体外筛选具黄嘌呤氧化酶抑制活性的天然产物
5种中药材提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用
5种中药材提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用张雪;周英;管静;鄢守群;俸婷婷【摘要】为研究老鹳草、大血藤、吴茱萸、锁阳及木瓜5种中药材提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用.以别嘌呤醇作为阳性对照,采用紫外分光光度法在体外直接测定5种中药材不同浓度的提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用.结果显示:5种中药材提取物(20 mg/mL)对黄嘌呤氧化酶的抑制率均大于50%,老鹳草的醇提物和水提物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用最明显,其IC50分别为3.141 mg/mL、2.407mg/mL.除老鹳草外,其余4种中药材的醇提物的IC50均小于水提物的IC50.表明5种中药材的醇提物和水提物对黄嘌呤氧化酶均具有较好的抑制作用,老鹳草的提取物抑制作用最明显.%The aim of the project is to study the inhibitory effects on xanthine oxidase by the extracts from five Chinese herbal medicines:Geranium wilfordii Maxim, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehd. et Wils, Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth, Cynomorium songaricum Rupr and Chaenomeles sinensis (Thouin) Koehne. We directly measure the inhibitory effects on xanthine oxidase by the extracts of different concentrations from five Chinese herbal medicines using UV spectrophotometry in vitro, with allopurinol as positive control. The inhi-bition rate on the xanthine oxidase by the extracts (20 mg/mL) from all five Chinese herbal medicines is greater than 50%. The inhibition on xanthine oxidase by the ethanol extracts and water extracts of Geranium wilfordii is the most obvious and the IC50 are 3. 141 mg/mL and 2. 407 mg/mL, respectively. Apart from Ge-ranium wilfordii, the IC50 of the ethanol extracts of remaining four Chinese herbal medicines is less than the IC50 of the water extracts. It is concludedthat all the ethanol extracts and water extracts of the five Chinese herbal medicines have good inhibition on xanthine oxidase, with the inhibition by Geranium wilfordii extracts the most obvious.【期刊名称】《山地农业生物学报》【年(卷),期】2015(034)004【总页数】4页(P51-54)【关键词】中药材;黄嘌呤氧化酶;抑制作用【作者】张雪;周英;管静;鄢守群;俸婷婷【作者单位】贵州大学药学院,贵州贵阳 550025;贵州省中药民族药创制工程中心,贵州贵阳 550025;贵州省药食同源植物资源研究开发中心,贵州贵阳 550025;贵州大学药学院,贵州贵阳 550025;贵州省中药民族药创制工程中心,贵州贵阳550025;贵州省药食同源植物资源研究开发中心,贵州贵阳 550025;贵州大学药学院,贵州贵阳 550025;贵州省中药民族药创制工程中心,贵州贵阳 550025;贵州省药食同源植物资源研究开发中心,贵州贵阳 550025;贵州大学药学院,贵州贵阳550025;贵州大学药学院,贵州贵阳 550025;贵州省中药民族药创制工程中心,贵州贵阳 550025;贵州省药食同源植物资源研究开发中心,贵州贵阳 550025【正文语种】中文【中图分类】R914黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxialse，XOD)是一种黄素蛋白酶，主要分布于肝脏和肾脏。
离心超滤质谱法筛选中药复方二妙丸中黄嘌呤氧化酶抑制剂
