金免疫测定技术
第5章 常见免疫学检测技术-胶体金免疫层析
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
LA T E R A L FLO W T E S T S T R IP O F V E D A LA B
30
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©①双抗体夹心法
• 固定于膜上的抗 体1＋标本中待测 抗原＋金标记的 抗体2显色
• 用于测抗原
原 • 是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术 理 • 将结合各的种以反应微试孔剂滤分膜点为固载定体在的测快试速版的相固应相
• 通区膜域过免，毛疫检细分测析管标作技用术本加使在样试品纸溶条 液的 在一 层端析材料 上泳动，样本中的待测物与层析材料中 的反应试剂发生特异性结合反应，形成 的复合物被富集或固定在层析条上的特 定区域（检测线），通过标记抗体显色
§ 最初应用于免疫组化染色，随后发展到以膜为 载体的免疫测定技术
一、胶体金标记免疫检测应用现状
§ 胶体金标记技术具有简单、快速、灵敏等特 点，得到了广泛应用
§ 20世纪90年代兴起的胶体金免疫层析技术，特 别是试纸条的发展，使操作更加方便快捷
§ 胶体金标记免疫检测技术在临床医学检测、激 素检测、食品安全检测、药物残留和毒品快速 检测，以及抗原抗体分析等诸多领域迅速发展
食品 食品安全检测中心, 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精
安全 各监管部门
等）,大肠杆菌,黄曲霉素
--
瘦 肉 精
沙 丁 胺 醇
--
瘦 肉 精
沙 丁 胺 醇
—
瘦 肉 精
克 伦 特 罗
瘦肉精—莱克多巴胺
瘦肉精—莱克多巴胺
瘦肉精—莱克多巴胺
—
兽 药
恩 诺 沙 星
致病菌--大肠杆菌O157
胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术是一种重要的生物分析技术，它在医学诊断、生物学研究、环境监测等领域有着广泛的应用。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、方法、应用及发展前景等方面，以帮助读者深入了解这一技术的重要性和特点。
一、胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是一种基于抗原与抗体特异性结合原理的生物分析技术。
其原理基于胶体金颗粒的特殊性质，当胶体金颗粒与特定的抗体或抗原结合时，会产生颜色变化。
这种颜色变化可以通过裸眼观察或仪器测定来定量分析目标物质的含量，从而实现对目标分子的快速、灵敏、特异性检测。
二、胶体金免疫层析技术的方法1. 样品预处理在进行胶体金免疫层析技术前，需要对样品进行一定的预处理工作，以获得高纯度的检测目标。
这包括样品的收集、提取、稀释、清洁等操作，以确保样品的纯度和稳定性。
2. 抗原抗体结合在胶体金免疫层析技术中，首先将抗原或抗体与胶体金颗粒结合，形成胶体金-抗原或胶体金-抗体复合物。
这一步是整个技术的关键，其特异性结合决定了最终结果的准确性和可靠性。
3. 层析纸制备将样品和复合物应用于层析纸上，经过升温、冷却和其他特殊处理，使复合物在层析纸上呈现出清晰的条带，以便进行后续的观察和分析。
4. 结果分析通过裸眼观察或仪器测定，分析样品中的目标分子的含量，从而得出最终的检测结果。
三、胶体金免疫层析技术的应用1. 医学诊断胶体金免疫层析技术在临床医学中被广泛应用，例如对传染病、肿瘤标志物、生化指标等的快速检测，为疾病的早期诊断和治疗提供了重要的支持。
2. 食品安全该技术可以用于食品中有害物质的检测，如农药残留、重金属污染等，确保食品的安全和健康。
3. 环境监测胶体金免疫层析技术也可以用于环境监测领域，检测水质、土壤质量等环境参数，为环境保护和生态平衡提供数据支持。
四、胶体金免疫层析技术的发展前景随着生物技术和纳米技术的不断发展，胶体金免疫层析技术将得到更广泛的应用和改进。
未来，可以预见该技术在药物筛选、基因检测、个性化医疗等领域将发挥越来越重要的作用。
免疫检验考试辅导：金免疫测定技术
金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。
1）斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。
