薄层色谱的应用及常见问题
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• 以特征成分鉴别药材或处方中的药味 • 鉴别药材真伪 • 区别不同药用部位 • 毒性成分的检查 • 检查是否掺有伪品、色素等。 • 同时鉴别多个药材的多种成分 • 生物活性成分检测
比移值（Rf值）
• 在固定的条件下（吸附剂、温度、展开剂等），
不同化合物如甲和乙在薄层上以不同的速度移动， 当停止展开后，各组分的色斑在薄层上的位置可 用尺来测量，以比移值（Rf值）表示。
• 最理想的Rf值为0.4～0.5，良好的分离,Rf值为
0.15～0.75，如果Rf值小于0.15或大于0.75则分离 不好。
• 一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物
质在相同的条件下可有不同的Rf值。
• 因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件
下进行展开比较Rf值可提供定性依据。
薄层色谱分析的实验器材
位置上，显相同颜色的斑点。
温湿度的影响
• 相对湿度：由于硅胶表面吸附水分的作用
是可逆的，在日常实验中薄层板的活性取 决于实验室的相对湿度，在其他条件相同 的情况下，相对湿度对色谱质量的影响是 很明显的。
• 温度：在相同湿度的条件下，一般在较高
温度展开时，Rf值高，在较低温度展开时， Rf值低。因温度不同，展开剂中各有机溶剂 因沸点、蒸气压、蒸发数目、相对密度等 不同蒸发程度各异，必然影响欲分离物质 的层析行为。
薄层色谱法的优点
1. 展开时间短，一般十至几十分钟； 2. 分离能力强，斑点集中； 3. 灵敏度高，通常几至几十微克的物质即可被检出； 4.显色方便，可直接喷洒腐蚀性的显色剂，如浓硫
酸等； 5.所用仪器简单，操作方便，可以普及； 6.薄层板价格低廉，一块板可同时检测多个样品； 7.色谱直观性强。
薄层色谱法的应用
薄层板的制备：铺板，一般取一份吸附剂 加三份水，研磨调成糊状，调制时慢慢搅 拌，勿使产生气 泡。涂布厚度一般为0.30.5nm，室温下晾干。
薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果， 薄层应尽量铺得均匀，厚度在0.25～ 0.5mm之间。
硅胶和氧化铝的粘性差，使用前必须加粘 合剂。市售的硅胶G 和氧化铝G 均已含有 粘合剂半水石膏，可直接加入水调匀后铺 层。
1.薄层板
• 市售薄层板 • 自制薄层板
(1). 玻璃板：10×10cm、10×20cm、5×20cm、 20×20cm等。表面及四边要求光滑、平整（四角 均为直角）、薄厚均匀、质地均匀。洗净后不应 附水珠，于无尘处晾干，不应有斑痕，备用。必 要时用前用酒精棉球擦净晾干。
(2). 铺板器：能使吸附剂在载体(玻璃板)上铺成一 层厚度符合要求的平整、均匀的薄层。分自动铺 板器和手动铺板器两种。手动铺板器包括铺板架 和涂布器，涂布器用金属或有机玻璃均可，规格 有0.2-1.0mm不等。
常用源自文库附剂
• 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254 • 聚酰胺 • 硅藻土 • 氧化铝 • 纤维素 • 表面改性固定相
硅胶：具有表面活性、略带酸性（pH4-5）的多孔 硅胶（Sio2·xH2O），是至今薄层色谱法使用得最 普遍的薄层材料。
聚酰胺：属特殊类型有机薄层材料。具有表面酰胺 基，对酚、羧酸、氨基酸等能形成氢键的物质具 有特别的选择性。常用来鉴别黄酮、酚类化合物。
色谱基础上发展起来的一种色谱技术。
• 薄层色谱法的特点：具有设备简单、操作
方便、分离快速、直观等特点。尤其对中 药分析，既可对已知有效成分的品种定性、 定量，又可对成分复杂的品种进行特征性 成分分析或进而作指纹图谱分析。