离心超滤质谱法筛选中药复方二妙丸中黄嘌呤氧化酶抑制剂徐晨;刘舒;刘志强;宋凤瑞【摘要】采用离心超滤质谱分析技术(UF-UPLC/Q-TOF/MS),结合体外酶活性实验方法,对中药复方二妙丸提取物中的黄嘌呤氧化酶抑制剂进行了筛选.体外酶活性实验测得二妙丸水提液对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度(IC50)为(0.218依0.0034) mg/mL,表明二妙丸具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制活性.进一步采用离心超滤质谱技术对二妙丸水提物中潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂进行筛选,从中筛选并鉴定了9种具有潜在黄嘌呤氧化酶抑制活性的化合物,为开发黄嘌呤氧化酶抑制剂及阐明二妙丸治疗痛风和高尿酸血症的作用机制提供了一定的依据.%An ultrafiltration UPLC/Q-TOF/MS assay and in vitro xanthine oxidase inhibition assay were com-bined to screen xanthine oxidase inhibitors in traditional Chinese herbal formulae Ermiaowan. The result of in vitro xanthine oxidase inhibition assay showed that Ermiaowan had a strong xanthine oxidase inhibitory activity, the IC50 value was (0.218±0.0034) mg/mL. Nine compounds were screened and identified as potential xan-thine oxidase inhibitors in Ermiaowan using ultrafiltration UPLC/Q-TOF/MS. This work provides a certain ba-sis for the development of xanthine oxidase inhibitors and the mechanism clarification of Ermiaowan to treat gout and hyperuricemia.【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】6页(P1640-1645)【关键词】二妙丸;黄嘌呤氧化酶;离心超滤质谱【作者】徐晨;刘舒;刘志强;宋凤瑞【作者单位】中国科学院长春应用化学研究所，国家质谱中心长春，吉林省中药化学与质谱重点实验室，长春130022; 中国科学院大学，北京100049;中国科学院长春应用化学研究所，国家质谱中心长春，吉林省中药化学与质谱重点实验室，长春130022;中国科学院长春应用化学研究所，国家质谱中心长春，吉林省中药化学与质谱重点实验室，长春130022;中国科学院长春应用化学研究所，国家质谱中心长春，吉林省中药化学与质谱重点实验室，长春130022【正文语种】中文【中图分类】O657.6黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,EC 1.1.3.22)是一种黄素蛋白酶,存在于多种生物体中,可催化次黄嘌呤生成黄嘌呤,并进一步催化黄嘌呤氧化产生尿酸和超氧阴离子[1].尿酸浓度过高会导致高尿酸血症,随着尿酸在关节处的沉积结晶可引起痛风发作[2].超氧阴离子则与细胞损伤、炎症、癌变和衰老相关[3～6].因此,黄嘌呤氧化酶是治疗多种疾病尤其是高尿酸血症和痛风的关键酶.二妙丸来源于《丹溪心法》一书,本方由黄柏、苍术两味中药1∶1组成,具有清热燥湿之功效,适用于膝关节红肿热痛、腿膝疼痛、湿疮和带下等病症.研究[7,8]发现,二妙丸具有黄嘌呤氧化酶抑制作用,可用于治疗高尿酸血症和痛风.离心超滤质谱技术(UF-UPLC/Q-TOF/MS)主要是利用亲和原理,将待测小分子混合物与受体在接近生理条件的缓冲溶液体系中混合,得到受体-配体复合物和未结合的小分子,通过超滤薄膜将未结合的小分子滤除后,复合物经过处理将小分子配体释放出来,再通过液相色谱-质谱联用技术,对与受体结合的配体进行分离和结构鉴别[9～11].此法不改变蛋白结构,最大程度地反应生理条件下蛋白与药物之间的相互作用;采用Q-TOF-MS和FTMS等高分辨质谱,能够对这些活性分子进行快速鉴别[12,13];该方法灵敏、快速,适用于从成分复杂的天然产物提取物和组合化学库中筛选药物,具有高通量的特点[14,15].本文利用UPLC/Q-TOF/MS对中药复方二妙丸提取物中的黄嘌呤氧化酶抑制剂进行了筛选,鉴定出9种具有潜在黄嘌呤氧化酶抑制活性的化合物.1.1 试剂与仪器Waters Synapt G2型四极杆飞行时间质谱仪(配备Acquity UPLC系统)和Acquity-Xevo TQ型超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪(美国Waters公司);Centrifuge 5810R型超速冷冻离心机(德国Eppendorf公司);超滤离心管(截留分子量100000,美国Millipore公司).黄嘌呤氧化酶(EC 1.1.3.22)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)购自美国Sigma公司;二妙丸购自北京同仁堂制药有限公司;甲醇、乙腈和甲酸均为色谱纯.1.2 实验过程1.2.1 样品处理称取2 g二妙丸粉末,加入10 mL超纯水,在30 ℃下超声提取40 min,重复2次,合并提取液并浓缩至10 mL,离心(4000 r/min,10 min),取上清液过0.22 μm滤膜,得到浓度为200 mg/mL的二妙丸水提液.1.2.2 黄嘌呤氧化酶抑制率的测定黄嘌呤氧化酶抑制率的测定参考文献[16]方法并做适当修改.将终体积为200 μL的50 mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液(pH=8.7)、10 mU/mL的黄嘌呤氧化酶、100 μmol/L黄嘌呤和二妙丸水提液混合,在35 ℃反应5 min,用4倍量的甲醇终止反应,加入终浓度为1 μmol/L的牛磺熊去氧胆酸钠作为内标,高速离心2 min,取上清液进行超高效液相色谱-三重四极杆质谱分析.液相色谱条件: Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相A为甲醇,B为水;流速0.2 mL/min;柱温25 ℃;梯度洗脱: 0～1min,20%A(80%B)～60%A(40%B);1～2 min,60%A(40%B)～100%A(0%B).