生物化学实验课件
《生物化学大实验》课件
分子生物学基本概念
深入探究DNA和RNA的功能及其在遗传学中的 应用，以及基因转录和翻译的分子机制。
蛋白质的结构和功能
探究蛋白质的三级结构，以及它们在细胞代谢过 程中所扮演的角色和功能。
样本制备
1
样本收集
收集到分离它们所需要细胞结构。
2 个人在实验中的收获
分享个人在实验中收获的方面，包括技能和知识的提高以及更广泛的收获。
3 对未来实验的展望
展望未来实验中可能遇到的挑战，提供有效的解决方案。
生物化学大实验
欢迎来到《生物化学大实验》PPT课件。本课程将介绍生物化学和分子生物 学的概念，酶的作用及机制，以及蛋白质的结构和功能。我们还将深入了解 实验过程并分享实验的结果和分析。
知识点介绍
生物化学基本概念
了解生物大分子，如蛋白质、核酸等的组成和结 构，以及它们在生命活动过程中的作用。
酶的作用及机制
细胞破碎液制备
2
将细胞破碎并加入含有缓冲液的溶液中。
3
离心和裂解
使用高速离心机离心裂。
利用生物化学技术从混合物中纯化蛋白 质。
蛋白质检测
Lowry方法
利用此化学方法可测定样品中蛋 白的含量。
Bradford方法
此方法是结合了蛋白质与染料结 合的测量方法。
BCA法
BCA法是利用氢氧化物还原双烷 基四氯化钴为蓝色络合物，来测 定蛋白质的含量。
酶活性测定
酶促反应原理
明白酶对催化反应的影响以及如何准确测定酶的含量。
酶活性的测定方法
学习测量酶活性的几种标准方法，并了解如何选择最佳方法。
酶的特定测量
《生物化学实验指导》课件
实验操作问题
实验设备使用不当，导致设备损 坏或实验失败。
解决方法
加强实验材料管理，确保学生正 确使用和管理实验材料。
实验操作问题
实验材料管理不善，导致实验结 果受影响。
解决方法
提供设备使用说明和注意事项， 确保学生正确使用设备。
实验结果异常分析与处理
异常分析
01 实验结果与预期不符，可能存
在误差或错误。
01
02
03
实验技术原理
介绍实验所涉及的基本原 理，包括生物学、化学和 物理学原理等。
实验步骤
详细描述实验的操作流程 ，包括实验前的准备、实 验操作步骤、实验后处理 等。
注意事项
提醒实验中需要注意的事 项，以确保实验的准确性 和安全性。
实验数据分析与处理
数据收集
说明如何收集实验数据， 包括仪器的使用和数据的 记录等。
按照指导老师的安排进行实验 操作，不得擅自更改实验步骤
或使用未经批准的试剂
爱护实验室设备和器材，保持 实验室卫生整洁
02
生物化学实验基本操作
实验器材介绍与使用
实验器材
介绍生物化学实验中常用的实验 器材，如烧杯、量筒、滴管、离 心管等，并说明其用途和特点。
使用方法
详细介绍各种实验器材的使用方 法和注意事项，确保学生正确使 用，避免因操作不当造成实验误 差或安全事故。
04
生物化学实验案例分析
案例一：DNA提取与鉴定
总结词
基础实验，了解DNA提取与鉴定的基本原理和操作步骤。
详细描述
本案例介绍了DNA提取与鉴定的基本原理、实验材料、操作步骤、注意事项和 实验结果分析，旨在让学生了解DNA提取与鉴定的基本过程，掌握相关的实验 技能。
生物化学实验五《聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白》课件
➢ 分辨率高 ➢ 用于复杂和特殊样品的分离
6
不连续电泳的四种不连续体系
➢凝胶的不连续 ➢缓冲液成份的不连续 ➢缓冲液pH值的不连续 ➢电压梯度的不连续
不连续电泳的三种物理效应
➢ 样品的浓缩效应 ➢ 凝胶的分子筛效应 ➢ 电荷效应
电泳的过程三种效应同时存在，对蛋白样品起协同作用，使样品各组 分按照带电量、分子质量及形状按一定的顺序分离。
7
三、实验步骤
封槽
清洁、干燥的小玻管一端，用Parafilm贴封后垂直放在管架上
8
制胶和灌胶
分离胶：A:C:D:E＝1:2:3:2（V/V） 浓缩胶：B:C:D:E＝2:1:5:2（V/V）
➢ A: pH8.9 Tris/Hcl缓冲液
➢ B: pH6.7 Tris/Hcl缓冲液
➢ C: 30% Acr-Bis贮存液
电泳
➢ 连接电极，上负下正； ➢ 浓缩胶：3mA／管，分离胶：4mA／管； ➢ 待示踪染料接近凝胶管底部约0.5cm处，切断电源。
剥胶
取下凝胶管，用注射器吸取一定量的蒸馏水，将针头插入胶柱-与管内壁之间 ，边注水边旋转玻管，直至胶柱与管壁分离，然后用洗耳球轻轻在玻管的一 端加压，使凝胶柱从玻管缓慢滑出，将凝胶柱置于干净的试管内，用蒸馏水 冲洗几次。