• 薄层色谱法的特点：薄层色谱是一种
“敞开系统”的色谱技术，与柱色谱 的区别之一是除材料及容器外，外界 环境条件对被分离物质的层析行为影 响很大，分离机制也很复杂；其次由 于分析的全过程是横向的离线多步骤 操作，所以操作技巧明显影响色谱质 量，注意控制影响色谱质量的因素是 非常重要的。
薄层色谱分析的实验器材
8.记录设备
• 示意图 • 普通相机或专业设备拍摄 • 薄层扫描仪（定量）
9.试剂
• (1). 样品处理用一般为分析纯，按样品稀释
要求处理。
• (2). 配制展开系统用分析纯，不能与被分离
物发生化学反应。
薄层色谱法的基本操作过程
薄层色谱法的基本操作过程
供试品溶液的制备：按规定的方法制备。
薄层色谱法的基本操作过程
点样
• 点样量不能过大，原点直径不宜过大。圆点状直
径一般不大于3mm；条带状宽度一般为5-10mm、 高效板条带宽度一般为4-8mm。点样基线距底边 为10-15mm，高效板为8-10mm，距两边不少于 1.0cm，两个样点距离可视斑点扩散以不影响检 出为宜，一般为1.5-2.0cm，点样基线与薄层板地 边平行。
气饱和5～10min。（薄层色谱与柱色谱区别之一就是 溶剂的蒸气相在展开缸中参与色谱展开行成三维的层 析过程。）再将点好试样的薄层板样点一端朝下放入 缸内，浸入深度距底边0.5－1.0cm，距原点5mm为 宜，切勿使样点浸入溶剂中，盖好缸盖，展开剂因毛 细管效应而沿薄层上升，样品中组分随展开剂在薄层 中以不同的速度自下而上移动而导致分离。展距以7 －15cm为宜，展距过大，斑点扩散，精确度差，展 距过小，分离效果差。取出薄层板，放平，标明溶剂 前沿位置，晾干。
谢 谢！
薄层色谱的应用及常见问题
薄层色谱法的定义
• 薄层色谱法（TLC）系将供试品溶液点于薄
层板上，在展开容器内用展开剂展开，使 供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜 的对照物按同法所得的色谱对比，并可用 薄层扫描仪进行扫描，用于，鉴别、检查 或含量测定。
薄层色谱法的发展和特点
• 薄层色谱法的发展：从经典的柱色谱及纸
化合物本身不同颜色的暗斑或荧光斑点，或显色 后按有色物质进行检视.
薄层色谱法的记录内容
• 实验时间、实验人员 • 温、湿度 • 供试品、对照物质制备过程 • 薄层板（自制或市售、类别） • 点样量 • 展开剂 • 显色剂、检视方法 • 图谱记录（最好拍摄照片） • 结果判定：供试品色谱中在与对照品色谱相应的
• 供试品的溶剂在原点的残留会改变展开的选择性，
因此点样时同步干燥或继后干燥以除去残留的溶 剂是需要的。
• 点样时注意不要损伤薄层板表面。薄层表面的机
械损伤对色谱质量优较大影响。
薄层色谱法的基本操作过程
展开
• 展开剂的制备：按比例配制，现配现用。 • 先将展开剂放在层析缸中，盖上缸盖，让缸内溶剂蒸
薄层色谱法的基本操作过程
显色
• (1). 蒸气显色法：常用挥发性的酸、碱如盐酸、
硝酸、浓氨、二乙胺等蒸气显色。
• (2). 试剂显色法：常用喷雾法或浸渍法处理，显
色试剂常用硫酸、碘的氯仿溶液、碱性高锰酸钾 溶液、磷钼酸等。 检视
• (1). 有色物质：日光下直接观察或在紫外灯下观
察荧光斑点。
• (2). 无色物质：在紫外灯下（指定波长）下观察
• 鉴别样溶解后，放入安瓿瓶中而不要放在蒸发皿
中。
• 对照品溶液及对照药材溶液的制备：按规定的方
法制备。
薄层板制备或准备：
• 取自制或市售薄层板置110℃活化0.5小时，置干
燥器内备用，1周内可使用，超出1周，用前需再 次活化，不主张反复活化，长期使用。（“活化” 就是在高温除去水分）
• 聚酰胺薄膜不需要活化
薄层色谱分析的实验器材
6.展开容器（展开缸）：
• 上行法：平底展开室、双槽展开室。以双
