抗核抗体检测及临床应用

抗核抗体（ANA）荧光片判读与讲解
ANA筛查: 间接免疫荧光法(IFT)
抗原谱完整 (细胞核、细胞浆) 检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性 基质组合: HEp-2细胞+灵长类肝
读片要点
HEp-2细胞:选取多个视野判断 HEp-2细胞:分裂间期与分裂期细胞综合看 HEp-2与肝片综合看
常规片特点
经常出现混合核型 经常出现不典型核型 中低滴度常见、经常出现临界滴度 实验操作、实验体系等因素，会给荧光结果的
判读带来不利影响。
• 肝片： 荧光模式不 典型
• 靶抗原：溶酶体
胞浆颗粒型：抗高尔基体抗体
肝片
HEP-2
• HEp-2：间期细胞 核一侧的高尔基体 所在部位呈现网状 的颗粒样荧光；分 裂期细胞无荧光。
• 肝片： 荧光模式不 典型
• 靶抗原：高尔基体
肝片
抗中心粒抗体
HEP-2
• HEp-2：在细胞核 内可见一或两个荧 光点，分裂期细胞 中荧光点位于细胞 纵向对称的两极
最多18种抗原， 增加了RNP亚单位
自动化 操作 全自动化 结果判读
实验结果的解释（ANA谱）： 抗nRNP/Sm和Sm抗体
抗nRNP/Sm 抗体
+ + -
抗Sm抗体
结果
解释
-
nRNP: Sm: -
阴性
+
nRNP: ？
SLE
Sm: +
-
nRNP: + Sm: -
SLE或MCTD
+
结果不可靠 无
• HEp-2：间期细胞 核仁阳性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性。
• 肝片：肝细胞核仁 阳性；荧光强度与 HEp-2基本一致
• 靶抗原：Scl-70、 PM-Scl、RNA多聚 酶、原纤维蛋白
核
PM-Scl
仁
型
的
多
种
模
型
Scl-70
RNA多聚酶 原纤维蛋白
肝片
胞浆颗粒型：抗核糖体P蛋白抗体
HEP-2
抗核抗体荧光模型分类
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
细胞核
核均质型： dsDNA、组蛋白和核小体等 核膜型： 板层素、gp210等
核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B 核颗粒型 细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型
ANA
细胞浆
Ku 核仁型： Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等 核浆点型： 着丝点、核点等 胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 分裂期细胞：纺垂体、中间体、中心粒等
• HEp-2：间期细胞 浆中出现致密的细 颗粒样荧光，并有 空泡现象，部分核 仁阳性；分裂期细 胞浓缩染色体阴性
• 肝片： 灵长类肝组 织中可呈现特异的 由几个肝细胞浆融 合形成的岛状荧光
• 靶抗原：核糖体P 蛋白
胞浆颗粒型：抗线粒体抗体
肝片
HEP-2
• HEp-2：细胞浆内 粗颗粒样荧光
• 肝片： 肝细胞呈颗 粒样荧光，整个视 野呈细沙状荧光
• 肝片：荧光模式不 典型
肝片
抗纺锤体纤维抗体
HEP-2
• HEp-2：仅见于分 裂期细胞，纺锤体 部位出现特征性荧 光。
• 肝片：荧光模式不 典型
肝片
抗中间体抗体
HEP-2
• HEp-2：分裂中期 细胞中间水平方向 产生带状细颗粒荧 光，半数间期细胞 含有大量粗荧光点， 其余细胞为阴性。
• 肝片：荧光模式不 典型
• 靶抗原：线粒体
肝片
胞浆颗粒型：抗Jo-1抗体
HEP-2
• HEp-2：间期细胞浆 中出现颗粒到细块状 荧光，细胞核有时也 出现细颗粒荧光；分 裂期细胞浓缩染色体 阴性，染色体周围区 域呈致密的细颗粒荧 光
• 肝片： 荧光模式不 典型
• 靶抗原：Jo-1
胞浆颗粒型：抗溶酶体抗体
肝片
HEP-2
• HEp-2：细胞浆中 出现细小的、中等 大小的、以及粗的 滴状荧光颗粒
• 肝片：肝细胞核内 出现大小、数目不 均一的点状荧光； 荧光强度与HEp-2基 本一致
• 靶抗原：Sp100
肝片
核膜型
HEP-2
• HEp-2：间期细胞 核呈现均匀荧光， 核周增强；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性
• 肝片：肝细胞核呈 现特征性环状荧光
• 靶抗原：板层素、 gp210
肝片
核仁型
HEP-2
核均质型
肝片
HEP-2
• HEp-2：间期细胞核呈 均匀荧光，分裂期细 胞浓缩染色体荧光增 强
• 肝片：肝细胞核阳性， 呈均匀荧光。荧光强 度与HEp-2基本一致
• 靶抗原：dsDNA、 核小体、组蛋白
核粗颗粒型
肝片
HEP-2
• HEp-2：间期细胞 核呈颗粒样荧光， 核仁阴性；分裂期 细胞浓缩染色体阴 性，染色体周围呈 颗粒样荧光
抗核抗体检测及临床应用
抗核抗体的定义
传统定义：针对细胞核成分的自身抗体的总称。
广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA 的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称
ANA的靶抗原分布：
细胞核
整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。
ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm, Sm, SSA, SSB, Scl-70和Jo-1等 六种靶抗 原
• 肝片：肝细胞核呈颗 粒样荧光。核仁阴性； 荧光强度与HEp-2基 本一致
• 靶抗原：nRNP、 Sm
核细颗粒型
肝片
Biblioteka Baidu
HEP-2
• HEp-2：间期细胞 核呈细颗粒样荧光， 部分核仁阴性；分 裂期细胞浓缩染色 体阴性，染色体周 围呈颗粒样荧光
• 肝片：肝细胞核呈颗 粒样荧光。部分核仁 阴性；荧光强度明显 弱于HEp-2
• 靶抗原：SS-A、SSB
肝片
着丝点型
HEP-2
• HEp-2：间期细胞 核内出现大小数目 相同、均匀分布的 点状荧光；分裂期 细胞浓缩染色体处 出现浓缩点状荧光
• 肝片：肝细胞核内 可观察到10-20个荧 光点；荧光强度明 显弱于与HEp-2细胞
• 靶抗原：着丝点蛋 白
肝片
核点型
HEP-2
• HEp-2：间期细胞 核内出现大小、数 目、强度不均的点 状荧光；分裂期细 胞浓缩染色体阴性。 周围可见点状荧光
现阶段检测方法
• 抗核抗体定量检测
间接免疫荧光法，每个样本按1:100和1:1000两个浓度制片
• 抗核抗体谱检测
免疫印迹法
• 抗中性粒抗体定量检测（MPO和PR3）
酶联免疫法
• 抗线粒体抗体定量检测
酶联免疫法
• IFT（间接免疫荧光法）
BLOT（免疫印迹法）
ELISA（酶免法）
EUROLINE ANA 谱