质谱条件: ESI离子源,负离子扫描模式,毛细管电压2.0 kV,脱溶剂气温度350 ℃,脱溶剂气流速600 L/h,锥孔气流速50 L/h,离子源温度120 ℃.抑制率(%)按下式计算:式中,I为二妙丸水提液对黄嘌呤氧化酶的抑制率;c1为含有二妙丸的反应体系中黄嘌呤的浓度;c2为未加二妙丸的反应体系中黄嘌呤的浓度;c3为未加黄嘌呤氧化酶的空白样品中黄嘌呤的浓度.1.2.3 离心超滤筛选方法分别吸取一定量二妙丸水提液和黄嘌呤氧化酶溶液加至pH=8.7的50 mmol/L Tris-HCl 缓冲溶液中,置于37 ℃水浴中孵育30 min 后,吸取100 mL转移至截留分子量为1×105的超滤管中,在1×104 r/min转速下超速离心5 min,再加入50 mmol/L Tris-HCl(pH=8.7)缓冲溶液离心3次,每次加100 μL,洗去未与蛋白结合成分.最后向滤膜中加入100 μL甲醇/水(体积比50∶50,pH=3.3),在1×104 r/min转速下离心8 min 释放结合配体,重复3次,收集洗脱液,冷冻干燥后加50 μL 甲醇/水(体积比50∶50)溶解,用于UPLC-Q-TOF/MS 分析.不加蛋白的空白实验采用相同方法处理.1.2.4 UPLC-Q-TOF/MS分析条件 Waters Synapt G2四极杆飞行时间质谱仪: ESI 电喷雾离子源,毛细管电压3.5 kV(正离子),锥孔电压40 V,提取锥孔电压4.0 V,离子源温度120 ℃,脱溶剂气温度400 ℃,锥孔气流速50 L/h,脱溶剂气流速800 L/h,质谱采集范围: 100～1000,碰撞能量10～40 eV.校正曲线采用甲酸钠,分辨率模式.实时校正采用 2 ng/mL亮氨酸脑啡肽,15 s校正1次,每次0.5 s,流速5 mL/min. Acquity UPLC系统: Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相: A为乙腈,B为0.1%甲酸水,梯度洗脱: 0～4min,5%A(95%B)～10%A(90%B);4～8 min,10%A(90%B)～10%A(90%B);8～15 min,10%A(90%B)～30%A(70%B);15～16 min,30%A(70%B)～100%A(0%B).流速0.4 mL/min,进样室温度4 ℃,柱温30 ℃,进样量5 mL.2.1 二妙丸对黄嘌呤氧化酶抑制活性的测定参照文献[16]方法测定二妙丸水提液对黄嘌呤氧化酶的抑制活性,结果如图1所示.可见,二妙丸水提液对黄嘌呤氧化酶的抑制作用呈现明显的剂量依赖性,即提取物量越大,抑制作用越强.经过计算,二妙丸水提液对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度IC50=(0.218±0.0034) mg/mL,表明二妙丸具有抑制黄嘌呤氧化酶的活力,可以作为离心超滤质谱的筛选对象.2.2 二妙丸水提液中黄嘌呤氧化酶抑制剂的UF-UPLC/Q-TOF/MS筛选图2为二妙丸水提物的质谱总离子流图(TIC图),可见在16 min内二妙丸水提物中的化学成分被较好分离,共检测出36个化合物.图3为二妙丸水提液与黄嘌呤氧化酶(XO)作用(黑色实线)和不加XO的空白实验(红色虚线)的UPLC-MS TIC图谱,可见,共有9种化合物与XO结合.参考文献[17,18]方法计算这9种化合物与XO的结合强度,计算公式如下:式中,A为二妙丸水提物的色谱峰的峰面积;A1为实验组(加入XO)二妙丸的色谱峰的峰面积;A2为对照组(不加XO)二妙丸的色谱峰的峰面积.由表1结果可见,化合物5,8和9与XO的结合强度较大,均大于10%.2.3 二妙丸水提液中与XO相互作用的成分的质谱鉴定为了确定9种化合物与XO结合的化合物的结构,对其进行了UPLC-MSn分析.各化合物的保留时间和质谱数据列于表1,可见,化合物分子量的测定值与理论值偏差均小于3×10-6.将串联质谱数据与标准对照品及文献[19,20]数据相对比,这9种化合物分别鉴定为黄柏碱(1)、木兰花碱(2)、莲心季铵碱(3)、蝙蝠葛仁碱(4)、巴马汀(5)、非洲防己碱(6)、药根碱(7)、小檗红碱(8)及小檗碱(9),其结构如图4所示. 化合物5～9均为原小檗碱型生物碱,具有类似的碎裂机理.图5以小檗碱为例展示了这类生物碱的碎裂途径.图6为小檗碱的二级串联质谱图.由图6可见,小檗碱分子离子给出4个子离子,分别为m/z 320.09,306.08,292.10和278.08.其中m/z 320.09为小檗碱先丢失CH3·自由基中性碎片,经重排后继续丢失H·自由基产生,即[M-CH4]+ 离子.[M-CH4]+继续丢失中性碎片CO,产生分子量为292.10的[M-CH4-CO]+离子.m/z 306.08为重排后的的[M-CH3]+·(分子量321)丢失CH3·自由基中性碎片产生,即[M-2CH3]+ 离子.[M-2CH3]+继续丢失中性碎片CO,产生分子量为278.08的[M-2CH3-CO]+离子.化合物非洲防己碱(6)和药根碱(7)的碎裂机理均与小檗碱(9)相同,化合物6和7为同分异构体,二级串联所得碎片完全相同,但二者保留时间不同,通过与药根碱标准品的保留时间比对,确定化合物6为非洲防己碱,化合物7为药根碱.小檗红碱(8)仅发生图5所示的第一步碎裂,丢失CH3·自由基中性碎片,生成[M-CH3]+·离子.黄柏碱(1)与木兰花碱(2)为同分异构体,但二者碎裂方式完全不同.黄柏碱通过RDA开环碎裂产生m/z 192.10的碎片离子,碎裂机理见文献[19].木兰花碱(2)、莲心季铵碱(3)和蝙蝠葛仁碱(4)具有类似的结构,碎裂机理类似.以木兰花碱(2)为例,其具有m/z 297.11和265.09的碎片离子.其中m/z 297.11为α断裂丢失C2H7N产生,即[M-C2H7N]+碎片.再发生成环反应,丢失CH3OH,产生分子量为265.09的[M-C2H7N-CH3OH]+碎片,碎裂机理如图7所示.采用离心超滤质谱技术从中药复方二妙丸中筛选并鉴定出9种可与黄嘌呤氧化酶相互作用的化合物,分别为黄柏碱、木兰花碱、莲心季铵碱、蝙蝠葛仁碱、巴马汀、非洲防己碱、药根碱、小檗红碱及小檗碱,其中巴马汀、小檗红碱和小檗碱与黄嘌呤氧化酶的作用较强,结合强度均大于10%.