槽层析缸为佳，双槽层析缸具有节省溶剂 及方便预饱和等优点。
• 水平展开：水平式展开室
7.显色设备
• 喷雾器：不受试剂腐蚀并能使显色剂呈细
而均匀的雾状喷出。
• 显色剂浸渍槽：显色均匀但易扩散 • 紫外光灯：显色前或后观察
薄层色谱法的原理
利用混合物中各组份的物理化学性质的差别，在层析过程 中，在不相溶的两个相中分布的不同，达到分离目的。这 两个相，一个是涂布在薄层板上的吸附剂，叫固定相，另 一个是在展开过程中流过固定相的展开剂（有机溶剂）， 叫流动相。 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的容器中 用适宜的溶剂（展开剂）展开，由于吸附剂对混合物中不 同物质的吸附力大小不同，对极性大的物质吸附力强，对 极性小的物质吸附力弱。因此当溶剂流过时，不同物质在 吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、 再解吸附。宜被吸附的物质（极性大、被附力作用强的物 质）相对移动较慢，在薄层板上移动的距离就小；反之， 较难被吸附的物质（极性小、被附力作用弱的物质）相对 移动较快一些，在薄层板上移动的距离则大。经过一段时 间的展开，混合物中各组份在薄层板上连续不断地进行吸 附和解吸附过程，从而使各组份移动的速度产生差异，不 同物质就被彼此被分开，最后形成互相分离的斑点。
薄层色谱分析的实验器材
2. 干燥板架：用于放置铺好的薄层板 3. 干燥箱：温度易于调控，用于活化薄层板。 4.干燥器：用于放置活化后的薄层板。 5.点样器：最常用、最方便的为微升毛细 管，规格有0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、 10μl等。也有选用色谱用微量注射器（平 头）、半自动或自动点样器材。 点样模式：点状、条状
比移值（Rf值）
• 在固定的条件下（吸附剂、温度、展开剂等），
不同化合物如甲和乙在薄层上以不同的速度移动， 当停止展开后，各组分的色斑在薄层上的位置可 用尺来测量，以比移值（Rf值）表示。
• 最理想的Rf值为0.4～0.5，良好的分离,Rf值为
0.15～0.75，如果Rf值小于0.15或大于0.75则分离 不好。
• 一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物
质在相同的条件下可有不同的Rf值。
• 因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件
下进行展开比较Rf值可提供定性依据。
薄层色谱分析的实验器材
位置上，显相同颜色的斑点。
温湿度的影响
• 相对湿度：由于硅胶表面吸附水分的作用
是可逆的，在日常实验中薄层板的活性取 决于实验室的相对湿度，在其他条件相同 的情况下，相对湿度对色谱质量的影响是 很明显的。
• 温度：在相同湿度的条件下，一般在较高
温度展开时，Rf值高，在较低温度展开时， Rf值低。因温度不同，展开剂中各有机溶剂 因沸点、蒸气压、蒸发数目、相对密度等 不同蒸发程度各异，必然影响欲分离物质 的层析行为。
薄层色谱法的优点
1. 展开时间短，一般十至几十分钟； 2. 分离能力强，斑点集中； 3. 灵敏度高，通常几至几十微克的物质即可被检出； 4.显色方便，可直接喷洒腐蚀性的显色剂，如浓硫
酸等； 5.所用仪器简单，操作方便，可以普及； 6.薄层板价格低廉，一块板可同时检测多个样品； 7.色谱直观性强。
薄层色谱法的应用
薄层板的制备：铺板，一般取一份吸附剂 加三份水，研磨调成糊状，调制时慢慢搅 拌，勿使产生气 泡。涂布厚度一般为0.30.5nm，室温下晾干。
薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果， 薄层应尽量铺得均匀，厚度在0.25～ 0.5mm之间。
