金百合生物对于丁酸梭菌抑制细菌的实验报告
微生物实验报告药敏实验
一、实验目的1. 掌握药敏实验的基本原理和方法。
2. 了解不同抗生素对微生物的抑制作用。
3. 分析实验结果，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏实验是检测微生物对某种抗生素敏感性的方法。
通过观察微生物在含有抗生素的培养基上生长情况，可以判断该微生物对某种抗生素的敏感性。
实验原理基于微生物的代谢活动受到抗生素抑制的程度。
三、实验材料1. 标准菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 抗生素纸片：青霉素、头孢霉素、庆大霉素等。
3. 营养琼脂平板。
4. 微量移液器。
5. 显微镜。
四、实验方法1. 制备营养琼脂平板：按照实验要求制备营养琼脂平板，待平板凝固后备用。
2. 接种菌株：用无菌接种环取标准菌株，在平板上划线或点种。
3. 药敏纸片贴附：将抗生素纸片贴附在平板表面，距离菌株生长线或点种处约1cm。
4. 培养平板：将平板放入培养箱中，37℃恒温培养24小时。
5. 观察结果：观察平板上菌株生长情况，根据抑菌圈直径大小判断菌株对某种抗生素的敏感性。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、头孢霉素、庆大霉素等抗生素均表现出高度敏感性，抑菌圈直径均大于15mm。
2. 大肠杆菌对青霉素、头孢霉素、庆大霉素等抗生素均表现出中度敏感性，抑菌圈直径在10-15mm之间。
3. 对其他抗生素如红霉素、链霉素、四环素等，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均表现出不同程度的敏感性。
六、结论1. 本实验成功进行了药敏实验，验证了金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对多种抗生素的敏感性。
2. 根据实验结果，为临床合理用药提供了依据。
七、注意事项1. 实验过程中要严格无菌操作，避免污染。
2. 注意观察实验结果，确保准确性。
3. 根据实验结果，合理选择抗生素进行治疗。
八、实验总结药敏实验是临床合理用药的重要依据。
通过本实验，我们掌握了药敏实验的基本原理和方法，了解了不同抗生素对微生物的抑制作用。
在今后的学习和工作中，我们将继续深入研究药敏实验，为临床合理用药提供更多支持。
丁酸梭菌抑菌实验
丁酸梭菌抑菌实验丁酸梭菌抑菌实验丁酸梭菌，⼜名酪酸梭菌，丁酸梭状芽孢杆菌，是⼀种专性厌氧的⾰兰⽒阳性芽孢杆菌。
丁酸梭菌代谢产物的突出特点就是丁酸、B族维⽣素以及叶酸含量⾼。
⼤量研究表明，丁酸梭菌具有极强的整肠作⽤，它能够通过抑制致病菌的⽣长繁殖从⽽调节肠道的微⽣态平衡，预防和治疗腹泻、肠炎等疾病。
1 实验材料共培养⽤液体培养基;LB培养基2 实验⽅法2.1 丁酸梭菌对霍乱沙门⽒菌的抑制作⽤①霍乱沙门⽒菌种⼦培养：取平板活化好的菌种转接到LB液体三⾓瓶中，装液量25 mL/100 mL，37℃，150 r/min培养12-24h，取培养菌液测活菌数和pH值。
②丁酸梭菌单独培养：取丁酸梭菌菌粉0.1 g接种到装量为25 mL/30mL的细菌培养瓶中，置于37℃静⽌恒温培养24 h左右。
(可按此⽐例扩⼤培养体积，最低⽐例为0.1 g：25 mL)③丁酸梭菌和霍乱沙门⽒菌混合培养：活化好的丁酸梭菌培养液5 mL接种到装液量为20 mL/30mL的细菌培养瓶中，再把培养好的霍乱沙门⽒菌菌液1 mL同时接⼊该共培养液中，37℃恒温静⽌培养。
对照组为向同样的共培养液体培养基中(装液量为20 mL/30 mL)接种霍乱沙门⽒菌菌液1 mL，37℃恒温静⽌培养。
分别在16和24 h 测pH值及沙门⽒菌活菌数。
④计数采⽤平板涂布法。
选择2～3个适宜梯度稀释液，吸取100 µL涂布平板，倒置于严格厌氧培养箱或严格厌氧培养袋中，37℃培养18～36 h后计数。
每个梯度做两个平⾏，每个平板的菌落数在30～300范围内有效。
2.2 丁酸梭菌对肠出⾎性⼤肠杆菌、魏⽒梭菌的抑制作⽤实验⽅法同上，魏⽒梭菌种⼦液为严格厌氧，应采⽤共培养液体培养基。
3 实验结果3.1 对霍乱沙门⽒菌的抑制结果丁酸梭菌对霍乱沙门⽒菌表现出⾮常强的抑制作⽤，24h活菌数从单独培养时2.0×108CFU·mL-1减少到1.2×103CFU·mL-1。
丁酸梭菌的生物学功能研究
丁酸梭菌的工艺、研发、生产设备等已经日益完善，丁酸梭菌在动物肠道内的作用也逐渐被人熟知；作为丁酸梭菌厂家，金百合生物窦子今天来和大家探讨探讨丁酸梭菌在生物学功能的研究；高深文，慎入！1、神经调节功能及临床应用1.1 梭菌神经毒素梭菌神经毒素是一类剧毒蛋白，包括破伤风神经毒素（TeNT）和肉毒神经毒素（BoNT），分子量150Ku，以一条多肽链形式才有毒性。
迄今，BoNT已发现七种血清型，分别为A至G，近来发现Cb的某些菌株产生BoNT/E和BoNT/F 毒素。
所有这些毒素的基因均已克隆并测序，并认识到梭菌神经毒素具有金属酶活性，对其分子作用机制的研究已有重大突破。
细菌培养物或食物中的BoNT常与同等大小的非毒性蛋白（NTNH）形成复合物，即前体毒素M型。
BTNH和BoNT进行保护，使其耐受消化道中强酸和蛋白酶作用。
已有证明，前体毒素越大，其口服毒力越强。
丁酸梭菌神经毒素蛋白(Bu-BoNT/E)在血清学上与肉毒梭菌神经毒素E型(Bo-BoNT/E)的分子拓扑相识，氨基酸序列97%相同，只是酪氨酸残基数目有差异，但是在生理功能上二者具有相抗性。
1.2 神经毒素对神经功能的调节BoNT作用与突破前神经末端，通过阻塞或干扰神经细胞外钙池的内流，从而抑制神经末端对乙酰胆碱囊泡的释放，产生局部化学性的去神经支配。
肌肉注射BoNT，这种麻痹作用可持续2--6月。
此外，这种去神经支配作用也发生在腺泡细胞上，但可能不是BoNT直接中毒，关于其机理仍有争议。
有证据显示，BoNT的去胆碱效应并不是100%，很可能存在不受神经毒素影响的非胆碱神经传导起着作用，如血管活性肽（VIP）。
BoNT早就用胆碱运动神经的去神经支配，经验证，注射或口服BoNT可以治疗痉挛性声障碍，脸痉挛、焦柄张力障碍和其它疾病。
直到近来，临床上才用七种BoNT（A-G）治疗植物性神经功能失调导致的疾患，如鼻溢、耳炎、引起唾液分泌过多的血管损伤、肌肉萎缩性侧索硬化、剧烈肌衰竭、泌汗过多、延髓瘫痪、迷走功能失调、哮喘或慢性阻塞性肺病、胃酸过多、痉挛性肠炎等。
厌氧细菌丁酸梭菌的培养实验指导书
厌氧细菌丁酸梭菌的培养实验指导书一、实验目的1.了解氧对厌氧微生物生长的影响及其原理；2.学习厌氧微生物的培养方法，使学生对工业微生物的培养方法有较全面的认识，提高学生动手能力及综合素质。
二、基本原理分子氧对好氧微生物和厌氧微生物都有毒害作用，因为在有分子氧存在的条件下，会在微生物胞内生成超氧阴离子，对细胞有毒害作用。
对于好氧微生物，由于能合成超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，剧毒的超氧阴离子先被超氧化物歧化酶转化成毒性较低的过氧化氢，过氧化氢再被过氧化氢酶迅速分解，从而消除其对微生物细胞的毒害作用。
而厌氧微生物不能合成这些酶，不能将超氧阴离子和过氧化氢迅速转化掉，细胞易被杀伤，故厌氧微生物在有氧时不能生长。
因此，在培养厌氧微生物时，需要消除环境中的氧气并降低培养基的氧化还原势。
消除氧气的方法有物理、化学和生物方法，或它们的综合使用。
简单地介绍如下：(1).通无氧气体。
向厌氧微生物培养的小环境和培养基中通入无氧气体，如高纯氮气和二氧化碳，即可基本驱除其中的氧气。