实验五 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白 动物医学院动物生化教研室
1
一、实验目的
① 掌握聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的原理； ② 学习聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的操作技术； ③ 了解血清蛋白的主要成份。
2
二、实验原理
➢ 不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白样品通过浓缩胶的浓 缩按分子大小排列成层，然后进入分离胶，随着电泳的不断进行 ，不同大小、电荷的蛋白质分子逐渐被分开。
临床生物化学检验实验课件
实验室评估指标体系建立
评估指标的选择
根据实验室工作特点和质量控制要求，选择具有代表性的指标，如实验结果的准确性、精 密度、可比性等。
评估方法的确定
采用定量和定性相结合的方法，对各项指标进行客观、公正的评价。例如，通过计算标准 差、变异系数等统计量来评价实验结果的精密度；通过比对实验、方法学评价等手段来评 价实验结果的准确性。
排除检测误差、个体差异等因素， 确认结果是否真实异常。
分析异常原因
结合患者临床表现、病史等信息， 分析异常结果的可能原因。
进一步检查建议
根据异常结果及其可能原因，提 出进一步检查以明确诊断的建议。
临床案例讨论
案例选择
选择具有代表性的临床案例，涉及不同疾病类型、不同生化指标异 常等。
案例讨论
分析案例中的异常生化指标，讨论其可能原因、诊断意义及治疗方 案。
实验室安全是实验工作的重要保障， 必须严格遵守实验室安全规定，注意 防火、防爆、防毒、防辐射等安全事 项。
实验过程中应穿戴实验服和防护用品， 避免直接接触有毒有害物质，注意个 人卫生和实验废弃物的处理。
实验前应认真检查实验仪器和试剂是 否完好，熟悉实验操作流程和注意事 项，确保实验过程的安全和顺利进行。
05 实验结果解读与临床应用
正常参考范围及意义
正常参考范围的确定
基于大量健康人群的检测数据，采用统计学方法确定。
正常参考范围的意义
为临床诊断和治疗提供依据，帮助医生判断患者生化指标是否正常。
注意事项
不同实验室、不同检测方法可能有不同的正常参考范围，需结合具 体情况进行解读。
异常结果分析思路
确认异常结果
根据实验需求选择合适的 样本类型，如血液、尿液、 组织液等。
生物化学实验课件
(二) 还原作用 许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在 的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、 银等金属离子还原，同时糖类本身被氧化成糖 酸及其他产物。糖类这种性质常被利用 (lìyòng)于检测糖的还原性及还原糖的定量 测定。 本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克 特试剂。它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还 原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄 色（颗粒小）的Cu2O沉淀。 本尼迪克特试剂是改良的斐林试剂。（见 P100,101脚注）
第二十五页，共128页。
一、实验目的
1、学习和掌握(zhǎngwò)测定脂肪碘值
的原理和方法。
教材(jiàocái)第6、7页
2、了解和学习空白对照实验的原理和方
法
第二十六页，共128页。
二、实验原理(yuánlǐ) 碘值（价）是指100g脂肪在一定 条件下吸收碘的克数。碘值是鉴别脂 肪的一个重要常数，可用以判断脂肪 所含脂肪酸的不饱和程度。 脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱 和脂肪酸具有一个或多个双键，能与 卤素起加成作用而吸收卤素。
第三十二页，共128页。