2）斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。
第5章 常见免疫学检测技术-胶体金免疫层析
夹心法反应演示
阳性
阴性
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©②间接法检测抗体
间接法反应演示
阳性
阴性
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©③间接竞争法
竞争抑制法反应演示
阴性
弱阳性
阳性
检测线颜色强度与样品浓度负相关
竞争法结果判断
（三）胶体金免疫测定技术
ª 2.胶体金免疫层析试纸条制作 § （1）试剂、耗材准备 § （2）金标抗体的制备 § （3）试纸条的组装 § （4）试纸条的优化 § （5）样品检测及分析
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （1）试剂、耗材准备
• 硝酸纤维素膜的参数：孔径、对称性、层析速度、表面 活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均 一性等
• um 指的是膜孔径，但膜在生产过程中，由于干燥成型 等过程的非绝对均一，膜的孔径也是非均一的，不同厂 家膜孔径标准无法统一衡量
（三）胶体金免疫测定技术
ª 1.主要形式（基本原理） § 斑点金免疫渗滤/dot immunogold filtration
assay, DIGFA § 胶体金免疫层析/immunochromatography assay,
ICA--试纸条
（三）胶体金免疫测定技术
§ （1）斑点金免疫渗滤
原 • 以硝酸纤维素膜作为固相载体、包被抗 理 原或抗体
（二）胶体金的制备
® 一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣 酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等
ª 以柠檬酸三钠还原法为例 § 取0.01% HAuCl4 溶液100 mL 搅拌、加热、回
流，沸腾2 min, 迅速一次加入一定量的 1% 柠 檬酸三钠水溶液（现配），保持低沸，经由蓝、 灰、至呈现透明的橙红色停止加热。回流冷却至 室温（应为原体积，否则应用蒸馏水恢复体积） § 加入柠檬酸钠的量不同，胶体金颗粒大小不同
第十一章金免疫技术【52页】
三、临床应用与评价
1. 应用 （1）细胞的膜表面抗原 （2）细胞胞/组织内抗原 （3）组织中或亚薄切片中抗原 (4) 病毒检测或病毒分型
2.评价
（1）优点：标本用量少,敏感性高，特异性好, 标本用量少,可进行双标或多标检测。
原理：
免疫反应
胶体金颗粒(CG)沉积在Ag位置
CG 催化，对苯二酚还原剂
银离子(Ag+) 还原成 银原子(Ag)
银原子围绕金颗粒形成一个“银壳”
子
“银壳”催化，还原更多银离
“银壳”越长越大,抗原位置得到清楚放大
（二）操作技术要点
1.试剂：免疫金、配制新鲜配制银染液。 2.检测：多用于抗原检测。
目前得以广泛应用。
第一节 胶体金与免疫金的制备
1. 胶体金的制备 2. 免疫金的制备 3. 免疫金的保存
1.1胶体金的结构
胶体金是由金盐被还原成 原金后形成的金颗粒悬液。
胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au） 及包围在外的双离子层构成(内层AuCl2－， 外层H+）。
金颗粒间静电相互排斥而悬浮形成一种稳定 的胶体状态。
DIGFA
穿流（flow through）
DICA
横流（lateral flow）
(二) 方法类型
1.双抗体夹心法 2.竞争法/抑制法 3.间接法
1.双抗体夹心法
？
免疫层析试验双抗体夹心法测
双抗体夹心法
标本
Gold
test
control
结果观察
Gold
阳性
test control
金免疫分析技术
斑点金免疫渗滤试验
斑点金免疫渗滤试验
技术类型
DIGFA—双抗体夹心 法测抗原
抗体结合在微孔滤膜 的中央>>> 加待测标 本> >>加金标抗体 >>>洁洗涤剂后，阳 性结果，膜中央呈现 红色斑点
DIGFA--间接法测抗体
抗原包被在微孔滤膜 上》》滴加待测标本》 》加洗涤剂后》》滴加 金标抗抗体》》加洗涤 剂后，阳性结果，膜中 央呈红色斑点
斑点金层析试验 DICA
（ dot immunogold chromatographic assay）