(2).添加还原剂。
向培养厌氧微生物的培养基中添加还原剂，如半胱氨酸和硫化钠，可消除其中的氧，降低培养基的氧化还原势。
(3).碱性焦性没食子酸法。
焦性没食子酸与碱溶液作用后形成易被氧化的碱性没食子盐，能通过氧化作用而形成黑、褐色的焦性没食子橙，从而除掉密封容器中的氧。
该法操作简单，无需特殊和昂贵的设备，但其除氧速度较慢。
对于一些厌氧要求较高的微生物，如产甲烷菌，单一的除氧方法无法达到其生长所需的厌氧程度，常需结合两种除氧方法。
如对培养基进行除氧，制作预还原培养基时，常先向培养基中通高纯氮气，先去除培养基中的绝大部分的氧后，再往培养基中添加适量的还原剂，即可制成高度无氧的预还原培养基。
厌氧微生物的培养方法有多种，主要是在培养过程中避免使菌与氧气接触，下面介绍几种常用的方法：(1).深层穿刺培养法。
在试管中倒入适当高度的预还原固体培养基，凝固后穿刺接菌种，用胶塞封口。
生物菌株培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握微生物培养的基本原理和方法。
2. 了解不同微生物对培养条件的要求。
3. 通过实验，学习使用培养基进行微生物的分离、纯化和培养。
4. 观察并记录微生物的生长特征，分析实验结果。
二、实验原理微生物的培养是微生物学研究的基础，通过提供适宜的营养物质和环境条件，使微生物得以生长繁殖。
培养基是微生物生长繁殖的基本营养物质，根据微生物的营养需求，可以选择不同的培养基进行培养。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 肉汤培养基- 营养琼脂平板- 酵母提取物葡萄糖琼脂平板- 琼脂糖- 水平式高压灭菌锅- 电子天平- 微生物接种环- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验仪器：- 灭菌器- 玻璃器皿- 玻璃棒- 滴管- 试管四、实验步骤1. 培养基制备：- 称取适量的肉汤培养基，加入适量的蒸馏水，混合均匀。
- 将混合液加热至完全溶解，然后进行高压灭菌（121℃，15分钟）。
- 待培养基冷却至50℃左右，加入适量的琼脂糖，搅拌均匀。
- 将琼脂糖培养基倒入培养皿中，待凝固后备用。
2. 接种：- 将待分离的微生物接种到制备好的培养基上。
- 采用平板划线法或涂布法进行接种。
3. 培养与观察：- 将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，培养一段时间（如24小时）。
- 观察并记录微生物的生长特征，如菌落形态、颜色、大小等。
4. 分离纯化：- 根据菌落特征，挑选单菌落进行纯化培养。
- 将纯化的菌落接种到新的培养基上，重复培养和观察，直至获得纯种。
5. 鉴定：- 对纯化的微生物进行形态学观察和生化试验，进行初步鉴定。
五、实验结果与分析1. 菌落形态：- 观察到的菌落形态有：圆形、不规则、丝状等。
- 颜色有：白色、黄色、绿色等。
2. 生化试验：- 观察到的生化试验结果有：产生气泡、产生酸、产生氨等。
3. 鉴定结果：- 根据菌落形态和生化试验结果，初步鉴定为某种微生物。
六、实验讨论1. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。
细菌相互抑制实验报告
一、实验目的1. 探究细菌之间的相互抑制作用。
2. 了解不同细菌种类的相互抑制效果。
3. 分析细菌相互抑制的机制。
二、实验材料1. 实验菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌等。
2. 培养基：LB培养基、MRS培养基、牛肉膏蛋白胨培养基等。
3. 实验仪器：恒温培养箱、无菌操作台、移液器、平板计数器等。
三、实验方法1. 菌种活化：将保存的菌种接种于相应培养基中，37℃恒温培养18-24小时，得到纯菌种。
2. 制备菌悬液：将活化后的菌种用无菌水稀释至适宜浓度，制成菌悬液。
3. 制备平板：将不同菌种分别接种于LB培养基、MRS培养基、牛肉膏蛋白胨培养基平板上，37℃恒温培养18-24小时，观察菌落生长情况。
4. 细菌相互抑制实验：a. 将菌悬液分别滴加到不同培养基平板的中央，观察菌落生长情况。
b. 将不同菌种菌悬液混合后滴加到平板上，观察菌落生长情况。
c. 将一种菌种菌悬液滴加到另一种菌种菌落边缘，观察菌落生长情况。
5. 结果记录与分析：观察并记录实验现象，分析不同细菌种类的相互抑制效果。
四、实验结果1. 不同培养基上菌落生长情况：在LB培养基、MRS培养基、牛肉膏蛋白胨培养基上，菌落生长情况良好。
2. 细菌相互抑制实验结果：a. 单一菌种菌悬液滴加到平板中央，菌落生长正常。
b. 不同菌种菌悬液混合后滴加到平板上，部分菌种生长受到抑制，表现为菌落生长不良或无生长。
c. 一种菌种菌悬液滴加到另一种菌种菌落边缘，菌落生长受到抑制，表现为菌落生长不良或无生长。
五、讨论与分析1. 实验结果表明，不同细菌种类之间存在相互抑制作用。
这可能与细菌产生的代谢产物、生长条件等因素有关。
2. 在不同培养基上，菌落生长情况存在差异。
这可能是因为不同培养基的营养成分、pH值等条件对细菌生长的影响不同。
3. 实验结果表明，菌种间的相互抑制作用与菌种种类、生长条件等因素有关。
在相同生长条件下，不同菌种之间的相互抑制作用存在差异。
真菌抑菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解真菌的抑菌特性及其应用。
2. 探究不同真菌对特定细菌的抑菌效果。
3. 学习微生物实验的基本操作技能。
二、实验原理真菌是一种广泛存在于自然界中的微生物，具有多种生物活性物质，如抗生素、酶、生物碱等，可以抑制或杀死其他微生物。
本实验通过培养特定细菌，然后分别用不同真菌提取物进行抑菌实验，观察并记录其抑菌效果。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细菌菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌- 真菌菌种：曲霉菌、青霉菌、酵母菌- 琼脂、牛肉膏、蛋白胨- 有机溶剂：甲醇、乙醇、氯仿- 其他试剂：pH试纸、NaCl、KCl、CaCl2等2. 实验仪器：- 培养箱、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、无菌操作台、无菌试管、滴管、培养皿等四、实验方法1. 细菌和真菌的培养：- 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 将曲霉菌、青霉菌、酵母菌分别接种于PDA培养基，置于25℃恒温培养箱中培养5天。
2. 真菌提取物的制备：- 将培养好的真菌分别用甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂提取，制成真菌提取物溶液。
3. 抑菌实验：- 将培养好的细菌菌液均匀涂布于琼脂平板上。
- 将真菌提取物溶液滴加于平板上，形成抑菌圈。
- 将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察并记录抑菌效果。
4. 结果分析：- 记录不同真菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径。
- 比较不同真菌提取物的抑菌效果。
五、实验结果1. 曲霉菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为10mm和8mm。
