器
★结果：注入上述试样3mL连续4次循环分析后，得到Fig.2的图谱。通过循环对低聚糖进行了完全的分离和制备。
Fig.2 低聚糖循环制备色谱
3）Ecdysteroid系试样
★分析时间：2001年6月7日
★试样：Ecdysteroids
★制备目的：Ecdysteroids的分离/制备
★分析设备：循环制备HPLC（型号：LC-9201）
★分析条件：色谱柱－JAIGEL W-252×W-253柱（20Ф×500mm）
泵流速－3.5mL/min
溶剂－MeOH＋MeCN：6＋4（色谱级）
试样注入量：40mg/3mL
检测器：UV检测器
★结果：循环分析18次得到X、Y两个馏分，做到分离/制备（Fig.3）。
Fig.3 Ecdysteroid的循环制备色谱图
4）冬虫夏草
★分析时间：2001年4月6日
★试样：冬虫夏草（黄金虫）提取物
★分析目的：分离/制备
★分析设备：循环制备HPLC（型号：LC-9201）
★分析条件：色谱柱－JAIGEL 1H×2H柱（20Ф×500mm）
泵流速－3.5mL/min
溶剂－CHCl3 100%（色谱级）
试样注入量：800mg/3mL
检测器：UV检测器
★结果：仅循环一次，就得到A、B两个分离/制备馏分。
将标准试样和制备物A、B馏分分别再注入后，确认为标准化合物。
Fig.4 冬虫夏草（黄金虫）提取物的循环制备色谱