第二章2 鉴别 薄层色谱法PPT课件

1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点 样→展开→显色与检视
1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声 提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
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2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
A
B
W1
W2
d1
d2
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3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
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1.出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
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4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
被分离物质的Rf值和物质的相互分离度不一致，影响薄层色谱 的重现性。
六、仪器与材料（略） 七、操作步骤
第二章 中药制剂的鉴别 第二节 理化鉴别
三、色谱法 --------------薄层色谱法
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薄层色谱法在中药制剂的定性鉴别中得到 广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双 重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属 性，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。薄 层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点， 应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时， 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外， 分离度应大于1.0。
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分离度（R）的计算公式为：
R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；
d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。
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4.阴阳对照
由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行
鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制
剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制
成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材，
剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、
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2.薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
点样开始直展开前，薄层板都是暴露在空气中，其活性取决于 空气的相对湿度，薄层板在不同的相对湿度条件下，其吸附活 性亦不同，致使薄层色谱重现性较差。
对照物的设置有以下四种方式： 1.对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制 成对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一 颜色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置 一种或数种对照品。 2.对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
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四、对照物的选择 3.对照品和对照药材同时对照(“双对照”)
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2.特点 简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采
用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 三、系统适用性试验(05版药典新增) 1.检测灵敏度
主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释 若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一 块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。 2.分离度
方法提取，制成该味药的阴性对照液。
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条
件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对
照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
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五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
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6.记录
薄层色谱图象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子
图象的形式保存。也可以用扫
为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照 品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。
例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品 来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
原点起 始线
≥5mm
展开剂 液面
≥8mm
（展开距离）
8~15cm
1~1.5cm (点样位置)
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4.展开（略） 5.显色与检视
颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。 无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色， 或再加热使之显色。 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在紫外灯 （365nm）下观察荧光色谱。 有的成分可用试剂的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）熏蒸显色。 无色有紫外吸收且不产生荧光的成分可用荧光淬灭法显色。 即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯 （254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。