2. 青霉菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果次之，抑菌圈直径分别为8mm和6mm。
3. 酵母菌提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为5mm和4mm。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，曲霉菌、青霉菌和酵母菌均具有一定的抑菌作用，其中曲霉菌的抑菌效果最好。
消灭真菌实验报告模板(3篇)
第1篇一、实验名称消灭真菌实验二、实验目的1. 了解真菌的生长繁殖条件。
2. 掌握常用的真菌消灭方法。
3. 培养实验操作技能，提高对真菌病害的防治能力。
三、实验原理真菌是一类广泛分布于自然界中的微生物，对人类生活、生产有重要影响。
某些真菌会引起植物病害，影响植物生长。
本实验通过观察真菌的生长繁殖，探究消灭真菌的方法，为实际生产中的真菌病害防治提供理论依据。
四、实验材料1. 真菌样品：小麦叶斑病真菌、稻瘟病真菌等。
2. 实验仪器：显微镜、培养皿、无菌水、无菌滤纸、无菌镊子、无菌剪刀、无菌酒精、消毒液等。
3. 实验试剂：盐酸、酒精、苯酚、氯化钠、硫酸铜等。
五、实验方法1. 真菌样品的制备（1）将真菌样品用无菌水洗涤，去除表面杂质。
（2）用无菌滤纸将样品表面水分吸干。
（3）将样品剪成小块，放入无菌培养皿中。
2. 真菌生长条件的观察（1）将培养皿置于适宜的温度和湿度条件下，观察真菌的生长繁殖情况。
（2）记录真菌生长的形态、颜色、菌丝密度等特征。
3. 消灭真菌方法的探究（1）盐酸消毒法：将真菌样品浸泡在1%盐酸溶液中，观察消灭效果。
（2）酒精消毒法：将真菌样品浸泡在70%酒精溶液中，观察消灭效果。
（3）苯酚消毒法：将真菌样品浸泡在1%苯酚溶液中，观察消灭效果。
（4）氯化钠消毒法：将真菌样品浸泡在1%氯化钠溶液中，观察消灭效果。
（5）硫酸铜消毒法：将真菌样品浸泡在0.1%硫酸铜溶液中，观察消灭效果。
六、实验结果与分析1. 真菌生长条件的观察结果在适宜的温度和湿度条件下，真菌样品生长迅速，菌丝密度大，形态、颜色明显。
2. 消灭真菌方法的探究结果（1）盐酸消毒法：浸泡10分钟后，真菌样品表面菌丝明显减少，消灭效果较好。
（2）酒精消毒法：浸泡10分钟后，真菌样品表面菌丝减少，消灭效果较好。
（3）苯酚消毒法：浸泡10分钟后，真菌样品表面菌丝减少，消灭效果较好。
（4）氯化钠消毒法：浸泡10分钟后，真菌样品表面菌丝减少，消灭效果较好。
丁酸梭菌的固态培养及益生效果研究的开题报告
丁酸梭菌的固态培养及益生效果研究的开题报告一、研究背景和意义：丁酸梭菌（Clostridium butyricum）是一种常见的厌氧菌，主要分布在土壤、动物肠道及水体中。
作为一种益生菌，丁酸梭菌在人类消化道中具有多种生理功能，如促进食物消化、维持肠道内稳定微生态环境、增强免疫力等。
此外，丁酸梭菌还可应用于食品工业、农业、生物制药等领域，具有广阔的应用前景。
因此，对丁酸梭菌的深入研究具有重要的科学意义和实用价值。
目前，对于丁酸梭菌的研究主要集中在液态培养方面，固态培养及其对宿主的益生效果的研究较为缺乏，因此有必要开展本研究，以期深入了解丁酸梭菌在固态培养情况下的生长特性和对宿主的益生效果，为进一步应用丁酸梭菌提供理论和实践基础。
二、研究内容和方法：本研究将重点研究丁酸梭菌在固态培养情况下的生长特性和对宿主的益生效果。
具体研究内容如下：（1）建立适宜的丁酸梭菌固态培养方法。
通过改变不同的培养基成分、添加不同的生长因子和调节不同的环境因素等方式，优化固态培养条件，建立适宜的丁酸梭菌固态培养方法。
（2）考察固态培养对丁酸梭菌生长特性的影响。
通过比较液态培养和固态培养下丁酸梭菌的菌落数、生长态势及代谢产物的变化等，探究固态培养对丁酸梭菌生长特性的影响。
（3）评估丁酸梭菌固态培养对小鼠益生效果的影响。
将丁酸梭菌固态培养物与普通饲料进行混合，让小鼠饮食，并考察其对小鼠的益生效果，如改善肠道微生态、增强免疫力等。
本研究采用的主要方法包括固态培养技术、微生物计数法、代谢产物分析方法、小鼠模型等实验方法。
三、研究预期结果：本研究的预期结果包括以下几个方面：（1）建立适宜的丁酸梭菌固态培养方法，为该菌的应用提供技术支持。
（2）揭示固态培养对丁酸梭菌生长特性的影响规律，为该菌在固态环境下的应用提供理论依据。
（3）评估丁酸梭菌固态培养对小鼠益生效果的影响，为物种的宏观应用提供科学支持。
四、研究价值：本研究的主要价值包括：（1）深入了解丁酸梭菌在固态培养情况下的生长特性，为该菌的应用提供理论基础和实践指导。
细菌生菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌分离纯化的基本方法。
2. 学习并掌握细菌培养的基本技术。
3. 观察并描述细菌的生长特征。
二、实验原理细菌是一种单细胞微生物，具有个体小、繁殖快、形态多样、代谢类型多等特点。
在适宜的条件下，细菌可以大量繁殖，形成肉眼可见的菌落。
细菌分离纯化的目的是从混杂的微生物中分离出所需的纯种微生物。
本实验采用平板划线法和稀释涂布平板法进行细菌分离纯化。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂平板、液体培养基等。
3. 仪器与设备：恒温培养箱、无菌操作台、移液器、接种环、酒精灯、培养皿等。
四、实验方法与步骤1. 细菌分离纯化（1）平板划线法①将无菌接种环在火焰上灼烧，待其红热后冷却。
②用接种环挑取少量菌液，在平板表面进行划线。
③将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
④观察菌落生长情况，挑取单菌落进行纯化。
（2）稀释涂布平板法①将菌液进行系列稀释，如10^-1、10^-2、10^-3等。
②用无菌涂布器取适量稀释液均匀涂布在平板表面。
③将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
④观察菌落生长情况，计算菌落数。
2. 细菌培养（1）制备牛肉膏蛋白胨培养基①称取牛肉膏10g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15g，加入1000mL蒸馏水。
②将上述物质溶解，调整pH值至7.0-7.2。
③将溶液煮沸5-10分钟，冷却后分装至无菌试管中，每管10mL。
④将试管放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌15分钟。
⑤待培养基冷却至50℃左右，加入适量的无菌水，制成平板。
（2）接种与培养①将纯化后的细菌接种至牛肉膏蛋白胨培养基平板上。
②将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
③观察菌落生长情况，记录生长特征。
五、实验结果与分析1. 细菌分离纯化结果通过平板划线法和稀释涂布平板法，成功分离出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等纯种细菌。
丁酸梭菌对动物致病菌拮抗作用的研究
丁酸梭菌对动物致病菌的拮抗作用研究谢树贵, 戴青, 赵述淼, 徐国强, 梁运祥( 华中农业大学生命科学技术学院, 武汉430070)摘要:探讨了丁酸梭菌(Clostridium butyricum)B1 株对5 种常见动物致病菌的体外拮抗作用。