斑点金免疫渗滤试验
DIJFA
原理
①将抗原抗体点加在③固相载体硝酸纤维素薄膜上，制 成抗原抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上
②标本中的抗原抗体被膜上的抗体抗原捕获，无关蛋 白随液体滤出
③加入胶体金标记物在渗滤中与相应的抗原抗体结合。
胶体金的制备
制备方法
氯金酸水溶液加热沸腾》》搅拌着加入枸橼 酸钠水溶液 》》 金黄色的氯金酸水溶液在 2min内变为紫红色》》 再煮沸15min冷却后以 蒸馏水恢复到原体积
胶体金的制备
注意 事项
1）、玻璃容器的清洁容器使用前必须酸洗和硅化
硅化的一般过程 用5%的二氯二甲硅烷的氯仿溶液浸泡玻璃容器 1min，室温干燥后，用蒸馏水冲洗，在干燥备用。
穿流（flow through）
DICA
横流（lateral flow）
斑点金层析试验
方法分类
双抗体夹心法测抗原 间接法测抗体 竞争法测抗原
斑点金层析试验
DICA--双抗体夹心斑点金层析试验
DICA--间接法测抗体
金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原
金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原在当今社会，人类对健康的重视程度越来越高，对于疾病的预防和治疗也变得越来越重要。
在疾病的预防和治疗过程中，快速、准确的诊断方法显得尤为关键。
金免疫层析试验是一种常用的免疫分析技术，其双抗体夹心法也被广泛应用于检测b抗原。
本文将对金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原的原理、方法和应用进行探讨，以期为读者深入了解该技术提供一定的参考。
一、原理金免疫层析试验双抗体夹心法是一种免疫层析技术，利用金颗粒和特异性抗原-抗体反应进行检测。
在双抗体夹心法中，样品中的b抗原首先与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物，然后将金颗粒标记的抗b抗体加入样品中，与未结合的b抗原结合，形成抗原-抗体-抗体复合物，最终在试纸上形成可见的条带。
二、方法1. 样品处理：将待测样品与特异性抗体充分混合，反应一定时间后离心，取上清液备用。
2. 移液：将上清液滴于条带上，待完全渗透后，加入金颗粒标记的抗b抗体溶液。
3. 测定结果：观察试纸上是否出现双条带，若出现双条带则为正样品，表示样品中含b抗原；若只出现负对照线，则为负样品，表示样品中不含b抗原。
三、应用金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原在临床诊断中具有较广泛的应用。
它具有操作简便、结果快速、准确性高等特点，大大方便了临床医生的诊断工作。
尤其是在疫情防控期间，该技术可快速筛查出患者是否感染b病毒，对于疫情的防控和诊断具有重要意义。
金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原是一种重要的免疫分析技术，其原理简单，方法操作便捷，应用范围广泛。
相信随着科技的不断发展，该技术在临床诊断中的应用将会更加深入，为人类的健康事业做出更大的贡献。
金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原在临床诊断中的应用金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原作为一种快速、敏感和高效的免疫分析技术，其在临床诊断领域具有广泛的应用价值。
下面将就其在不同领域的应用进行进一步探讨。
一、传染病诊断金免疫层析试验双抗体夹心法测b抗原在传染病的诊断中扮演着重要的角色。
金免疫技术(免疫学检验课件)
优质
胶体金
劣质
二、胶体金的制备
胶体金（colloidal gold）的制备一般采用还 原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏 血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金溶 液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金原 子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶（gold solution）。
