血液标本采集与处理

分离原理：分离胶的比重约在 1.04～1.05之间。（血清的比 重约在1.026～1.031之间，血 细胞的比重约在1.092～1.095 之间，在离心力的作用下，分 离胶就在血清和血块间形成隔 离层）。
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血液标本采集和保存的质量控制
采血场所要求： 空间宽敞， 光线明亮， 通风良好， 台面高低和宽度适宜， 设置叫号设备系统等。 防止交叉感染， 履行环境消毒 。
２、具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态， 当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或 者网状结构，增加细胞结构的表面积，提高对 染料的吸附作用，增强染色效果。
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（四）动脉采血法
部位:桡动脉,股动脉,肱动脉 适用:血气分析测定 抗凝剂:肝素 注意事项:(1)必须隔绝空气
(2)及时送检，止血10-15min
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采血的方法学评价
皮肤采血主要缺点是易于溶血、凝血和可能混入组织液。 检查结果重复性差，现在多已改用静脉采血。 开放式采血由于操作环节多、难于规范统一，在移液及丢 弃注射器时可能造成环境污染。 封闭式采血法操作规范，从静脉穿刺到血标本转运，整个 过程血标本皆不与外界接触。既有利于标本的收集运送和 保存，也有利于防止医院内血源性传染病的交叉感染和环 境保护。
结果：
不够稳定，不能重复
一般较静脉血高
影响因素： 多（部位、气候、采血技术)
注意事项：一人一针一次使用，去第一滴血，
采血动作要快，首采血小板计数
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自动皮肤采血法
TZD-100的工作原理：
仪器中的激光发射器在不超过500μS时间 内发出一束波长为2.94μm的激光,在耗材（一 次性）—镜头保护片的配合下，细微的光束 打在采血者手指的滑囊处，在1/1000秒时间内 使皮肤瞬间温度达到1K℃左右,组织溶解、挥 发,出现一个0.5毫米的小孔，而打孔后的残留 物呈现出等离子状态，吸附在镜头保护片的 表面,从而实现采集血液样本的目的。标本广 泛运用于血常规、血型、各类干化学测试等 一切使用适量末梢血的分析项目,适合于各种 类型的医疗机构使用。
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第一节 血液标本的采集
三、血液标本的采集方法
血液标本的采集 (The Collection of Blood) 是分析前质控的重要环节，直接影响到检 验结果的准确性。
Note:很多因素会影响到血液标本检测: 患者的活动情况和精神状态、药物、年龄、性别、 种族、标本采集的时间以及是否吸烟等
根据检验项目来选择采集方法（量、抗凝、、、）。 血液标本采集后应立即送检，并尽快进行检查。
溶血和微凝血，结果准确可靠。国际统一头盖颜色标记，易于选择、辨认
及分类
经济有效：省略采样及试验前繁杂准备工作，节省了人力和物力；定量
采集，避免患者血样浪费；直接上机检测，减少不必要操作且样品中无微
血块，避免机器堵塞；减少因溶血或异常凝血造成的误检和再检；减少因
误检而导致患者诊断及治疗的延误
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真空采血采集步骤
血浆：为全血除去血细胞的部分，适合临床生化检查，特 别是内分泌激素的测定；血浆除钙离子外，含有其他全部凝 血因子，适合血栓与止血的检查
血清：是离体后的血液自然凝固后析出的液体部分，除纤 维蛋白原等凝血因子在凝血时消耗外，其他成分与血浆基本 相同，更适用于多数临床化学和临床免疫学检查。
血细胞：浓缩粒细胞，血小板等
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常用抗凝剂
乙二胺四乙酸（EDTA）盐适用： 血细胞计数。 用量为EDTA-K2-2H2O 1.5～2.2mg /ml血液
不适合: 出凝血检查。
用法:15g/L，0.4ml/5mlBlood
特点:对细胞形态影响小，但影响血小板聚集
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常用抗凝剂
2.枸椽酸钠（trisodium citrate） 原理： 可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从 而阻止血液凝固。 2Na3C6H5O7+2Ca2+→2CaC6H5O7-+6Na+
不影响血细胞体积、 不易溶血 过量会使WBC凝集、PLT减少
不适于血液学一般检查
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常用抗凝剂
4.草酸钠（sodium oxalate）原理：
草酸钠可与血中钙离子生成草酸钙沉淀， 从而阻止血液凝固。 适用：可用于凝血象检查。 用法：常用0.1mol/L浓度，与血液按1：9比例使用。 特点：
对凝血V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定效果； 由于草酸盐与钙结合形成的是沉淀物，影响自动凝血仪 的使用，因此，多数学者认为凝血象检查选用枸椽酸钠为抗 凝剂更为适宜。
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（二）静脉采血法 venipuncture for blood collection