硅胶和氧化铝的粘性差，使用前必须加粘 合剂。市售的硅胶G 和氧化铝G 均已含有 粘合剂半水石膏，可直接加入水调匀后铺 层。
1.薄层板
• 市售薄层板 • 自制薄层板
(1). 玻璃板：10×10cm、10×20cm、5×20cm、 20×20cm等。表面及四边要求光滑、平整（四角 均为直角）、薄厚均匀、质地均匀。洗净后不应 附水珠，于无尘处晾干，不应有斑痕，备用。必 要时用前用酒精棉球擦净晾干。
(2). 铺板器：能使吸附剂在载体(玻璃板)上铺成一 层厚度符合要求的平整、均匀的薄层。分自动铺 板器和手动铺板器两种。手动铺板器包括铺板架 和涂布器，涂布器用金属或有机玻璃均可，规格 有0.2-1.0mm不等。
常用源自文库附剂
• 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254 • 聚酰胺 • 硅藻土 • 氧化铝 • 纤维素 • 表面改性固定相
硅胶：具有表面活性、略带酸性（pH4-5）的多孔 硅胶（Sio2·xH2O），是至今薄层色谱法使用得最 普遍的薄层材料。
聚酰胺：属特殊类型有机薄层材料。具有表面酰胺 基，对酚、羧酸、氨基酸等能形成氢键的物质具 有特别的选择性。常用来鉴别黄酮、酚类化合物。
色谱基础上发展起来的一种色谱技术。
• 薄层色谱法的特点：具有设备简单、操作
方便、分离快速、直观等特点。尤其对中 药分析，既可对已知有效成分的品种定性、 定量，又可对成分复杂的品种进行特征性 成分分析或进而作指纹图谱分析。
• 薄层色谱法的特点：薄层色谱是一种
“敞开系统”的色谱技术，与柱色谱 的区别之一是除材料及容器外，外界 环境条件对被分离物质的层析行为影 响很大，分离机制也很复杂；其次由 于分析的全过程是横向的离线多步骤 操作，所以操作技巧明显影响色谱质 量，注意控制影响色谱质量的因素是 非常重要的。
薄层色谱分析的实验器材
8.记录设备
• 示意图 • 普通相机或专业设备拍摄 • 薄层扫描仪（定量）
9.试剂
• (1). 样品处理用一般为分析纯，按样品稀释
要求处理。
• (2). 配制展开系统用分析纯，不能与被分离
物发生化学反应。
薄层色谱法的基本操作过程
薄层色谱法的基本操作过程
供试品溶液的制备：按规定的方法制备。
薄层色谱法的基本操作过程
点样
• 点样量不能过大，原点直径不宜过大。圆点状直
径一般不大于3mm；条带状宽度一般为5-10mm、 高效板条带宽度一般为4-8mm。点样基线距底边 为10-15mm，高效板为8-10mm，距两边不少于 1.0cm，两个样点距离可视斑点扩散以不影响检 出为宜，一般为1.5-2.0cm，点样基线与薄层板地 边平行。
气饱和5～10min。（薄层色谱与柱色谱区别之一就是 溶剂的蒸气相在展开缸中参与色谱展开行成三维的层 析过程。）再将点好试样的薄层板样点一端朝下放入 缸内，浸入深度距底边0.5－1.0cm，距原点5mm为 宜，切勿使样点浸入溶剂中，盖好缸盖，展开剂因毛 细管效应而沿薄层上升，样品中组分随展开剂在薄层 中以不同的速度自下而上移动而导致分离。展距以7 －15cm为宜，展距过大，斑点扩散，精确度差，展 距过小，分离效果差。取出薄层板，放平，标明溶剂 前沿位置，晾干。
谢 谢！
薄层色谱的应用及常见问题
薄层色谱法的定义
• 薄层色谱法（TLC）系将供试品溶液点于薄
层板上，在展开容器内用展开剂展开，使 供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜 的对照物按同法所得的色谱对比，并可用 薄层扫描仪进行扫描，用于，鉴别、检查 或含量测定。
薄层色谱法的发展和特点
• 薄层色谱法的发展：从经典的柱色谱及纸
化合物本身不同颜色的暗斑或荧光斑点，或显色 后按有色物质进行检视.