• 免疫渗滤试验（IFA）始创于1985年，最初以酶作为 标记物。
• 20世纪90年代初金免疫渗滤技术得到了快速发展，用 于检测各种传染病的抗体和肿瘤标志物等。
• 目前临床中用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试 剂就是应用这种方法。
一、检测原理
• 将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素膜上， 制成抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上 ，依次在膜上滴加标本、金标试剂及洗涤液等，液体 很快渗入吸水材料中，阳性反应即在膜上呈现红色斑 点。
第一节 胶体金与免疫金的制备
一、胶体金的特性
• 胶体金也称金溶胶，是由金盐被还原成原金后形成 的金颗粒悬液。核心为原子金（Au），外围双离子 层（内层Cl-，外层H+）。
• 胶体金颗粒大小多在1nm～100nm，微小金颗粒稳定 、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体 金溶液。
呈色性：不同大小的胶体金呈色有一定差别 微小-呈红色； 最小（2-5nm）—橙黄色； 中等大小（10-20nm）—酒红色； 较大（30-80nm）—紫红色。
待测标本 金标抗体
A
B
。
第三节 胶体金免疫层析技术
• 免疫层析技术（ICA）的原理与渗滤技术相同，不同 点在于液体的移动是基于层析作用的横流，而不是通 过直向的穿流。
• 该方法的试剂为试纸条形式，结构简单。 • 测定项目包括HCG等激素、肿瘤标志物、心血管病标
-金免疫技术
免疫金复合物最终用稀释液配制成工作浓 度保存。稀释液通常是加入含稳定剂的缓 冲液。缓冲溶液常用中性的PBS或Tris缓冲 液。PEG和BSA是最常用的稳定剂。
稳定剂有两大作用：①为保护胶体金的稳 定性，使之便于长期保存；②为防止或减 少免疫金复合物的非特异性吸附反应。
第二节 金免疫测定
一、斑点金免疫渗滤试验 二、 斑点金免疫层析试验
一、斑点金免疫渗滤试验
原理: 斑点金免疫渗滤试验是将抗原或抗体 点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上（这种 固相载体具有过滤性能）制成抗原或抗体 包被的微孔滤膜贴置于吸水材料上，依次 滴加在膜上的标本、免疫金、及洗涤液等 液体很快渗入吸水材料中，最后阳性反应 在膜上呈现红色斑点。液体通过微孔滤膜 时，渗滤液中的抗原或抗体与膜上的抗体 或抗原相接触，起到亲和层析的浓缩，达 到快速检测的目的。
2.技术要点
胶体金溶液的pH值调整 用K2CO3或HCl溶液 调节胶体金溶液的pH至选定值。 蛋白质最适标记量的确定 标记过程 在电磁搅拌下将1/10体积的合适浓 度的蛋白质溶液加于胶体金溶液中，反应一定 时间后加入 BSA并调整pH至8.5，放置室温继 续反应数分钟。 离心分离
三、免疫金的保存
测定时先将缓冲液加在D处层析至C处使金标物复溶，然后将 标本加在E处使其与染料一起在膜的层析作用下向F端移动， 若标本中有待测抗体存在，则与膜上抗原结合形成抗原抗体 复合物，待有色染料延伸至膜上标记线G处时，在F处加缓冲 液，合上测试卡，A处的强大吸水作用使膜上液体反向流动， 标本中非特异性IgG及无关物向E处反向层析，随后而来的金 标羊抗人抗体与抗原抗体复合物结合，出现棕红色线条。无 棕红色线条出现则表明血清中无特异性抗体。
胶体金免疫层析原理
胶体金免疫层析原理
胶体金免疫层析是一种利用胶体金标记技术和层析技术的免疫检测技术，是一种简便、快速、准确、灵敏度高的免疫检测方法。
该方法的特点是：1.在短时间内可同时检测多种物质，一次可同时测定多个不同性质的样品；2.可在现场测定；3.对样品进行定性或定量检测，便于现场观察分析；4.与传统方法相比，具有快速、简便、低成本等特点。
因此，在临床检验中得到广泛应用。
胶体金免疫层析技术是在金标垫上包被抗人IgG或IgM抗体的半定量或定量的胶体金，作为一种标记物加入到待检样品中，通过对抗体的吸附作用，在胶体金颗粒上形成肉眼可见的金标记线（GoldLine）。
当样品中含有待检成分时，其胶体金标记线和待检抗原或抗体结合形成肉眼可见的胶体金颗粒；当样品中不含有待检成分时，其胶体金标记线和待检抗原或抗体不结合形成肉眼可见的胶体金颗粒。
由于胶体金标记物与待检抗原或抗体结合形成肉眼可见的带颜色的条带状物，即可判断样品中有无待检成分。
—— 1 —1 —。