附注 （1）碘瓶必须洁净、干燥，否则油中含有水分，引起反应 不完全。 （2）加碘试剂后，如发现碘瓶中颜色变浅褐色时，表明试 剂不够(bùgòu)，必须再添加10～15 mL试剂。 （3）如加入碘试剂后，液体变浊，这表明油脂在CCl4中溶 解不完全，可再加些CCl4。（4）将近滴定终点时，用力振荡 是本滴定成败的关键之一，否则容易滴加过头或不足。如震荡 不够(bùgòu)，CCl4展会出现紫或红色，此时应用力振荡，使 碘进入水层。 （5）淀粉溶液不宜加得过早，否则滴定值偏高。
第三十三页，共128页。
五、实验结果记录(jìlù) 1、原始数据记录(jìlù) 1）花生油的质量 W值 2）Na2S2O3摩尔浓度 C值
生物化学实验ppt-new全
淀粉在酸催化下加热，逐渐水解成分子较小的糖，最后水解 成葡萄糖，其过程如下：淀粉--各种糊精—麦芽糖—葡萄糖。淀 粉完全水解后，失去与碘的作用，同时出现单糖的还原性。
五、操作
1、RNA的提取 称取5g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶
液30ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，加入乙酸 数滴，使提取液呈酸性（PH5-6，用试纸试之），离心1015min（1000r/min）,取上清液，加入两倍体积的95%乙醇， 边加边搅拌。加毕，静置，待完全沉淀，离心5min （1000r/min），取沉淀物，沉淀物即为粗RNA，可作鉴 定和测定含量用。 2、鉴定
试剂
管号 0 1
2
4
6
2mg/ml卵清蛋白质/ml
0.0 0.3 0.6 1.2
1.8
蒸馏水/ml
3.0 2.7 2.4 1.8
1.2
双缩脲试剂/ml
2.0 2.0 2.0 2.0
2.0
充分混合，在540nm比色
蛋白质浓度/(mg/ml)
0.0 0.2 0.4 0.8
1.2
A540nm
需于显色后30min比色测定，30min后可能有雾状沉淀产生。各管由显色到比色的时间应尽 可能一致。
一、目的 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使 其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
生物化学实验课件
通过转氨基作用形成的氨基酸可通过展层层析检测。氨基酸的纸层析属 于分配层析，滤纸为支持介质，滤纸上所吸附的水为固定相，有机溶剂
为流动相。把混合氨基酸样品点于滤纸上，使流动相经样品点移动，混 合氨基酸在两相溶剂间进行分配，在固定相中分配比例较大的氨基酸， 随流动相移动的速度慢；在流动相中分配比例较大的氨基酸，随流动相 移动的速度快。由于各种氨基酸的分配系数不同，在一定时间内，逐渐 集中于滤纸上不同的部位，而彼此分离。层析完毕后显色，使氨基酸显 色形成斑点。
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3.仪器、试剂和材料 4. 操作步骤
具体参见实验指导书
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5. 结果处理
根据所测样品提取液吸光值，在标准曲线上查得 相应的蛋白质含量（μg），按下式计算：
样品蛋白 (g质 /鲜 g含 )重 查 样 量得 品(的 鲜 g)测 蛋 重( 定 白 g )提 时 质取 取 含液 用 量((m 总 提 m )ll体 取 ) 积 液
6. 注意事项
比色应在出现蓝色后2min~1h内完成。
20
7. 思考题
1）考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的 原理是什么？
2）如何正确使用分光光度计？
3）测定蛋白质含量还有哪些方法，测定原理 有哪些不同？
21
酶的基本性质
1.目的 酶是生物催化剂，是具有催化功能的蛋白质，
生物体内的化学反应基本上都是在酶催化下 进行的。通过本实验了解酶催化的高效性、 特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对 酶力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其 调控机理具有十分重要的意义。
5
2.1氨基酸的两性解离和等电点
2.1.1 氨基酸的两性解离