本文结果为开发黄嘌呤氧化酶抑制剂及阐明二妙丸治疗痛风和高尿酸血症的机制提供了一定的依据.[1] Enroth C.,Eger B.T.,Okamoto K.,Nishino T.,Nishino T.,Pai E.F.,A,2000,97(20),10723—10728[2] Harris M.D.,Siegel L.B.,Alloway J.A., Am.Fam.Physician.,1999,59(4),925—934[3] Aruoma O.I., J.Am.Oil Chem.Soc.,1998,75(2),199—212[4] Halliwell B.,Gutteridge J.M.C., Biochem.J., 1984,219,1—14[5] Valko M.,Leibfritz D.,Moncol J.,Cronin M.T.D.,Mazur M.,TelserJ.,Int.J.Biochem.Cell Biol.,2007,39(1),44—84[6] Xu C.,Liu S.,Liu Z.Q.,Song F.R.,Liu S.Y., Anal.Chim.Acta,2013,793(2),53—60[7] Kong L.D.,Yang C.,Ge F.,Wang H.D.,Guo Y.S.,J.Ethnopharmacol.,2004,93(2/3),325—330[8] Ma Q.S.,Wang Q.,Zhao K.S.,Zhai S.B.,Liu S.,Liu Z.Q.,Chem.J.Chinese Universities,2013,34(12),2716—2720(马青山,王茜,赵凯姝,翟淑波,刘舒,刘志强.高等学校化学学报,2013,34(12),2716—2720)[9] van Breemen R.B.V.,Huang C.R.,Nikolic D.,Woodbury C.P.,ZhaoY.Z.,Venton D.L.,Anal.Chem.,1997,69(11),2159—2164[10] Johnson B.M.,Nikolic D.,van Breemen R.B., MassSpectrom.Rev.,2002,21(2),76—86[11] Liu Y.,Zhou H.,Liu S.,Liu Z.Q.,Chem.J.Chinese Universities,2013,34(4),813—818(刘洋,周慧,刘舒,刘志强. 高等学校化学学报,2013,34(4),813—818)[12] Qi Y.,Li S.Z.,Pi Z.F.,Song F.R.,Lin N.,Liu S.,Liu Z.Q.,Talanta, 2014,118,21—29[13] Xu Z.,Yao S.J.,Wei Y.L.,Zhou J.,Zhang L.,Wang C.H.,Guo Y.L.,J.Am.Soc.Mass Spectrom., 2008,19(12),1849—1855[14] Zhou H.,Li H.L.,Zheng Z.,Song F.R.,Xing J.P.,Liu Z.Q.,Liu S.Y.,J.Liq.Chromatogr.R.T.,2012,35(1—4),1—14[15] Liu Y.,Liu S.,Liu Z.Q., J.Chromatogr.B,2013,923(1),48—53[16] Liu S.,Xing J.P.,Zheng Z.,Song F.R.,Liu Z.Q.,Liu S.Y.,Anal.Chim.Acta,2012,715(17),64—70[17] Liu S.,Yan J.,Xing J.P.,Song F.R.,Liu Z.Q.,LiuS.Y.,J.Pharmac.Biomed.Anal.,2012, 59,96—101[18] Zhu H.B.,Liu S.,Wang C.Y.,Liu Z.Q.,Song F.R.,Chem.J.Chinese Universities, 2013,34(7),1635—1639(朱洪彬,刘舒,王春艳,刘志强,宋凤瑞.高等学校化学学报,2013,34(7),1635—1639)[19] Hu Y.M.,Su G.H.,Sze S.C.W.,Ye W.,Tong Y.,Biomed.Chromatogr.,2010,24(4),438—453[20] Zhang Y.F.,Shi Q.R.,Shi P.Y.,Zhang W.D.,Cheng Y.Y., Rapid Commun.Mass Spectrom.,2006,20(15),2328—2342† Supported by the National Natural Science Foundation ofChina(Nos.21175128,81303280).【相关文献】[1] Enroth C.,Eger B.T.,Okamoto K.,Nishino T.,Nishino T.,Pai E.F.,A,2000,97(20),10723—10728[2] Harris M.D.,Siegel L.B.,Alloway J.A., Am.Fam.Physician.,1999,59(4),925—934[3] Aruoma O.I., J.Am.Oil Chem.Soc.,1998,75(2),199—212[4] Halliwell B.,Gutteridge J.M.C., Biochem.J., 1984,219,1—14[5] Valko M.,Leibfritz D.,Moncol J.,Cronin M.T.D.,Mazur M.,Telser J.,Int.J.Biochem.Cell Biol.,2007,39(1),44—84[6] Xu C.,Liu S.,Liu Z.Q.,Song F.R.,Liu S.Y., Anal.Chim.Acta,2013,793(2),53—60[7] Kong L.D.,Yang C.,Ge F.,Wang H.D.,Guo Y.S., J.Ethnopharmacol.,2004,93(2/3),325—330[8] Ma Q.S.,Wang Q.,Zhao K.S.,Zhai S.B.,Liu S.,Liu Z.Q.,Chem.J.ChineseUniversities,2013,34(12),2716—2720(马青山,王茜,赵凯姝,翟淑波,刘舒,刘志强.