薄层色谱法的记录内容
• 实验时间、实验人员 • 温、湿度 • 供试品、对照物质制备过程 • 薄层板（自制或市售、类别） • 点样量 • 展开剂 • 显色剂、检视方法 • 图谱记录（最好拍摄照片） • 结果判定：供试品色谱中在与对照品色谱相应的
• 供试品的溶剂在原点的残留会改变展开的选择性，
因此点样时同步干燥或继后干燥以除去残留的溶 剂是需要的。
• 点样时注意不要损伤薄层板表面。薄层表面的机
械损伤对色谱质量优较大影响。
薄层色谱法的基本操作过程
展开
• 展开剂的制备：按比例配制，现配现用。 • 先将展开剂放在层析缸中，盖上缸盖，让缸内溶剂蒸
薄层色谱法的基本操作过程
显色
• (1). 蒸气显色法：常用挥发性的酸、碱如盐酸、
硝酸、浓氨、二乙胺等蒸气显色。
• (2). 试剂显色法：常用喷雾法或浸渍法处理，显
色试剂常用硫酸、碘的氯仿溶液、碱性高锰酸钾 溶液、磷钼酸等。 检视
• (1). 有色物质：日光下直接观察或在紫外灯下观
察荧光斑点。
• (2). 无色物质：在紫外灯下（指定波长）下观察
• 鉴别样溶解后，放入安瓿瓶中而不要放在蒸发皿
中。
• 对照品溶液及对照药材溶液的制备：按规定的方
法制备。
薄层板制备或准备：
• 取自制或市售薄层板置110℃活化0.5小时，置干
燥器内备用，1周内可使用，超出1周，用前需再 次活化，不主张反复活化，长期使用。（“活化” 就是在高温除去水分）
• 聚酰胺薄膜不需要活化
薄层色谱分析的实验器材
6.展开容器（展开缸）：
• 上行法：平底展开室、双槽展开室。以双
槽层析缸为佳，双槽层析缸具有节省溶剂 及方便预饱和等优点。
• 水平展开：水平式展开室
7.显色设备
• 喷雾器：不受试剂腐蚀并能使显色剂呈细
而均匀的雾状喷出。
• 显色剂浸渍槽：显色均匀但易扩散 • 紫外光灯：显色前或后观察
薄层色谱法的原理
利用混合物中各组份的物理化学性质的差别，在层析过程 中，在不相溶的两个相中分布的不同，达到分离目的。这 两个相，一个是涂布在薄层板上的吸附剂，叫固定相，另 一个是在展开过程中流过固定相的展开剂（有机溶剂）， 叫流动相。 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的容器中 用适宜的溶剂（展开剂）展开，由于吸附剂对混合物中不 同物质的吸附力大小不同，对极性大的物质吸附力强，对 极性小的物质吸附力弱。因此当溶剂流过时，不同物质在 吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、 再解吸附。宜被吸附的物质（极性大、被附力作用强的物 质）相对移动较慢，在薄层板上移动的距离就小；反之， 较难被吸附的物质（极性小、被附力作用弱的物质）相对 移动较快一些，在薄层板上移动的距离则大。经过一段时 间的展开，混合物中各组份在薄层板上连续不断地进行吸 附和解吸附过程，从而使各组份移动的速度产生差异，不 同物质就被彼此被分开，最后形成互相分离的斑点。
薄层色谱分析的实验器材
2. 干燥板架：用于放置铺好的薄层板 3. 干燥箱：温度易于调控，用于活化薄层板。 4.干燥器：用于放置活化后的薄层板。 5.点样器：最常用、最方便的为微升毛细 管，规格有0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、 10μl等。也有选用色谱用微量注射器（平 头）、半自动或自动点样器材。 点样模式：点状、条状