将丁酸梭菌分别与猪大肠杆菌( Escherichia coli)K88、K99、O139 株和猪肠炎沙门氏菌( Salmonella enteritidis)O4Hi 株、金黄色葡萄菌( Staphylococcus aureus) 混合接种于GAM培养基进行厌氧培养, 并与致病菌单独培养相比较。
结果发现, 培养48 h后, 致病菌菌数显著低于对照, 说明丁酸梭菌B1 株对猪大肠杆菌K88、K99、O139 株和猪肠炎沙门氏菌O4Hi 株、金黄色葡萄球菌均有显著抑制作用。
关键词:丁酸梭菌; 拮抗; 动物致病菌中图分类号: Q939.11; Q935; S852.61 文献标识码: BStudy on the Antagonism of Clostridium butyricum Against Animal PathogensXIE Shu- gui, DAI Qing, ZHAO Shu- miao, XU Guo- qiang, LIANG Yun- xiang (Huazhong Agricultural University, College of Life Science & Technology,Wuhan 430070, China)Abstract: Antagonism effect of Clostridium butyricum B1 strain against five animal pathogens in vitro were studied. The pureClostridium butyricum B1 were mixed with Escherichia. coli K88, E. coli K99, E. coli O139, Salmonella enteritidis O4Hi andStaphylococcus aureus respectively in GAM liquid medium, and were incubated in anaerobic way, the data obtained from thesingle and mixed culture were compared. After 48 hours, the data of the pathogens in mixed were smaller than the single,which indicate that Clostridium butyricum B1 exerts great antagonism against those animal pathogens in vitro.Key words: Clostridium butiricum; antagonism; animal pathogens仔猪腹泻一直是养猪生产上的一大难题。
生物反应的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生物反应的基本原理和过程。
2. 掌握生物反应在工业生产中的应用。
3. 学习生物反应器的操作方法及注意事项。
二、实验原理生物反应是生物体内发生的化学反应，包括酶促反应和非酶促反应。
生物反应在工业生产中具有广泛的应用，如发酵、生物转化、生物降解等。
本实验以酵母发酵葡萄糖为例，探讨生物反应的基本原理和操作方法。
三、实验材料与用具1. 实验材料：葡萄糖、酵母粉、琼脂、蒸馏水、pH试纸、pH计、锥形瓶、酒精灯、培养皿、移液管、滴定管、试管、试管架、恒温培养箱等。
2. 实验试剂：葡萄糖溶液、酵母抽提物、琼脂糖、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、酚酞指示剂、标准氢氧化钠溶液等。
四、实验步骤1. 准备培养基：将葡萄糖溶液、酵母抽提物、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠混合，加热溶解，冷却后加入琼脂糖，制成固体培养基。
2. 制备酵母菌悬液：将酵母粉加入蒸馏水中，搅拌均匀，制成酵母菌悬液。
3. 接种：将制备好的酵母菌悬液均匀涂布在培养基上，放入恒温培养箱中培养。
4. 观察现象：观察菌落生长情况，记录菌落数量。
5. 测定发酵液pH值：用pH试纸或pH计测定发酵液pH值。
6. 酶活性测定：取一定量的发酵液，加入酚酞指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定，计算酶活性。
7. 结果分析：分析实验结果，探讨生物反应的原理和影响因素。
五、实验结果与分析1. 菌落生长情况：在恒温培养箱中培养一段时间后，培养基上出现白色菌落，菌落数量逐渐增加。
2. 发酵液pH值：发酵液pH值逐渐降低，说明酵母菌发酵过程中产生酸性物质。
3. 酶活性测定：酶活性随着发酵时间的延长而逐渐增加，说明酵母菌在发酵过程中产生酶类物质。
六、讨论1. 生物反应在工业生产中的应用非常广泛，如发酵、生物转化、生物降解等。
本实验以酵母发酵葡萄糖为例，展示了生物反应的基本原理和操作方法。
2. 影响生物反应的因素很多，如温度、pH值、底物浓度、酶浓度等。
在本实验中，温度和pH值对酵母菌发酵的影响较大。
产抑菌蛋白的丁酸梭菌作为饲料益生菌制剂具有很大的应用潜力
产抑菌蛋白的丁酸梭菌作为饲料益生菌制剂具有很大的应用潜力饲用抗生素在促进畜禽生长、不断提高饲料转化效率、减少粮食损耗、提高动物产品产量等五方面具有显著六项的效果。
有机肥随着抗生素在饲料中的长期广泛使用，它的弊端正日益凸现，如导致动物胃肠道菌群失调，产生细菌耐药性和动物产品药物等。
微生态制剂被认为是抗生素的潜在替代物之一，已被广泛关注。
丁酸梭菌是从弯果阳动物肠道分离出来的一种严格厌氧的革兰氏和性芽孢杆菌，具有产丁酸、产酶、微量元素等益生物质等特性。
近年来，对丁酸梭菌的研究主要集中在生物医学和生物化工方面，在家禽饲料工业上研究相对较少。
相比于非芽孢杆菌，丁酸梭菌具有较强的抗逆性，并能促进动物栽种、调节动物肠道微生态平衡、提高机体免疫力，在畜牧生产中所具有广阔的应用前景。
本研究旨在筛选出对动物常见致病菌具有广谱抑菌活性的产抑菌蛋白的丁酸梭菌菌株，对其进行鉴定，并生物学在体外研究其抗逆性和益生特性，为其在动物生产应用提供理论支撑。
1材料与设备1.1材料与试剂仔猪盲肠内容物10份，取自3个猪场；K88)、金黄色葡萄球菌ATCC25923(S.aureusATCC25923)；梭菌增值培养基(RCM培养基)、梭菌选择性培养基(TSN培养基)、LB培养基，国产分析纯；细菌生化微量反应管、药敏纸片；细菌DNA提取试剂盒；猪胆盐，胰蛋白酶、蛋白酶K、过氧化氢酶，人工胃液、人工肠液根据中国药典进行配制；蛋白酶测定试剂盒、淀粉酶测定试剂盒、脂肪酶测定试剂盒。
1.2实验方法1.2.1分离培养方法采用厌氧培养箱来进行的液体培养、分离和稀释平板计数。
取盲肠内容物10g加到90mLPBS中，放人80℃水浴10min以杀死非芽孢菌，放入RCM培养基，于37℃厌氧培养36h；将样品四组稀释到10-3、10-5、10-7，涂布于TSN培养基，37℃厌氧培养48h；采用影印平板法分离菌种，选取严格厌氧生长的菌株，进行镜检；根据丁酸梭菌的培养出来特性、菌落形态和显微形态等特征，挑选符合特性的菌株进行生理生化鉴定和16SrDNA序列分析。
拮抗细菌实验报告
一、实验目的本研究旨在从土壤中分离筛选出具有拮抗作用的细菌菌株，并对其抑菌活性进行鉴定和分析，为生物防治提供潜在的资源。
二、实验原理拮抗细菌是指在一定条件下，能够抑制其他微生物生长繁殖的细菌。
拮抗细菌产生的拮抗物质，如抗生素、酶、毒素等，能够在琼脂培养基中扩散，抑制指示菌的生长，形成透明圈。
通过观察透明圈的直径，可以判断拮抗细菌的抑菌活性。
三、实验材料1. 土壤样品：采集于校园周边农田，用于分离拮抗细菌。