高等学校化学学报,2013,34(12),2716—2720)[9] van Breemen R.B.V.,Huang C.R.,Nikolic D.,Woodbury C.P.,Zhao Y.Z.,VentonD.L.,Anal.Chem.,1997,69(11),2159—2164[10] Johnson B.M.,Nikolic D.,van Breemen R.B., Mass Spectrom.Rev.,2002,21(2),76—86[11] Liu Y.,Zhou H.,Liu S.,Liu Z.Q.,Chem.J.Chinese Universities, 2013,34(4),813—818(刘洋,周慧,刘舒,刘志强. 高等学校化学学报,2013,34(4),813—818)[12] Qi Y.,Li S.Z.,Pi Z.F.,Song F.R.,Lin N.,Liu S.,Liu Z.Q.,Talanta, 2014,118,21—29[13] Xu Z.,Yao S.J.,Wei Y.L.,Zhou J.,Zhang L.,Wang C.H.,Guo Y.L., J.Am.Soc.Mass Spectrom., 2008,19(12),1849—1855[14] Zhou H.,Li H.L.,Zheng Z.,Song F.R.,Xing J.P.,Liu Z.Q.,Liu S.Y.,J.Liq.Chromatogr.R.T.,2012,35(1—4),1—14[15] Liu Y.,Liu S.,Liu Z.Q., J.Chromatogr.B,2013,923(1),48—53[16] Liu S.,Xing J.P.,Zheng Z.,Song F.R.,Liu Z.Q.,Liu S.Y., Anal.Chim.Acta,2012,715(17),64—70[17] Liu S.,Yan J.,Xing J.P.,Song F.R.,Liu Z.Q.,Liu S.Y.,J.Pharmac.Biomed.Anal.,2012, 59,96—101[18] Zhu H.B.,Liu S.,Wang C.Y.,Liu Z.Q.,Song F.R.,Chem.J.Chinese Universities,2013,34(7),1635—1639(朱洪彬,刘舒,王春艳,刘志强,宋凤瑞.高等学校化学学报,2013,34(7),1635—1639)[19] Hu Y.M.,Su G.H.,Sze S.C.W.,Ye W.,Tong Y., Biomed.Chromatogr.,2010,24(4),438—453[20] Zhang Y.F.,Shi Q.R.,Shi P.Y.,Zhang W.D.,Cheng Y.Y., Rapid Commun.Mass Spectrom.,2006,20(15),2328—2342(Ed.: N,K)† Supported by the National Natural Science Foundation ofChina(Nos.21175128,81303280).。
异甘草素的药理分析
异甘草素的药理分析作者：赵立敏来源：《健康必读·下旬刊》2011年第03期【中图分类号】 R544.1 【文献标识码】 A 【文章编号】1672-3873（2011）03-0354-02【摘要】异甘草素为甘草中异黄酮类化合物，近年来其广泛药理活性备受关注。
文章对异甘草素国内外药理活性研究文献进行了综述。
异甘草素有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等作用，并能扩张动脉，对心脏和脑有保护作用。
【关键词】异甘草素药理作用甘草为多年生草本豆科植物，生于向阳干燥的钙质草原、河岸砂质土等地，主产于内蒙古、新疆、甘肃等省，是我国野生甘草种类最多、蕴藏量最丰富的地区之一。
甘草以根和根茎入药，秋季采挖，除去茎基、枝叉、须根等，截成适当长短的段，晒至半干，打成小捆，再晒至全干，也有切成片的，亦有将外面栓皮削去者，称为“粉草”。
甘草的根和根茎含三萜皂苷，如甘草酸，即甘草甜素，是甘草次酸的二葡萄糖醛酸苷，为甘草的甜味成分。
从甘草根的水解产物中分离出18α-甘草次酸；还分离出多种黄酮成分，其中有甘草素（即4、5-二羟基双氢黄酮）、异甘草素（2、2、4-三羟基查耳酮），甘草苷（即甘草素4-β-葡萄糖苷）、新甘草苷（即甘草素-7-β-葡萄糖苷）、新异甘草苷（即异甘草素-4-β-葡萄糖苷），还有甘草查尔酮A和甘草查尔酮B。
一、抗肿瘤作用1 、对诱癌剂和促癌剂的抑制作用据报道，异甘草素可以抑制致癌剂的致癌作用，其中12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13 (TPA) 、7-溴甲苯-a-蒽 (BrMBA)、氧化偶氮甲烷(azoxymethane)、金属镉等都可诱发肿瘤的发生。
Baba M等用氧化偶氮甲烷诱导小鼠变异结肠腺窝病灶模型，也证明了异甘草素可能是一种潜在的结肠癌的化学预防剂。
Kim SC等［8］报道异甘草素通过抑制Bad易位于线粒体，降低线粒体内Bal(xl)和细胞色素C的表达，减少多聚(ADP-核糖)聚合酶的清除，来实现其对镉（Cd）诱导细胞凋亡的保护作用。
枳椇子不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的作用及动力学研究
◆论著◆中药研究枳椇子不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的作用及动力学研究张德成1，王 虹2，邵文卓1，张震宇1，刘国香1，林桂涛1（ 1.山东中医药大学，山东 济南 250355； 2.青岛阿尔泰基因工程有限公司，山东 青岛 266400）［摘要］ 目的：探讨不同溶剂提取枳椇子对黄嘌呤氧化酶（XOD ）的影响及其动力学模型，为研究高尿酸血症提供实验依据。