H 3 N + C RC HO K 1H O ' 3 N + C R H C H-O K 2H ' 2 O N C RC H-O
生物化学实验CQMU课件
实验步骤
酶作用反应的制备和处理，酶 的活性测定，酶催化动力学研 究。
实验结果分析
分析实验结果，计算酶的活性， 描绘酶动力学曲线并进行数据 进一步处理。
实验六：酵素的酶动力学研究
1
实验目的
探究酶的动力学特性，研究酶催化反应的动力学机制。
2
实验步骤
选择酶作用反应的底物，进行不同底物浓度下的反应速率的测定，绘制反应曲线。
参考文献
生物化学实验CQMU课件的PPT大纲，基于Wang、Lu、Hu、Zhang等多位生物化学研究者的技术文献。
3
实验结果分析
计算酶的Michaelis常数，比较酶的活性和动力学特性，了解酶的作用机理。
总结与展望
实验心得体会
总结实验的经验和心得体 会，发现自己在实验中的 优点和问题。
存在的问题与改进方 案
分析实验过程中存在的问 题和不足，提出改进方案 和建议。
展望未来实验研究方 向
展望未来的研究方向和实 验研究的发展趋势。
实验四：核酸的定量测定
实验目的
使用紫外分光光度法测定核 酸含量，掌握定量实验方法。
实验步骤
核酸样品的制备，取样和标 准曲线制作，吸光度测定。
实验结果分析
分析实验结果，计算核酸的 含量，了解紫外分光光度法 的原理和应用。
实验五：酵素的酶活测定
实验目的
测定酶的活性和酶的本质，了 解酵素的性质和应用。
样品制备，反应处理，酸水解， 抗坏血酸处理等步骤。
分析实验结果，了解双缩脲法 测定蛋白质含量的优缺点。
实验三：核酸的定性反应
1 实验目的
使用五羟甲基嘧啶检测核酸，了解核酸的性质和特性。
2 实验步骤
核酸样本的制备和提取，与嘧啶试剂的反应，加热变性。
生物化学实验设计PPT课件(初中科学)
。
实战演练：
（09杭州）某同学将生长状况类似的A、B二盆蚕豆幼苗分别置于
两个暗箱中，在B盆蚕豆幼苗的暗箱右侧开一小窗口，并在窗口外
侧装一个固定光源，保持其它环境条件适宜并相同。一星期后，
A,B两盆蚕豆幼苗的生长状况如图所示。请回答下列问题：
(1)该同学设计这一实验的目的是为了探究
单侧光对蚕豆幼苗生长的影响
（3）每组为什么要选用较多数量的胚 减少由于种子死亡 ？
或遗传差异带来的误差
实战演练：
(4）小芳同学认为叶绿素的合成除了需要镁等矿物质 元素外，还需要其他的一些环境条件。她设计了如下 表的方案。
分析小芳同学的实验设计，你认为她要研究的问题
是 叶绿素的合成是否需要光
。
根据实验设计方案提出研究问题的技能是:
。
化学实验设计和评价
❖ 化学实验设计题和实验评价题是对学生进行实验综合能力考 查的题型之一，是当前课程改革和中考所关注的热点。其命 题方式通常有：①设计反应原理 ②设计实验装置 ③设计操 作程序 ④侧重于某一要求的综合设计并含定量设计要求⑥以 批评的思想方法对所提供的实验方案进行评价。
❖ 解答实验设计题时，必须遵循“四性”：科学性、可行性、 规律性、创新性。即原理正确、操作简便、现象明显、药品 经济、结论可信、有创新意识。解答实验评价题时，要环绕 题目提供的多种方案，从原理是否科学合理、操作是否简单 可行、所用试剂是否经济、实验现象是否明显、是否体现 “绿色化学”等方面进行评价。
不同浓度的重金属污染液中的种子萌发率都比
蒸馏水中的低，幼苗根长也较短。随着重金属浓度 的升高，种子萌发率降低，幼苗根长也缩短。
活动二：
设计一份实验记录单
培养皿
污染液 浓度 萌发率
生物化学实验课件
• 用醋酸和醋酸钠配制成各种不同pH值的缓冲液。向 诸缓冲液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液 的pH值即为酪蛋白的等电点。
PPT学习交流
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二、蛋白质的沉淀反应
• 原理：
• 蛋白质是一类高分子化合物，分子大小已达胶体颗粒范 围（1~100毫微米）,因此蛋白质在水溶液中具有胶体 的性质。维持蛋白质胶体稳定的因素有两个：一是胶体 颗粒所带的电荷，一是与介质水形成的水化膜。这种稳 定性是有条件的、相对的，在一定物理化学因素影响下， 蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素， 从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。