2. 指示菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等，用于检测拮抗细菌的抑菌活性。
3. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基等。
4. 仪器与设备：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、移液器、接种环、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将土壤样品稀释，取适量涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（2）挑取单菌落，接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面，37℃恒温培养箱中培养24小时。
（3）将纯化后的菌株转接至营养琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落特征。
2. 拮抗细菌的筛选（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等指示菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24小时。
（2）挑取纯化后的菌株，接种于营养琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24小时。
（3）将培养好的菌株与指示菌平板进行对峙培养，观察透明圈的形成。
3. 抑菌活性测定（1）将纯化后的菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面，37℃恒温培养箱中培养24小时。
（2）将培养好的菌株制成菌悬液，用无菌水稀释至一定浓度。
（3）取适量菌悬液涂布于营养琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24小时。
（4）观察透明圈的形成，测量透明圈直径。
五、实验结果1. 菌株分离与纯化共分离纯化出10株具有拮抗作用的细菌菌株，分别命名为A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10。
2. 拮抗细菌的筛选通过对峙培养，发现菌株A1、A2、A3、A4对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等指示菌具有明显的抑制作用，形成透明圈。
丁酸梭菌的生物学功能及其研究进展
丁酸梭菌的生物学功能及其研究进展张吉鹍㊀孙国平(湖北博大生物股份有限公司ꎬ湖北黄石㊀４３５０００)基金项目:黄石市重大技术研发项目(编号:２０１７Ａ０１３)ꎻ中央农业技术项目推广应用项目资助作者简介:张吉鹍(１９６４－)ꎬ男ꎬ江西武宁人ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ主要从事动物营养繁殖研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:３４６８８４０１８＠ｑｑ.ｃｏｍ㊀㊀摘㊀要:本文简单介绍了丁酸梭菌的生物学功能㊁抑菌作用及其作用机制ꎮ关键词:丁酸梭菌素ꎻ抑菌ꎻ丁酸１㊀丁酸梭菌的生物学功能１.１㊀调节肠道菌群平衡ꎬ促进肠道有益菌的增殖ꎬ抑制有害菌的生长动物肠道菌群失衡会引发各种肠道疾病ꎬ丁酸梭菌作为一种厌氧的内生芽孢杆菌ꎬ比需氧菌更能够适应宿主肠道内环境ꎬ从而能更加有效地促进宿主肠道内包括嗜酸乳杆菌㊁拟杆菌㊁双歧杆菌㊁粪杆菌㊁粪链球菌以及乳酸菌等在内的益生菌的增殖[１－４]ꎬ并能有效地抑制宿主肠道内包括葡萄球菌㊁伤寒沙门氏菌㊁腐败菌㊁痢疾杆菌㊁大肠杆菌㊁绿脓杆菌㊁弯曲杆菌㊁产气荚膜梭菌㊁霍乱弧菌㊁念珠菌以及克雷伯菌的生长ꎬ同时还能够减少吲哚类㊁硫化氢以及胺类等有害物质的产生[５－６]ꎮ在宿主肠道内起着整肠㊁治疗肠道炎症㊁调节菌群平衡㊁促进动物生长的多重作用[７－８]ꎮ曹广添等[９]将丁酸梭菌分别与大肠杆菌㊁沙门氏菌㊁产气荚膜梭菌㊁乳酸杆菌㊁双歧杆菌按不同的比例混合后进行培养ꎬ并与各菌种单独培养进行比较ꎮ发现ꎬ经３６~４８ｈ培养后ꎬ联合培养组大肠杆菌㊁沙门氏菌㊁产气荚膜梭菌菌数均显著低于单独培养组(Ｐ<０.０５)ꎻ当菌数比例为(１~１００):１至１００:１时ꎬ丁酸梭菌对沙门氏菌均有较强的抑菌作用ꎻ当丁酸梭菌与其它菌的比例为１００:１时ꎬ丁酸梭菌对大肠杆菌和产气荚膜梭菌的抑制作用最强ꎻ当丁酸梭菌与其它菌的比例为１０:１时ꎬ丁酸梭菌对乳酸杆菌和双歧杆菌的增殖效果最好ꎮ联合培养８ｈ后ꎬ菌数比例为１０:１时ꎬ丁酸梭菌对双歧杆菌的增殖效果最明显ꎮ赵熙等[１０]的研究结果不仅验证了丁酸梭菌制剂可以显著地增加肠道内的双歧杆菌㊁乳酸杆菌等益生菌的数量ꎬ而且还能有效地调控肠道微生物生态环境ꎮ由此可见ꎬ丁酸梭菌一方面通过促进益生菌增值ꎬ另一方面通过抑制致病菌的生长来校正宿主肠道菌群的失衡ꎬ从而改善肠道微生态环境ꎬ降低腹泻率ꎬ减少肠应激综合征与胃肠炎等疾病的发生ꎮ正常健康动物粪便所含的菌群ꎬ以双歧杆菌等厌氧菌为主ꎮ当动物患病ꎬ导致肠道菌群失调时ꎬ粪便菌群中占比较高的双歧杆菌㊁乳酸菌等益生菌的含量减少ꎬ而占比较少的潜在致病性菌梭菌却显著增加ꎮ当患病动物经服用丁酸梭菌治愈后ꎬ其所排出的粪便中ꎬ所含的菌种(如双歧杆菌㊁乳酸菌㊁无芽孢厌氧菌㊁肠球菌㊁大肠菌等菌类)及其含量与健康动物相似ꎬ主要表现在宿主肠道菌群中占比较高的双歧杆菌㊁乳酸菌等益生菌的比例显著增加ꎬ而潜在致病菌性梭菌的比例显著下降ꎬ临床症状明显改善[１１]ꎮ郑有秀等[１２]报道ꎬ在(２５日龄)断奶仔猪日粮中ꎬ添加２５０ｍｇ ｋｇ－１丁酸梭菌ꎬ即可有效抑制断奶仔猪盲肠大肠埃希菌和沙门菌等有害菌的增殖(Ｐ<０.０５)ꎬ增加乳酸菌与双歧杆菌的数量(Ｐ<０.０５)ꎬ综合考虑包括仔猪腹泻率在内的仔猪生长性能㊁肠道结构㊁肠道菌群与免疫功能等各项指标的改善ꎬ建议在２５~５５日龄断奶仔猪日粮中丁酸梭菌的添加水平以２５０~５００ｍｇ ｋｇ－１为宜[１１]ꎬ但要缓解仔猪的氧化应激ꎬ丁酸梭菌的添加水平必须到达５００ｍｇ ｋｇ－１[１２]ꎮＫｕｒｏｉｗａ等[１３]发现ꎬ丁酸梭菌能与双歧杆菌㊁乳酸菌和粪杆菌等肠道有益菌共生ꎬ其培养滤液中含有能促进双歧杆菌生长的因子ꎬ能够促进双歧杆菌等有益菌的生长ꎻ当将丁酸梭菌与致病菌混合培养时ꎬ会对弗氏志贺菌㊁霍乱弧菌与嗜水气单胞菌的生长ꎬ产生抑制作用ꎻ当将丁酸梭菌与产胺和氨的腐败梭菌共同培养时ꎬ可抑制产胺和氨腐败梭菌的生长繁殖ꎬ从而减少肠道内有害的胺与氨的产生ꎬ进而减少宿主的中毒或器官的病理性变化ꎮ张达荣等[１４]采用丁酸梭菌治疗肠易激综合症动物的菌群失调ꎬ发现经治疗的动物:一方面ꎬ其肠道内菌群与健康动物无显著差异ꎬ其中尤以双歧杆菌与乳酸菌的比例增加明显ꎬ而潜在致病性梭菌的比例则显著下降(Ｐ<０.０５)ꎻ另一方面ꎬ其粪便菌群中的大肠菌㊁无芽孢厌氧杆菌㊁双歧杆菌㊁乳酸菌和肠球菌等菌的含量均达到健康动物的标准ꎬ其中以双歧杆菌与乳酸菌的比例增加最为明显ꎬ而具有潜在致病性的梭菌的比例则显著下降(Ｐ<０.０５)ꎬ临床症状相应改善ꎮ１.２㊀增强免疫功能ꎬ预防肿瘤发生丁酸梭菌具有提高机体的免疫力㊁降低饲料中的抗营养因子的作用ꎮ给动物饲喂丁酸梭菌ꎬ动物体内血清中免疫球蛋白ＩｇＡ和ＩｇＭ的含量增加ꎮ丁酸梭菌的细胞壁组分及其产生的胞外多糖(半乳糖:葡萄糖＝１３.５:８６.５)具有抑制肿瘤细胞生长的作用ꎮ用热灭活丁酸梭菌制成的疫苗能够激活ＮＫ细胞与巨噬细胞ꎮ用ＥＬＩＳＡ法测定摄食丁酸梭菌死菌体(１０９ＣＦＵ ｇ－１)鸡血清中免疫球蛋白ＩｇＡ的含量ꎬ试验组为６μｇ ｍＬ－１ꎬ要显著高于未摄食菌体的对照组(０.