严格生物安全防护技术：戴帽、口罩、手套、 一人一针一带。严格遵守窗口人员采血规范
确认病人信息：询问、医疗就诊卡… 确认采血项目使用的采血管类型 选取静脉采血部位：肘部静脉,手背静脉,股静
脉、颈外静脉。 不能采血部位：水肿、血肿、疤痕、点滴侧静
脉。 确认采血量，采血下班后应记录工作日记
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静脉采血法特点
部位： 肘部静脉,手背静脉, 股静脉、颈外静脉等
用血量： 较多（≥2ml） 适用范围： 广（生化、血液、微生物）
结果： 稳定，可重复
影响因素： 少， 但要防止溶血
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静脉采血法常见问题
血肿淤青：穿刺太深、太浅、针头晃动、止血按压方 式错误（揉搓）
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真空采血法特点：
干净安全：钴60照射，保证内壁100%无菌；去离子水和去污剂冲洗，内
壁无致热源；并经硅酮处理；超净室内组装：标本溶血或被外源性物质污
染的可能性极小
简便快捷：不需配制添加剂，平均减少采血时间20%，检验操作时间12%；
减少患者不适：可实现一针多管操作
准确可靠：预置真空度准确定量采样，血样与添加剂的比例准确，减少
凝固：采血的技术问题；抗凝剂没加或失效；抗凝剂 没有充分混匀止血带压迫时间过长。
溶血： 器材不干燥、不清洁；血液注入试管时产生大 量气泡；针头没有拔下；混匀或搅拌时过猛。
晕血解救：让病人平躺或指掐人中合谷。
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采血时注意：
血量的多少 抗凝剂是否需要 试管的编号、是否加塞、保存的方式 晕血的处理 止血带压迫时间不宜过长，最好不超过半分钟 注射器和容器必须干燥 抽血不宜过快 采血后禁止直接用手拔针头。
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常用抗凝剂
枸椽酸钠（trisodium citrate适用： 出凝血(1:9)、血沉(1:4)、血液保养液 用法： 109mmol/L
当红细胞压积＞0.55或＜0.20时：
抗凝剂用量（ml）=0.00185×血量×（100—病人红细胞比积%） 对贫血或红细胞增多症患者的血液仍按1：9的比例加入抗凝剂 就会发生抗凝剂相对过多/少，这将明显地影响凝血象检查结果。
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常用抗凝剂
5.双草酸盐抗凝剂：
原理： 草酸钾可使红细胞缩小，而草酸铵可使 红细胞胀大，二者适量混合后，恰好不 影响红细胞的形态和体积。
适用： 红细胞比积
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ29
物理法抗凝
原理：用物理搅拌的方法去除纤维蛋白 使用：玻璃珠转动器皿采集血培养的绵
羊血；用竹签搅拌法抗凝，进行红斑狼 疮细胞检查。
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第二节 血液标本处理
抗凝（Anticoagulation）： 应用物理或化学的方法，除去或抑制血液中某些 凝血因子的活性，以阻止血液凝固。
抗凝剂（Anticoagulant）： 能够阻止血液凝固的化学试剂或物质。
促凝(Coagulation )：就是用化学物质激活血液中的纤 维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白原变为不可溶的纤维蛋 白多聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块，可在短时 间内（5分钟左右）加速所采集的血液凝固加速血液凝 固的过程。
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二、血涂片制备方法
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两种推片方式
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三、一张良好的血涂片要求
良好的血片：厚薄适宜，头体尾分明， 分布均匀，边缘整齐、 两边留有一定的空隙。
影响因素：血量（多——厚） 速度（快——厚） 角度（大——厚），一般30—45度。
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四、血片的染色
1．瑞氏（Wright）染色法 伊红
瑞氏染料： 1g 甲醇（AR）:600ml
临床基础检验
第一章血液标本采集与处理
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第一节 血液标本的采集
一、标本采集的要求 检验申请：身份证实名制挂号，真实！ 采集和处理要求：LIS条码可以自动显示 标本信息完整性：采集流程控制 标本拒收：应制定标准拒收SOP文件。
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第一节 血液标本的采集
二、血液标本类型
全血：由血细胞和血浆组成，主要用于临床血液学检查， 如血细胞计数、分类和形态学检查等。如静脉、动脉、毛细 胞血管全血。
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常用抗凝剂
1、 EDTA盐 （乙二胺四乙酸盐）
2、 枸橼酸钠 （柠檬酸钠）
3、 肝素
4、 其它（草酸盐等）
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常用抗凝剂