方法：用水、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇提取枳椇子，测定各提取液中黄酮类成分的含量，采用紫外分光光度法分析不同溶剂提取液对XOD 的作用及动力学模型。
结果：枳椇子不同溶剂提取液对XOD 均有抑制作用，其中50%乙醇提取液和70%乙醇提取液的抑制作用较强，其提取液中黄酮类成分含量也较高，抑制效果呈剂量依赖性；95%乙醇提取物黄酮总量较低，但也显示出较好的抑制作用。
动力学分析显示，不同溶剂提取液对XOD 的亲和力值α均大于1，70%乙醇提取液对XOD 的亲和力值为134.40，更易与XOD结合，各提取液均表现为混合型抑制。
结论：枳椇子提取液具有抑制XOD 的作用，效果以50%乙醇提取液和70%乙醇提取液为著，95%乙醇提取物对XOD 的抑制效果与提取液中的其他成分相关。
枳椇子提取液的抑制作用类型属于混合型抑制，即竞争性-非竞争性抑制，且竞争性抑制占主导地位。
［关键词］ 枳椇子；水；乙醇；黄嘌呤氧化酶；黄酮类成分；尿酸；混合型抑制［中图分类号］ R285.5 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007-659X （2024）02-0217-10DOI ：10.16294/ki.1007-659x.2024.02.015Effect and Kinetics of Different Solvent Extracts of Zhijuzi （Hovenia Dulcis ） on Xanthine OxidaseZHANG Decheng 1，WANG Hong 2，SHAO Wenzhuo 1，ZHANG Zhenyu 1，LIU Guoxiang 1，LIN Guitao 1（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine ，Jinan 250355，China ；2.Qingdao Altai Genetic Engineering Co.，Ltd.，Qingdao 266400，China ）Abstract Objective ：To investigate the effect and kinetic model of Zhijuzi （Hovenia Dulcis ） extracted by different solvents on xanthine oxidase （XOD ），andto provide experimental evidence for the study ofhyperuricemia. Methods ：Zhijuzi was extracted with water ，50% ethanol ，70% ethanol ，and 95% ethanol respectively. The content of flavonoid constituents ineach extract was measured ，and the effect and kinetic model of the different solvent extracts on XOD were analyzed by ultraviolet spectrophotometry.［收稿日期］ 2023-09-29［基金项目］ 山东省重点研发计划（重大关键技术及重点产业关键技术）项目（编号：2016CYJS08A01-10）［作者简介］ 张德成（1997—），男，山东临沂人，2021年级硕士研究生，研究方向：中药新制剂、新技术的研究。
紫外分光光度法测定中药中黄嘌呤氧化酶抑制活性研究
紫外分光光度法测定中药中黄嘌呤氧化酶抑制活性研究
罗六保;谢志鹏
【期刊名称】《化学世界》
【年(卷),期】2009()5
【摘要】黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂是一类重要的抗痛风药物。
寻求具有强XOD 抑制活性的天然药物及其活性成分具有重要意义。
采用紫外分光光度法对一系列中药中XOD抑制活性进行了直接测定。
考察了抑制活性最强药物各部分的活性,并对其主要活性部位分离出了一个活性成分,最后采用IR、MS1、H NMR和13C NMR分析手段对其进行了鉴定。
结果表明,丹皮具有最强XOD抑制活性,乙酸乙酯部分为其主要活性部位,没食子酸为其活性成分之一。
【总页数】4页(P273-275)
【关键词】黄嘌呤氧化酶抑制活性;紫外分光光度法;中药;活性部位;活性成分
【作者】罗六保;谢志鹏
【作者单位】江西应用技术职业学院应用化学系;江西理工大学化学系
【正文语种】中文
【中图分类】O657.32
【相关文献】
1.中药提取物中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选 [J], 黎莉;戴立珍;杨靖;方继德
2.红花中黄酮类成分对黄嘌呤氧化酶抑制活性的研究 [J], 于思慧;宋慧鹏;高雯;张慧
3.离心超滤质谱法筛选中药复方二妙丸中黄嘌呤氧化酶抑制剂 [J], 徐晨;刘舒;刘志强;宋凤瑞
4.9种中药提取物黄嘌呤氧化酶抑制活性研究 [J], 杨道茂;欧阳明安
5.9种通络祛风中药提取物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制活性研究 [J], 李芮; 马良会; 王栋; 张春雷; 周孟; 廖尚高
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异甘草素药理作用探究
异甘草素的药理作用研究作者：李德芳，王振华，罗锋，郑秋生摘要】异甘草素（isoliquiritigenin）为甘草中异黄酮类化合物，近年来其广泛药理活性备受关注。
文章对异甘草素国内外药理活性研究文献进行了综述。
异甘草素有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等作用，并能扩张动脉，对心脏和脑有保护作用。
中国论文联盟整理。