PPT学习交流
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实验内容
• （一） 血清γ—球蛋白的分离纯化
• 1．硫酸铵盐析 ：注意应缓慢滴入饱和硫酸铵溶液 并边加边摇，避免局部浓度过高。
• 2．透析脱盐：用纳氏试剂检查水中NH4+，直至硫酸 铵全部透析完毕。
• 3．DEAE—纤维素柱层析：装柱、平衡柱床、上样、 洗脱收集。
• 4．检查洗脱液中蛋白质：磺基水杨酸检查，出现白
• 本法多用于测定糖原含量，也可用于测定葡萄糖含 量。
PPT学习交流
4
实验内容与结果
• 1、制作葡萄糖标准曲线 • 2、测定样品含糖量 • 计算100克小麦面粉中总糖含量
PPT学习交流
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实验二
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验要求
• 学习分配层析法的原理 • 掌握氨基酸纸上层析的操作技术（包括点样、平衡、
生物化学实验
任课教师：李遂焰
实验一
总糖的测定——蒽酮比色法
实验要求
• 掌握蒽酮比色定糖法的原理和方法 • 掌握72型分光光度计的原理和操作方法 • 学习通过制作标准曲线测定未知物含量的方法
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》PPT课件第一章：生物化学实验基本原理与技能1.1 生物化学实验的目的与意义解释生物化学实验在生物学和医学研究中的重要性强调实验对于理论知识的巩固和应用的作用1.2 生物化学实验的基本原则介绍实验设计的科学性和合理性强调实验操作的准确性和可重复性1.3 生物化学实验的基本技能介绍实验室安全操作规程演示实验室常用仪器的使用方法第二章：生物化学实验数据处理与分析2.1 实验数据的记录与处理讲解实验数据的记录方法和注意事项介绍数据处理的基本原则和方法2.2 实验数据的分析与解读讲解实验结果的统计分析方法强调数据分析在实验结果解释中的重要性第三章：生物化学实验操作技巧与实例3.1 生物化学实验操作技巧讲解实验操作中的注意事项和技巧强调实验操作的精确性和规范性3.2 生物化学实验实例解析介绍经典生物化学实验案例分析实验操作步骤和结果的关联性第四章：生物化学实验常用仪器与设备4.1 生物化学实验常用仪器介绍实验室常用仪器的作用和操作方法强调仪器使用中的注意事项和维护保养4.2 生物化学实验常用设备讲解实验室常用设备的结构与功能强调设备操作的安全性和正确性第五章：生物化学实验安全与环保5.1 生物化学实验安全知识讲解实验室安全的基本原则和措施强调实验操作中的安全意识和风险控制5.2 生物化学实验环保知识介绍实验室废物的分类和处理方法强调实验室环保的重要性和责任意识第六章：蛋白质实验6.1 蛋白质的提取与分离介绍蛋白质提取和分离的基本原理演示蛋白质提取和分离的实验步骤6.2 蛋白质的纯化与鉴定讲解蛋白质纯化方法和技术介绍蛋白质鉴定的方法和原理第七章：酶实验7.1 酶的提取与纯化讲解酶提取和纯化的方法和原理强调酶活性检测的重要性7.2 酶活性的测定与分析介绍酶活性测定的方法和原理讲解酶活性数据分析的方法和技巧第八章：碳水化合物实验8.1 碳水化合物的提取与分析介绍碳水化合物提取和分析的方法强调碳水化合物在生物体中的重要性8.2 碳水化合物的代谢实验讲解碳水化合物代谢的实验方法和原理介绍碳水化合物代谢产物的检测方法第九章：脂质实验9.1 脂质的提取与分析讲解脂质提取和分析的方法强调脂质在生物体中的功能和作用9.2 脂质代谢实验介绍脂质代谢的实验方法和原理讲解脂质代谢产物的检测方法第十章：核酸实验10.1 核酸的提取与纯化介绍核酸提取和纯化的方法和原理强调核酸在生物体中的重要性10.2 核酸的检测与分析讲解核酸检测和分析的方法和原理介绍核酸序列测定和分析的方法重点和难点解析1. 生物化学实验基本原理与技能：理解实验设计的原则和实验操作的准确性是进行生物化学实验的基础。
动物医学-动物生物化学实验《动物DNA提取》课件
氯仿 ➢ 强蛋白质变性剂，使液相与有机相分开 ➢ 抑制DNA酶的活性
异戊醇 ➢ 消除抽提过程中出现的泡沫
95%乙醇 ➢ 沉淀DNA
5
三、实验步骤
取材
取出冻肝,待溶化后,称取3g,剪成碎块.