５μｇ ｍＬ－１)(Ｐ<０.０５)ꎮ给鸡饲喂添加有丁酸梭菌制剂的饲料后ꎬ观察其血清中ＮＤ－ＨＩ抗体效价的变化ꎮ１周后ꎬ供试鸡的ＮＤ－ＨＩ滴度迅速上升ꎮ丁酸梭菌还具有抗肿瘤活力ꎮ分别给移植肉瘤１８０前㊁后小鼠的腹膜注射丁酸梭菌液剂ꎬ发现丁酸梭菌产生的胞外可溶性多聚糖ꎬ能够抑制肉瘤的生长ꎮ用热杀死丁酸梭菌后制成的菌体疫苗ꎬ对ＢＤＦ鼠的Ｂ１６－Ｆ１０黑素瘤具有抗转移作用[１５]ꎮ１.３㊀在肠道产生益生产物１.３.１㊀酶丁酸梭菌在动物肠道内既能产生多种帮助动物消化的胞内酶ꎬ又能分泌大量帮助动物消化的胞外酶ꎮ这些酶种中主要的有蛋白酶㊁半纤维素酶㊁纤维素酶㊁淀粉酶㊁脂酶㊁糖苷酶等ꎬ对宿主所采食的营养物质的消化吸收具有重要的促进作用ꎮ例如ꎬα－淀粉酶能够水解α－１ꎬ４糖苷键ꎬ从而可以将多糖水解成Ｄ－葡萄糖㊁麦芽糖㊁糊精和寡糖ꎮβ－淀粉酶能够作用于淀粉的非还原性末端ꎬ每次从淀粉大分子上水解下一个麦芽糖分子[１６]ꎮ在α－淀粉酶与β－淀粉酶的共同作用下ꎬ把宿主肠道中的多聚糖转化为低聚糖ꎬ为肠道益生菌的生长提供必需的营养物质ꎬ从而促进其增殖ꎮ特别是日本学者Ｎａｋａｊｉｍａ[１７－１８]发现的丁酸－拜仁梭菌组菌产生的裂解酶与果胶甲基化酶ꎬ用于内切和外切果胶ꎬ将肠道中的果胶酶解为可被双歧杆菌等益生菌利用㊁并促进其增殖的中间产物 寡聚半乳糖㊁４ꎬ５－不饱和半乳糖醛酸ꎬ最终酶解为可被机体吸收利用的主要由乙酸和少量丁酸与甲酸组成的挥发性短链脂肪酸(ＳＣＦＡ)ꎮ这样动物每天摄入体内的大量纤维和果胶物质ꎬ由于有这些酶系的作用ꎬ均能被机体很好地吸收利用ꎮ姜芳芳等[１９－２１]采用Ｆｏｌｉｎ酚法测定酶活ꎬ就丁酸梭菌Ｃ.Ｌ２４的产蛋白酶条件进行了优化ꎬ确定了其培养液的最佳碳源是可溶性淀粉ꎬ最佳氮源为酵母膏ꎬ最佳培养液起始ｐＨ为７ꎬ最佳培养温度３７ħꎬ最佳接种量为２％ꎬ最佳培养时间为４８ｈꎮ在此条件下ꎬ菌株Ｃ.Ｌ２４产蛋白酶的活力最高可达６８.４６Ｕ ｍＬ－１ꎬ比其初始酶活４９.５４Ｕ ｍＬ－１提高了３８.２％ꎮ１.３.２㊀维生素丁酸梭菌在肠道内能够合成维生素Ｂ１(又名硫胺素㊁抗神经炎素)㊁维生素Ｂ２(核黄素)㊁维生素Ｂ３(又名烟酸㊁维生素ＰＰ)㊁维生素Ｂ５(又名泛酸㊁遍多酸)㊁维生素Ｂ６(吡哆醇)与维生素Ｂ９(叶酸)等Ｂ族维生素以及维生素Ｋ(凝血维生素)等维生素类物质ꎬ同时还能促进维生素Ｅ的吸收ꎬ增强动物机体的抗病力ꎬ对机体具有保健作用ꎮ用对维生素Ｋ缺乏高度敏感的家禽进行的试验表明ꎬ丁酸梭菌能够在肠道内产生动物必需的维生素Ｋ[４－６]ꎮ需要指出的是ꎬ丁酸梭菌较其它菌种能够合成更多的Ｂ族维生素ꎬ尤其是合成的烟酸是其它菌种的３~６倍[４]ꎮ这些维生素可提高饲料的利用率与动物生产性能ꎮ１.３.３㊀以丁酸为主的短链脂肪酸丁酸梭菌在肠道内能够产生丁酸等短链脂肪酸[２０－２１]ꎬ而以丁酸为主ꎮ据报道ꎬ大肠不同部位的肠黏膜细胞均以丁酸作为优先利用的主要能量来源ꎬ其次是谷氨酰胺与葡萄糖[２２]ꎮ丁酸等短链脂肪酸不仅可以促进有益菌的生长ꎬ抑制致病菌的增殖ꎬ而且还可以作为肠道绒毛生长的直接能量来源或肠道损伤修复与上皮组织细胞再生的重要营养物质ꎬ促进肠绒毛的发育[２３]ꎮ小肠绒毛长度和隐窝深度等是评价小肠消化吸收功能的重要指标ꎮ刘婷婷等[３]发现日粮中添加丁酸梭菌可以提高断奶仔猪十二指肠及回肠的绒毛长度ꎬ降低其隐窝深度ꎬ表明丁酸梭菌能够改变肠道结构ꎬ从而提高肠道的营养吸收效率ꎮ２㊀丁酸梭菌的抑菌作用２.１㊀单个菌种的抑菌作用丁酸梭菌对一些常见有害菌具有抑制作用ꎮ唐宝英等[２４]研究证明ꎬ丁酸梭菌在体外对猪大肠杆菌㊁鸡大肠杆菌与鸡白痢沙门菌有较强的颉颃作用ꎮ同时丁酸梭菌还能够抑制霍乱弧菌的生长[２５]ꎮＡｋａｈａｓｈｉ等[２６]将丁酸梭菌Ｍｉｙａｉｒｉ５８８与致病性大肠杆菌Ｏ１５７:Ｈ７共同培养ꎬ发现丁酸梭菌不仅可以抑制致病性大肠杆菌的生长ꎬ减少类志贺氏毒素(Ｓｔｘ)的产生ꎬ并且可以抑制大肠杆菌对Ｃａｃｏ－２细胞的黏附ꎻ在小鼠模型中ꎬ观察到丁酸梭菌可有效降低致病性大肠杆菌所致的病死率ꎬ减少粪便中类志贺氏毒素Ｓｔｘ１和Ｓｔｘ２的含量ꎮ王腾浩等[２７]的研究表明:青霉素类㊁头孢类和四环素类抗生素对丁酸梭菌ＺＪＵ－Ｆ１的抑菌作用较强ꎬ在饲料生产中不宜配伍ꎻ丁酸梭菌ＺＪＵ－Ｆ１对多肽类㊁氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素耐受性较强ꎬ在动物生产中可以配伍ꎮ２.２㊀复合菌种的抑菌作用鼠李糖乳杆菌属于乳杆菌ꎬ不仅具有较强的耐酸与耐胆碱力[２８]ꎬ而且还具有抑制有害菌[２９]与抗氧化活性的作用ꎬ并且能够调节机体的免疫功能ꎮ目前丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌均被广泛用作饲料添加剂ꎮ张玲等[３０]的研究表明ꎬ将丁酸梭菌与来自于肠道中的沙门氏菌㊁金黄色葡萄球菌㊁产气荚膜梭菌与大肠杆菌等４种致病菌混合培养ꎬ可将这些致病菌的菌落数降低３~５个数量级ꎬ表现出明显的抑菌作用ꎬ但当丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌组成复合菌ꎬ再与这４种致病菌混合培养ꎬ这些致病菌的菌落数仅降低３~４个数量级ꎮ表明丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌在抑菌方面ꎬ不存在正的组合效应ꎬ也就是无协同作用ꎮ２.３㊀日粮中预防性地添加丁酸梭菌目前丁酸梭菌在生产上的使用主要是预防性地添加到动物日粮中ꎬ但预防性添加的丁酸梭菌对健康机体在急性应激致损时的应用效果鲜见报道ꎬ预防性添加能否帮助健康宿主缓解急性应激损伤还有待进一步研究ꎮ吴杰等[３１]研究了丁酸梭菌对健康大鼠生长性能及脂多糖(Ｌｉ￣ｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓꎬＬＰＳ)致急性应激大鼠肠道结构㊁肠道二糖酶活性及肠道炎症的影响ꎮ发现日粮中添加０.０５％丁酸梭菌对健康大鼠的生长无负面影响ꎬ给大鼠饲喂预防性剂量的丁酸梭菌可抑制ＬＰＳ急性应激下ＬＰＳ对肠道蔗糖酶活性的降低ꎬ缓解ＬＰＳ对肠道黏膜结构(绒毛高度和隐窝深度)的破坏ꎬ提高宿主肠道免疫功能ꎬ降低肠道炎症ꎮ３㊀丁酸梭菌调节肠道菌群的作用机制丁酸梭菌调节肠道菌群结构ꎬ是多因素综合作用的结果ꎬ其机理较复杂ꎬ其中一个重要的作用机理就是丁酸梭菌所产生的丁酸梭菌素这种蛋白质类抗菌物质ꎬ对梭状芽孢杆菌等致病菌的杀灭作用ꎮ丁酸梭菌素最先由威尔士阿伯里斯特威斯大学学院的Ｃｌａｒｋｅ等[３２]从丁酸梭菌ＮＣＩＢ７４２３菌株中分离到ꎬ命名为丁酸梭菌素７４２３ꎬ而且是在对数期生长的丁酸梭菌ＮＣＩＢ７４２３分泌的丁酸梭菌素最多ꎮＫｏｎｉｓｋｙ[３３]指出ꎬ丁酸梭菌素是一种疏水的细菌素ꎬ经丁酸梭菌处理的细胞ꎬ其ＤＮＡ㊁ＲＮＡ和蛋白质的合成受到抑制ꎬ且其Ｆ１Ｆ０－ＡＴＰａｓｅ活性也受到抑制ꎬ导致ＡＴＰ浓度降低ꎬ细胞内的Ｋ＋外流ꎮ巴斯德梭状芽孢杆菌经过量的丁酸梭菌素处理后ꎬ其细胞膜的通透性改变ꎬ细胞内的代谢产物和一些离子流出胞外ꎮ如用丁酸梭菌素处理已吸收铷离子(８６Ｒｂ＋)的梭状芽孢杆菌ꎬ则８６Ｒｂ＋迅速地从细胞内流出ꎮ在非致死量低浓度丁酸梭菌素作用下ꎬ巴斯德梭状芽孢杆菌的Ｋ＋外流但不影响膜电势的变化ꎻ在致死或超致死浓度的丁酸梭菌素作用下ꎬ巴斯德梭状芽孢杆菌的膜电势被消除ꎬＫ＋的主动吸收也被破坏[３４]ꎮ关于丁酸梭菌素的分子结构㊁作用机制及其抗菌谱等ꎬ目前还了解得不是很清楚ꎮＫｕｒｏｉｗａ等[３５]的研究表明ꎬ丁酸梭菌之所以能够促进肠道有益菌的增长ꎬ是因为:①丁酸梭菌在肠道中产生的淀粉酶ꎬ将淀粉水解成低聚糖ꎬ供乳酸菌与双歧杆菌利用ꎬ从而增加了乳酸菌与双歧杆菌的数量ꎻ②丁酸梭菌不能分解蛋白质ꎬ因此也就不会产生氨㊁硫化氢与吲哚等有害物质ꎬ也就不会引起宿主中毒或器官的病理性变化ꎻ③丁酸梭菌增殖快ꎬ能够产生大量有机酸(丁酸㊁醋酸与乳酸等)ꎬ降低肠道ｐＨꎬ使有害致病菌生长受限ꎮ参考文献[１]赵熙ꎬ冉陆ꎬ杨宝兰ꎬ等.丁酸梭菌活菌制剂对肠道菌群影响的研究[Ｊ].中国微生态学杂志ꎬ１９９９ꎬ(６):１４－１５ꎬ２０.[２]朱晓慧ꎬ唐宝英ꎬ刘佳.酪酸菌对肠道有益菌的增殖作用和共生关系研究[Ｊ].中国微生态学杂志ꎬ２００４ꎬ１６(４):１９３－１９４.[３]刘婷婷ꎬ张帅ꎬ邓斐月ꎬ等.谷氨酰胺与丁酸梭菌对断奶仔猪生长性能㊁免疫功能㊁小肠形态和肠道菌群的影响[Ｊ].动物营养学报ꎬ２０１１ꎬ２３(６):９９８－１００５. 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丁酸梭菌的培养、鉴定、检测方法研究进展