【关键词】异甘草素药理作用异黄酮甘草Abstract：Isoliquiritigenin, an isoflavone extracted from the traditional Chinese herb, Glycyrrhiza uralensis Fisch, has extensive pharmacological activities. This article reviewed the pharmacological studies of isoliquiritigenin focused on its potent anti-tumor effects, anti-oxidative effects, anti-allergic effects, and the heart and brain protective effects, and so on.Key words：Isoliquiritigenin; Pharmacological activity; Isoflavone; Glycyrrhiza uralensis fisch甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.为多年生草本豆科植物，生于向阳干燥的钙质草原、河岸砂质土等地，主产于内蒙古、新疆、甘肃等省，新疆地区目前发现的野生甘草品种有9个，占全球22种的41%，新疆甘草资源供给量占到了全国的70%以上，是我国野生甘草种类最多、蕴藏量最丰富的地区之一［1］。
甘草以根和根茎入药，秋季采挖，除去茎基、枝叉、须根等，截成适当长短的段，晒至半干，打成小捆，再晒至全干，也有切成片的，亦有将外面栓皮削去者，称为“粉草”。
具有降尿酸作用的药食两用中药的筛选
具有降尿酸作用的药食两用中药的筛选申启荣;王江录;余宙;范青生【期刊名称】《南昌大学学报（理科版）》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】从药食两用的中药中筛选出具有降尿酸作用的物质。
对17种中药的水提物进行体外抑制黄嘌呤氧化酶的实验。
筛选出具有抑制作用的中药，并对多个浓度的进行检测，结果：在浓度为0．5 g·mL－1时，蛹虫草、荷叶、山楂、诃子、葛根、三七的水提物的抑制率均大于10％，对这6种物质进行多浓度的检测，在浓度为0．25 mg·mL－1时，5种物质有抑制作用并且诃子的抑制率最高。
诃子的水提取在各个浓度均有较好的抑制率。
%This study aimed to screen the contents with anti-hyperuricemia effects from edible traditional Chinese herbs.The in vitro xanthine oxidase inhibitory experiments of the water extracts of 17 kinds of edi-ble traditional Chinese herbal were conducted.Various concentrations of edible traditional Chinese herbs were studied to confirm the anti-hyperuricemia effects.Results:The inhibition rate of the water extracts of Cordyceps militaris,lotusleaf,hawthorn,Terminalia chebula,Kudzu vine,and notoginseng were over 10%at the concentration of 0.5g/ml.Different concentrations of the 6 substance were also detected.At 0. 25mg/ml,5 showed the inhibitory activity and Terminalia chebula had the highest inhibition ratio.The most active extract was Terminalia chebula.【总页数】4页(P175-178)【作者】申启荣;王江录;余宙;范青生【作者单位】南昌大学中德联合研究院，江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院，江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院，江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院，江西南昌 330047【正文语种】中文【中图分类】R283.6【相关文献】1.基于均匀设计的镇静催眠药食两用中药复方筛选与验证 [J], 朱杰;于立芹;张华南;董建军;徐如冰;李建;全彦涛2.具有鱼虾镇静催眠作用的药食两用物质 [J], 钱星;沈克琼;张恒3.药食两用的中药复合组合物对即时解酒保肝的作用研究 [J], 夏祎稚;邵卫樑4.药食两用的中药复合组合物对即时解酒保肝的作用研究 [J], 夏祎稚;邵卫樑5.药食两用中药抗肝损伤作用及辨证施食规律分析 [J], 缪冬瑞;李家劼;李丹阳;蒋梦银;唐芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性抑制的实验研究
Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性抑制的实验研究
王海东;谢建祥;林伟青
【期刊名称】《实用中西医结合临床》
【年(卷),期】2015(015)009
【摘要】目的:通过体外酶学试验分析Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性的影响及抑制机理.方法:利用紫外分光光度计观测尿酸生成导致的吸光度变化值,测定波长为292 nm,并以黄嘌呤为底物根据测定结果绘制Lineweaver-Burk和Dixon图.结果:Eupatilin对黄嘌呤氧化酶表现很强的抑制作用,其Ki值为0.128 6 μg/ml,抑制类型为混合型;而别嘌吟醇作为对照,其Ki值为0.62 μg/ml,抑制类型为竞争性抑制结论:Eupatilin具有明显的黄嘌呤氧化酶抑制活性.