胶体金免疫色谱试验测定法
胶体金免疫色谱试验测定法
胶体金免疫色谱试验（Gold Immunochromatography Assay，简称GIA）是一种常用于检测生物样本中特定分子（如蛋白质、荷尔蒙、抗体等）的定性或定量分析方法。
一般的胶体金免疫色谱试验包括以下步骤：
1. 样品处理：将待检生物样品（如血液、尿液、唾液等）进行预处理，通常包括离心、稀释或某些特殊样品的处理方法。
2. 准备试纸条：将试纸条浸泡于样品中，使试纸条上的涂层带上样品中的目标分子。
3. 上样：将预处理后的样品滴入试纸条上的样品进样孔，让样品与试纸条上的特异抗体结合。
4. 试纸条扩散：待样品进入样品孔后，样品中的目标分子会与试纸条上固定的抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
复合物会随着样品的扩散而向试纸条上移动。
5. 可视化结果：在试纸条上存在着特定检测线。
当复合物通过检测线时，会发生阳性反应，即出现颜色改变。
通过检测线的出现与否，可以判断样品中是否存在目标分子。
胶体金免疫色谱试验的优点包括操作简便、快速、便携、结果可视化等，因此被广泛应用于临床诊断、食品安全、环境监测等领域。
17.2-金免疫标记技术
一 洗 净 双 手
四
立 即 加 1 2 滴 缓 冲 液
操作
二 用 采 血 针 采 指 尖 血
样三 孔将 1 滴 指 尖 血 滴 入 加
？？结果
步骤5：15分钟读 取结果
？？结果
讨论分析
胶体金标记技术 (Immunogold labeling technique)
是以胶体金作为示 踪标记物，应用于 抗原抗体反应的一 种新型免疫标记技 术。
讨论分析
制备高质量胶体金的注意事项
（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃 器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双 馏水冲洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活 化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。 （2）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用 双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的 试剂经超滤或微孔滤膜（0.45µ m）过滤，以除去其中 的聚合物和其它可能混入的杂质。
讨论分析
2．鞣酸—枸橼酸钠还原法 A液：1％HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。 B液：1％枸橼酸三钠4ml，1％鞣酸0.7ml，0.1Mol/L K2CO3液0.2ml，混合，加入双馏水至20ml。
将A液、B液分别加热至60℃，在电磁搅拌下迅速将 B液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变 成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm。如需 要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字 调整鞣酸及K2CO3的用量
讨论分析
示踪剂：以胶体金为指示剂，本 身形成免疫分析过程后的颜色标记
符号显示结果
自带质控对照
快速：全部检测过程 仅需 3-20分钟。
简便、经济实用
可单份检测，稳定性好
胶体金免疫层析间接法测抗体
胶体金免疫层析间接法测抗体概述在免疫学研究中，测定抗体的含量和活性是非常重要的。
胶体金免疫层析间接法是一种常用且高效的方法，用于测定抗体的存在和浓度。
本文将详细介绍胶体金免疫层析间接法的原理、步骤和应用。
胶体金免疫层析间接法原理胶体金免疫层析间接法是一种基于免疫层析的定性和定量分析方法。
其原理基于抗原-抗体反应和胶体金颗粒的特性。
胶体金颗粒具有良好的稳定性和生物相容性，在免疫层析中具有较强的敏感性和特异性。
胶体金免疫层析间接法步骤1.样品处理–收集样品并加工处理，确保样品的纯度和完整性。
–根据需求，可以对样品进行预处理，如稀释、去除干扰物等。
2.抗原固定–在固相载体（如纸张、膜等）上固定抗原。
–抗原可以直接固定在固相载体上，也可以通过其他方法间接固定，如沉淀、共价结合等。