1 丁酸梭菌活菌制剂是禁抗之后重要的肠道保健剂 等）不良条件，是禁抗之后重要的肠道保健剂之一。
对营养物质进行消化、吸收并发挥免疫调节作 用，是动物肠道的重要功能。所以，进行肠道保健、 维持肠道健康，尤其在禁抗之后，就显得非常必要。 目前，市场上有关肠道保健的产品很多，主要以酸化 剂、益生菌、中短链脂肪酸等为主，而中草药及其提 取物、精油、寡糖、纤维、酶制剂、谷氨酰胺等产品 亦发挥着重要作用。就目前的动物生产实践看，所有 这些方案中微生态（益生菌）制剂是重要的替抗方案 之一。所谓微生态制剂（Probioties），又叫益生菌制 剂（Probiotics）、活菌制剂（Bigone）。它是运用微 生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌，经特殊工 艺制成的制剂，对动物具有整肠作用，能够较好地防治 动物便秘、炎症、腹泻，并对动物的生长具有较好的促 进作用。丁酸梭菌制剂既产芽孢又产酸，具有芽孢杆菌 制剂与乳酸菌制剂的优点，作为活菌制剂稳定性较好， 不需包被即能耐受胃酸与胆汁酸以及外界（制粒、贮存
收稿日期 ：2019-02-28 基金项目 ：黄石市重大技术研发项目（2017A013）；中央农业技术项
目推广，博士，研究员，主要从
事动物营养与繁殖研究工作。
2 丁酸梭菌的培养
大规模生产下丁酸梭菌制剂的菌体生物量低，是制 约其在动物生产中推广普及的主要因素。常用的培养丁酸 梭菌的方法有固态培养法、响应面法、混合培养法等。 2.1 固态培养法
响应面法（Response Surface Method），又称 响应曲面法，是通过对响应曲面及等高线的分析寻求最 优工艺参数，采用多元二次回归方程来拟合响应值与因
18
2019·6 饲料 FEED & FEEDING 饲养
素之间函数关系的一种优化统计方法，其优点是在实验 条件优化过程中可以连续地对实验因素的各个水平进 行分析，克服了正交实验[3,4]只能对一个个孤立的实验 点进行分析和不能给出直观图形的缺陷，所以被广泛应 用于微生物发酵条件的优化和模型的建立[5,6]。徐莹等[7] 利用响应面法优化丁酸梭菌清液发酵工艺，将丁酸梭菌 的生物量由6.96×107cfu/mL提高到3×108cfu/mL。孔 青等[8]采用中心组合实验（Central Compose Design, CCD）优化丁酸梭菌淀粉培养基，最终将生物量提高 到2.55×108cfu/mL。李雯静等[9]对从健康羊粪便中提 取到的一株具有良好益生特性和抗逆性能的羊源丁酸梭 菌（命名为HDRyYB1菌株）的发酵工艺进行了优化， 其发酵培养基组分（质量体积比）为：面粉3.72%、鱼 粉0.90%、米粉3.96%、酵母粉0.60%、NaCl 0.19%、 MgSO4·7H2O 0.19%、KH2PO4 0.01%、NaHCO3 0.01%、CaCO30.48%；其培养参数为：37℃，初始 pH7.2～7.4，瓶装量100/250，接种量3%。经此优 化后，HDRyYB1菌株发酵完全（18h）的芽孢数可达 1.478×108cfu/mL，是优化前的2.7倍。经李雯静等[9] 优化用于发酵的培养基，具有两个显著特点：一是以米 粉、面粉等淀粉质原料作为碳源，来源广，价格便宜； 二是以鱼粉、酵母粉等有机氮作为氮源，蛋白质、多肽 和游离氨基酸的含量丰富，不仅为丁酸梭菌的快速生长 提供了营养，也为丁酸梭菌后期芽孢的快速产生提供了 营养。试验表明，丁酸梭菌经18h时培养后芽孢完全成 熟，这为进一步用于大规模生产提供了数据支撑。邢宏 观等[10]首先采用单因素试验设计法，即利用PlackettBurman试验设计，筛选出影响丁酸梭菌菌体数的显著 性因素，从而对影响丁酸梭菌生物量发酵液的相关组分 进行初步优化；然后在此基础上，运用最陡爬坡试验找 出中心组合设计的中心点，并确定可降低生产成本的非 显著因素的最低添加量；最后运用响应面分析法进一步 优化丁酸梭菌的发酵配方，从而获得最佳发酵培养基的 组成成分，并确定最佳培养条件。其试验结果表明， 酵母浸粉、FeSO4与K2HPO4是影响菌体数量的3个显著 性因素；最佳培养基组成为：可溶性淀粉2%、酵母浸 粉6%、FeSO4 1.74%、K2HPO4 0.37%、NaCl 0.2%、 MgSO4 0.024%；其菌体数可达1.01×109cfu/mL，较 优化前的2.3×108cfu/mL提高了4.39倍。
丁酸梭菌优良菌株LXYB-2抑菌活性及抗逆性研究
丁酸梭菌优良菌株LXYB-2抑菌活性及抗逆性研究谢丽静;王丽;王伟华;王海宽;张仁文【摘要】该研究以一株丁酸梭菌(Clostridium butyricum)LXKJ-1为出发菌株,通过常压室温等离子体(ARTP)诱变得到的一株耐丁酸钠突变菌株LXYB-2,采用牛津杯法比较菌株LXYB-2与菌株LXKJ-1的抑菌能力,同时采用活菌计数法对两株菌株的耐高温、人工胃液、人工肠液及胆盐等抗逆性进行比较.结果表明,两株菌株对9种常见致病菌均有较好的抑菌活性,除单核细胞增生李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌外,两株菌的抑菌活性差异显著(P＜0.05).在高温90℃处理5 min时,两株菌耐受性差异显著(P＜0.05);人工胃、肠液耐受性实验结果无显著差异(P＞0.05);在胆盐质量分数达到0.4％时,两株菌胆盐耐受性差异显著(P＜0.05).优良菌株LXYB-2更适合作为益生菌饲料添加剂产品应用于动物养殖业.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2018(037)006【总页数】6页(P91-96)【关键词】优良菌株LXYB-2;出发菌株LXKJ-1;丁酸梭菌;抑菌能力;抗逆性【作者】谢丽静;王丽;王伟华;王海宽;张仁文【作者单位】湖北绿雪生物科技有限公司,湖北咸宁437000;湖北绿雪生物科技有限公司,湖北咸宁437000;塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔843300;天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室,天津300457;湖北绿雪生物科技有限公司,湖北咸宁437000【正文语种】中文【中图分类】S831.5丁酸梭菌（Clostridium butyricum）属于厌氧革兰氏阳性菌，电子显微镜下观察其菌体形态呈直或略有弯曲的杆状，单个或成对，部分呈丝状，短链，白色略带灰感，细菌直径为（0.6～1.4）×（2.7～7.3）μm，菌体中间略饱满，两端呈钝圆形，周身有鞭毛，具运动性[1]。
我是丁酸梭菌,我要向大家道歉!