【总页数】3页(P87-89)
【作者】王海东;谢建祥;林伟青
【作者单位】江西省人民医院南昌330006;江西省儿童医院南昌330006;江西省人民医院南昌330006
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.买麻藤提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性实验研究 [J], 杨琴芳;袁红宇;钱雅璐
2.Apigenin对黄嘌呤氧化酶活性抑制的实验研究 [J], 林伟青;谢建祥;王雅娟;王海东
3.水芹提取物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用 [J], 袁丽;张耀雷;王婷婷;李娉;罗明珠;呼永河
4.基于黄嘌呤氧化酶活性抑制和斑马鱼高尿酸血症模型的降尿酸功效食药材筛选[J], 张瑛毓;普布多吉;卢聪;王凤忠
5.黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用 [J], 李晶;姜丽丽;李沐轩;邓凤;徐宋瑶;薛昕;扈瑞平;薛慧婷
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体外筛选具黄嘌呤氧化酶抑制活性的天然产物近年来,随着人们生活水平的不断提高,痛风的发病率也呈逐渐上升趋势。
痛风是由于体内嘌呤代谢紊乱,产生尿酸过多或尿酸排泄过少而导致血中尿酸升高,尿酸盐结晶沉积在组织中引起的反复发作性炎症疾病。
临床上治疗痛风的方法主要包括促进尿酸排泄和抑制尿酸生成。
其中,通过抑制黄嘌呤氧化酶活性减少尿酸的生成被认为是治疗痛风的最有效的方法之一。
体内次黄嘌呤可在黄嘌呤氧化酶的催化下生成黄嘌呤,进一步生成尿酸,故抑制黄嘌呤氧化酶的活性可显著降低尿酸的生成。
目前临床应用的抗痛风药物的不良反应越来越突出,人们开始倾向于从天然产物中筛选具有抗痛风活性的化学成分。
我国中药资源丰富、中药的化学成分结构多样,作用靶点众多,因此从中药中筛选高效、低毒的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有良好的应用前景。
黄嘌呤氧化酶抑制剂的体外筛选方法包括紫外分光光度法、电化学法、超高效液相色谱法等,但都存在不同的缺点,因此,本课题拟基于高效液相色谱(HPLC)建立一种简单、快捷、准确的体外筛选方法,并利用建立的方法筛选中药及天然产物中具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的先导化合物,为抗痛风新药的研究提供理论依据。
目的建立基于HPLC体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的新方法;利用该方法考察具有抗痛风活性中药的黄嘌呤氧化酶抑制活性;选择活性最好的中药作为研究对象进行活性追踪分离,以期获得活性较好的先导化合物。
方法通过HPLC测定酶促反应体系中底物黄嘌呤在反应前后含量的变化,建立体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法。
色谱条件如下:Agilent SB-C18柱,4.6 mm′250 mm,5mm;流动相,0.02
mol·L-1 KH2PO4(含甲醇1%);流速,1.0 m L·min-1;进样量,20m柱温,室温;检测波长,254 nm。
利用建立的方法对文献报道具有抗痛风活性的14味中药,即苏木、海桐皮、牡丹皮、秦皮、虎杖、威灵仙、玉米须、土茯苓、金钱草,使君子、葛花、秦艽、高良姜和樗白皮进行了黄嘌呤氧化酶抑制活性的考察,并对其中抑制活性最好的中药牡丹皮在活性追踪指导下进行了化学成分研究,结合质谱和核磁数据,对得到的单体化合物的结构进行了鉴定,并对其黄嘌呤氧化酶抑制活性进行了考察。
结果基于HPLC体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法线性关系良好,精密度、稳定性、重复性、回收率结果均符合方法学考察的要求。
利用该方法对14味中药进行筛选,发现使君子、苏木、虎杖和牡丹皮四味中药70%乙醇提取物的酶抑制作用较强,其IC50分别为10.04、8.02、2.06和1.36 mg·m L-1。
对活性最好的中药牡丹皮进行活性成分追踪,从其乙酸乙酯和正丁醇部位分得15个化合物,分别鉴定为没食子酸(1),没食子酸甲酯(2),没食子酸乙酯(3),槲皮素(4),儿茶素(5),胡萝卜苷(6),芍药苷(7),牡丹苷D(8),4-O-甲基氧化芍
药苷(9),没食子酰氧化芍药苷(10),丹皮酚(11),丹皮酚原苷(12),没食子酰氧化芍药苷B(13),丹皮酚新苷(14)和没食子氧化芍药苷D(15)。
进一步活性筛选发现,化合物1-5,10,13和15具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,其中化合物1-3,10,13和15活性较强,其IC50分别为2.04,1.91,3.60,0.75,1.28,0.97 mmol·L-1。
此外,针对活性较好的苏木,对前期本课题组分离得到的24个单体化合物进行活性筛选,发现化合物7,3’,4’-三羟基-3-苄基-2氢-苯并吡喃,3-去氧苏木酮B,苏木查尔酮和原苏木素A具有一定的活性。
结论基于HPLC法体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法操作简单、快速、可靠且易推广,为黄嘌呤氧化酶抑制剂
的初步筛选提供了新途径。
利用上述建立的方法从中药牡丹皮中获得8个有活性的单体化合物。