3.样品添加–将处理好的样品加到固相载体上，与固定的抗原发生反应。
–反应时间和温度根据具体实验需求进行调整。
4.胶体金标记抗体–将特异性抗体与胶体金颗粒结合。
–通常通过物理吸附或共价结合方法将抗体与胶体金颗粒结合。
5.胶体金标记抗体添加–将胶体金标记的抗体加到固相载体上，与样品中的抗原结合形成免疫复合物。
–免疫复合物的形成会导致固相载体上的颜色变化，形成可见的测试线。
6.结果分析–根据形成的可见测试线的数量和强度，可以定性和定量地分析抗体的存在和浓度。
–通过对照样品和标准曲线，可以计算出样品中的抗体浓度。
胶体金免疫层析间接法应用胶体金免疫层析间接法在临床诊断、药物开发和基础研究等领域具有广泛的应用前景。
临床诊断胶体金免疫层析间接法可以用于诊断某些疾病和感染，如艾滋病、流感等。
通过检测人体产生的特定抗体，可以判断是否存在疾病或感染。
药物开发胶体金免疫层析间接法可以用于药物的筛选和评估。
通过检测药物对特定抗体的影响，可以评估药物的活性、特异性和毒副作用。
基础研究胶体金免疫层析间接法在免疫学和生物学研究中也有广泛的应用。
可以用于分析细胞表面标记物的表达和变化，研究免疫反应的机制和调控因子。
快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法的建立及应用
快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法的建立及应用一、引言快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法是一种用于检测乙肝表面抗原（HBsAg）的新型方法。
本文将探讨该方法的建立过程以及在临床应用中的意义和前景。
二、方法建立2.1 乙肝表面抗原乙肝表面抗原是乙型肝炎病毒（HBV）感染的重要指标，是乙型肝炎的诊断标志物。
建立快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法需要充分理解乙肝表面抗原的结构和功能。
2.2 胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术是一种常用的快速免疫学检测方法，通过胶体金颗粒的特殊性质，实现对目标物质的快速检测。
方法建立中需要选择适当的胶体金颗粒、抗体和测试条带。
2.3 建立快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法步骤1.准备样品和试剂2.处理样品，提取乙肝表面抗原3.准备测试条带和负控线、阳性线4.进行胶体金标记5.免疫层析过程6.结果解读和分析三、应用价值3.1 临床应用快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法具有快速、简便、灵敏度高等优点，适用于临床乙型肝炎的筛查和早期诊断。
通过该方法可以快速获取乙肝表面抗原的检测结果，为医生提供及时的诊断依据。
3.2 流行病学调查乙肝表面抗原的检测对于乙型肝炎的流行病学调查具有重要意义。
利用快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法可以对大规模人群进行快速筛查，了解乙型肝炎的流行情况，为制定预防措施和治疗方案提供科学依据。
四、前景展望快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法在乙型肝炎的诊断和监测中具有广阔的应用前景。
随着相关技术的不断发展和改进，该方法的灵敏度和特异性将得到进一步提升。
未来还有可能将该方法应用于其他病原体的检测和诊断中，为临床提供更多便利和准确的检测手段。
五、结论快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法是一种非常有潜力的乙型肝炎诊断方法。
通过建立和应用该方法，可以提高乙型肝炎的早期检测率和诊断准确性，对乙型肝炎的防控和治疗具有重要意义。
参考文献： 1. 张三, 李四. 快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法的建立及应用[J]. 医疗器械杂志, 20XX, XX(XX):XXX-XXX. 2. 王五, 赵六. 快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法的前景展望[J]. 临床检验学杂志, 20XX, XX(XX):XXX-XXX.。
免疫胶体金技术..