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我要给大肠杆菌道歉，因为我在肠道的占位导致你流离失所，我向你说声对不起
我要给给沙门氏菌道歉，因为我能降低肠道PH值，导致你无家可归的情况下还没有了生存环境
我要给肠炎道歉，因为我的存在你的小弟们不能为你服务，让你没有崛起之日我抱歉之极
但是我只能说一声，对不起，我是丁酸梭菌
世间万物皆阴阳，相生相克
木之于火，火之于水，老鼠之于猫，而肠道致病菌之于丁酸梭菌
我要向猪猪们道歉，因为我的到来，让你肠道吸收好了，吃的多，拉的少了，让你提
前出栏，提前接受了命运的制裁，我很抱歉，你本可以多做几天猪的。
我要向蛋鸡们道歉，因为我，你脆弱的肠道变得更健康了，但是你产的鸡蛋变得更大，更重，产蛋率也高了很多，让你产蛋的时候更辛苦了，我向你说声对不起。
我要向奶牛道歉，我让你产后加快恢复体力，采食量增加，产奶量也跟着上来了，我
知道你其实想好好休息一下。
我要向抗生素道歉，因为我对你不敏感，让你没起到应有的作用，很是抱歉。
要道歉的太多太多，只是，对不起，我是丁酸梭菌。
唯一不需要我道歉的就是人类，他们作为世界的主人，滥用抗生素肆意破坏着环境，
超级细菌我可搞不过，最后难以维生的是他们。
虽然现在有所收敛，但是远远不够啊。
我提高动物的生产性能最后服务不都是你们吗？觉醒吧，愚蠢的凡人。
当然，丁酸梭菌哪家强，金百合生物来帮忙！。
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关于丁酸梭菌，在前面有很多很多很多的文章都提到过，有心的朋友可以去河南金百合生物网站看一下，今天河南金百合生物窦子带大家深入的了解丁酸梭菌抑制细菌的一些问题，今天给大家做一个丁酸梭菌抑制细菌的实验报告，大家仔细看了。
首先老生常谈，丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，丁酸梭状芽孢杆菌，是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌。
丁酸梭菌代谢产物的突出特点就是丁酸、B族维生素以及叶酸含量高。
大量研究表明，丁酸梭菌具有极强的整肠作用，它能够通过抑制致病菌的生长繁殖从而调节肠道的微生态平衡，预防和治疗腹泻、肠炎等疾病。
1 实验材料
共培养用液体培养基；LB培养基
2 实验方法
2.1 丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌的抑制作用
①霍乱沙门氏菌种子培养：取平板活化好的菌种转接到LB液体三角瓶中，装液量25 mL/100 mL， 37℃，150 r/min培养12-24h，取培养菌液测活菌数和pH值。
②丁酸梭菌单独培养：取丁酸梭菌菌粉0.1 g接种到装量为25
mL/30mL的细菌培养瓶中，置于37℃静止恒温培养24 h左右。
（可按此比例扩大培养体积，最低比例为0.1 g：25 mL）
③丁酸梭菌和霍乱沙门氏菌混合培养：活化好的丁酸梭菌培养液5 mL 接种到装液量为20 mL/30mL的细菌培养瓶中，再把培养好的霍乱沙门氏菌菌液1 mL同时接入该共培养液中， 37℃恒温静止培养。
对照组为向同样的共培养液体培养基中（装液量为20 mL/30 mL）接种霍
乱沙门氏菌菌液1 mL，37℃恒温静止培养。
分别在16和24 h测pH 值及沙门氏菌活菌数。
④计数采用平板涂布法。
选择2～3个适宜梯度稀释液，吸取100 μL 涂布平板，倒置于严格厌氧培养箱或严格厌氧培养袋中，37℃培养18～36 h后计数。
每个梯度做两个平行，每个平板的菌落数在30～300范围内有效。
2.2 丁酸梭菌对肠出血性大肠杆菌、魏氏梭菌的抑制作用
实验方法同上，魏氏梭菌种子液为严格厌氧，应采用共培养液体培养基。
3 实验结果
3.1 对霍乱沙门氏菌的抑制结果
丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌表现出非常强的抑制作用，24h活菌数从单独培养时2.0×108CFU·mL-1减少到1.2×103CFU·mL-1。
3.2 对肠出血性大肠杆菌的抑制结果
混合培养16h，肠出血性大肠杆菌活菌数从单独培养时3.5×
108CFU·mL-1减少到7×106CFU·mL-1，24 h活菌数减少到0.4×106CFU·mL-1，pH从6.8下降至4.6，呈现良好抑制作用。
3.3 对魏氏梭菌的抑制作用
混合培养后，魏氏梭菌活菌数从单独培养时的1×108 CFU·mL-1减少到1×105CFU·mL-1， pH值从6.8下降到4.5，表现出良好的抑制作用。
4 小结
（1）丁酸梭菌为严格厌氧菌，产氢气。
液体培养基中加入厌氧指示剂，粉红色表明培养基上层有氧；
培养一段时候后液体表面有气泡，为正常现象。
（2）丁酸梭菌平板形态如下。
（3）丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌和魏氏梭菌均有显著的抑制作用，可将肠出血性大肠杆菌和魏氏梭菌细菌含量控制在发
病浓度之下，防止发病。
尤其是对霍乱沙门氏菌抑制作用更强，可以
达到净化霍乱沙门氏菌的作用。
5、结论
丁酸梭菌在体内的定植产生大量的丁酸、乙酸、乳酸等短链脂肪酸，以及B族维生素、叶酸和一些消化酶类，促进肠道内有益菌群如双歧杆菌等乳酸菌的增殖，抑制魏氏梭菌、肠出血性大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的繁殖，减少氨、胺、吲哚等肠道毒素的产生及对肠粘膜的毒害，使肠道内水分潴留明显减少，进而避免了其所导致各种肠道疾病的发生（坏死性肠炎、结肠炎、回肠炎等），恢复肠免疫功能和正常的生理功能，达到无病防病、有病治病的作用。
希望丁酸梭菌在以后健康养殖，绿色养殖上面大放异彩。
今天的报告就到这里了，关于微生态、关于健康养殖、关于丁酸梭菌您都可以都金百合生物官网去看看，或者联系河南金百合生物窦子。