1、乙二胺四乙酸（EDTA）盐： 原理： EDTA有二钠、二钾和三钾盐，均可与钙 离子结合成螯合物，从而阻止血液凝固。 Na2C10H14O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na++2H+
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真空采血常用器材及用途
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真空采血容器色泽及应用范围
颜色
抗凝剂
应用范围
灰
草酸盐、氟化钠
全血、血浆，抑制糖原分解的酶
黄
生化、免疫检验
绿
肝素
全血、血浆
红
血清
蓝
枸橼酸盐
全血、血浆，凝血一般检查
紫 乙二胺四乙酸盐 全血、血浆
钾盐用于血细胞、血小板和血液学检查
黑色
枸橼酸盐
血沉
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BD公司建议：无菌培养管-无添加剂红色管-出凝血-生化管-血常规-血糖
美蓝
瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲 蓝组成的复合染料。
亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结 构，通常为氯盐，即氯化美蓝。
伊红通常为钠盐
将一定的伊红和美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染液。
ME 甲醇
M+ + E-
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甲醇的作用
１、溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E-，后 两者可以选择性地被吸附于血细胞内的不同成 分而着色。
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常用抗凝剂
3.肝素（heparin）：钠盐或锂盐 原理：由肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生，加强
抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶的作用， 从而阻止凝血酶形成
适用：血液流变学、RBC脆性、血气分析、生
化分析
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常用抗凝剂
肝素（heparin）
用量：15IU/1mlBlood 特点：抗凝效果强；
废弃标本处理：《实验 室生物安全通用要求》 （GB19489-2004）
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第三节 血涂片的制备和细胞染色
Making Blood Films and Staining
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一、制备血涂片的玻片要求
玻片要求：清洁、干燥、中性、无油腻 新玻片： 重铬酸钾洗液或稀盐酸10%浸泡
24小时，然后清洗。 旧玻片： 肥皂水泡，煮沸20分，清洗，烘干。 推片： 光滑
患者状态要求： 生理状态 饮食药物 采血时间 采血部位体位 输液 压脉带使用 溶血、凝血和脂血
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血液标本采集和保存的质量控制
标本运送及保存 ： 唯一标识原则 生物安全原则 尽快运送原则 一般4℃ 冰箱； －20℃ 冰箱（1月） －70℃保存（3月）。
标本拒收常见原因：
溶血、脂血、抗凝标本 出现凝固、血液采集容 器不当、采血量不足或 错误、转运条件不当、 申请和标本标签不一致、 标本污染、容器破漏等
真空采血常用促凝剂
种类：凝血酶、蛇毒、硅石粉、硅碳素、 纤维蛋白酶等
原理：激活凝血蛋白酶，加速血液凝固 适用项目：血清生化、免疫检验
特别适用于急诊血清生化检验
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真空采血分离胶
分离胶:是一种聚合高分子材料， 不溶于水，具有抗氧化，耐高 温，抗低温，高稳定性等特性 分离胶具有触变性的性质。触 变性现象就是凝胶和溶胶在机 械力作用下的互变现象 .
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（一）皮肤采血法 （skin puncture for bloodcollection )
以前叫毛细血管采血法
( The Collection of Copillary Blood ) 视频录像观看
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皮肤采血法特点
部位 ： 左手无名指指尖内侧
、耳垂、足根等
用血量：
少（﹤0.5ml）
适用范围 ： 窄（细胞计数 、Hb）
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（三）真空采血法（vacuum tube for bloodcollection）
真空采血法，又称为负压采血法。 国内外已生产专供医学检验使用的真空采血 装置，有套筒式（硬接式）和头皮静脉式（软接式）两种，后者 还设计备有软橡皮套管式止血装置，穿刺回血后，即可将另一端 的硬插管插入真空定量硅化的采血试管中，血液足量后，拔出硬 插管即止血，当插另一真空定量试管时又可采血，整个采血过程 无血液外溢和污染。血标本转运方便，特别适用于病房和野外流 动采血；能避免对医护人员的感染和患者血标本间的交叉污染。