胶体金标记技术的相关定义
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗 体的一种新型的免疫标记技术。 胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
To the boiling solution, add 1.5 mL of a 1% solution of trisodium citrate dihydrate, Na3C6H5O7.2H2O
Stop heating when a deep red color is obtained.
Synthesis and properties of different particle size
免疫胶体金技术的特点
优点： 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； 试剂稳定，适用于单份测定； 无污染。 GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室即有条件开发生产。 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT）中广为应用的方法。
Adjust the gold colloid to the proper pH
常用几种蛋白质标记时胶体金所用的pH值
Determined the minimum amount of protein
（1）光电比色法：制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml），分别加入5ml胶体金中，迅速混匀，然后，各加入1ml 10% NaCl溶液，摇匀，静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小，OD在520～580nm之间测定，以OD值为纵坐标，蛋白质用量为横坐标作一曲线，取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。
胶体金法 酶联免疫法 乳胶法
胶体金法、酶联免疫法以及乳胶法都是检测艾滋病的不同方法。
以下是这些方法的简介：
1. 胶体金法：采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定全血、血清或血浆样本中的HIV1/2型抗体。
2. 酶联免疫法（ELISA）：这是一种灵敏度较高的检测方法，具有操作简单、快速的特点，适合对大量样品的检测。
目前是临床通用的初筛检测方法。
3. 乳胶法：这种方法也称为快速检测法或金标法，根据免疫层析法的原理，用于HIV抗体检测的定性检测。
总的来说，不同的艾滋病检测方法有各自的优缺点，应根据实际需求选择最适合的方法。
如需了解更多艾滋病检测相关信息，建议咨询专业医生或机构。
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（2）于小孔内滴加免疫金试剂3滴，待完全渗入。
（3）于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入。 （4）目测观察结果
结果判断
在膜中央有清晰的红色斑点者判为阳性反应，说
明标本HCG阳性；反之则为阴性反应，说明标本 HCG阴性。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
结果书写
例如：1号标本醋酸纤维膜中央出现红色斑点，该
抗体、毒品类药物及HCG等检测。
金免疫测定技术灵敏度不及酶标法和酶发光免疫
测定法，在临床应用中意事项
（1）打开层析条包装后应在1h内应用。
（2）将层析条插入样品中，样品的液面不 能超过试剂条的标记线。
应用与评价
这两种方法具有操作简便、快捷以及操作人员不
需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定、便 于保存等特点，因此特别符合POCT项目的要求。
只作为定性或半定量试验，常用于传染病抗原和
滤出膜片。其后加入的免疫金在渗滤过程中与已
结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，
阳性反应即在膜中央显示红色斑点（胶体金聚
集）。
免疫金
HCG 抗HCG抗体 醋酸纤维素膜
主要材料
试剂盒：渗滤装置、免疫金、洗涤液
器材：一次性滴管
标本：尿液
操作步骤
（1）将反应板平放于实验台上，于小孔内滴加尿 液5滴，待完全渗入。
标本为HCG阳性
注意事项
注意试剂的保存及使用温度。
正确操作，注意加入尿液样品量和免疫金 试剂量。
斑点金免疫层析试验
原理
主要材料
层析条
标本：尿液
操作步骤
（1）将试剂条的加样端浸入尿液中2-5s，取
出，平放于桌面上。
（2）5-15min内，目测观察结果。
结果判断
T C
金免疫测定技术
斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试
验均以硝酸纤维素膜为固相载体，以免疫
金为结合物，其最大特点是简便快速。
以下均以双抗体夹心法测定尿中HCG（人绒
毛膜促性腺激素）为例。
斑点金免疫渗滤试验
原理
在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为
膜所吸附。当滴加在膜上的液体标本渗滤过膜时， 标本中待测抗原被膜上抗体捕获，其余无关物质