匀浆
➢ 加入5 mL 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液充分匀 浆;
3
主要试剂及其作用
EDTA ➢ 螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子 ➢ DNase作用时需要一定的金属离子作辅基 ➢ 抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用
SDS ➢ 抑制核糖核酸酶的作用 ➢ 溶解细胞膜上的脂质与蛋白，溶解膜蛋白而破坏细胞膜 ➢ 与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白 质变性而沉淀下来
➢ 再快速加入1mL 25% SDS,轻轻混匀10min； ➢ 加入3mL 5mol/L NaCl溶液(终浓度为1.07mol/L),继续轻轻混匀10min; ➢ 加入(14mL)一倍体积的氯仿-异戊醇混合液.于带磨口塞的锥形瓶中震摆
10min; ➢ 分别引流入三支小试管，3000rpm离心20min,分为三层:
8
上层-----水相 中间层---蛋白质 下层-----有机相
➢ 小心用皮头滴管吸取上层水相于小烧杯中,加入 2 倍体积的95%的乙醇,静 置；将DNA丝状物缠绕在玻棒上.
7
四、思考题
① 用95%酒精提抽DNA时为什么要轻轻搅动; ② 结合本人操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子
DNA的降解.
实验六 动物肝脏DNA的提取 动物医学院动物生化教研室
一、实验目的
① 了解从动物组织中提取DNA的一般原理； ② 掌握DNA提取的方法和步骤。
第二章--生物化学检验基本知识PPT课件
2024/10/16
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二、生物化学检验报告单的发放
即使是临床医护人员能够通过“医院信息系统（HIS）”在医生 工作站直接读取检验结果的临床科室或医疗单位，实验室也 应该用电话向临床报告，这是考虑到临床一线医护人员可能 会忙于抢救而不能及时观察到检测结果需要提醒的缘故。
“危急值”报告不同于“急诊检验”报告，是两个完全不同
4．技术要求高的检测项目 检测系统本身的不稳定因素，影响检验结果可靠性的检
验项目，或者检测系统本身存在着影响检验质量的诸多人
为环节，对检验人员的理论和技能要求较高的检验项目。
（三）急诊生化检验
急诊检验是实验室为了配合临床对危、急、重症患者的诊 断和抢救而实施的一种特需检验。如血气分析、电解质、 淀粉酶、心肌标志物、血糖等。
2．标本难以获得的检测项目
某些检验项目的标本获得比较困难，或者因为标本数 量极少，对标本的处理和保存都不能按规定要求和程序 进行，甚至不能进行复检的检验项目。
2024/10/16
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一、生物化学检验的项目
3．发病率低或成本高的检测项目 由于某疾病的发病率很低造成标本数量过少或检验成 本过高的检验项目。
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第二节 生物化学检验的标本
一、标本的采集
生物化学检验最常用的标本是血液，其次是尿液，此外还有 脑脊液、浆膜腔积液、羊水等各种体液。 正确采集标本是获得准确、可靠检验结果的关键。
标本采集时应尽可能避免一切干扰因素，选择最佳的采集时 间，减少饮食和药物影响，减少昼夜节律带来的干扰。对于 有创伤性的操作，操作前应先与患者沟通建立互信，消除患 者的恐惧和紧张情绪。
剂及抗凝原理；尿液标本的采集方法；标本收检、分离、储存和转运；生物 化学检验项目类型；危急值、危急值报告的概念；检验报告单的发放方式。
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实验一二硝基水杨酸比色法测定总糖含量（4学时）一、实验目的（1）掌握二硝基水杨酸比色法测定总糖的原理。
（2）学习分光光度计的使用方法。
（3）掌握比色定糖法操作技术。
二、实验原理在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。
总糖可在强酸条件下水解，得到还原糖，从而间接求出样品中总糖的含量。
三、实验仪器（1）刻度试管：25 mL；（2）烧杯：100 mL；（3）三角瓶：100 mL；（4）容量瓶：100 mL；（5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL；（6）恒温水浴；（7）沸水浴；（8）离心机（过滤法不用此设备），离心管或玻璃漏斗，电子天平，分光光度计。
四、实验试剂（1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3，5-二硝基水杨酸试剂：将6.3 g 3，5-二硝基水杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，用蒸馏水溶解至100mL。
（4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞溶于70%乙醇至250 mL。
（5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。
（6）小麦淀粉，食用面粉。
五、实验操作1．制作葡萄糖标准曲线取7支刻度试管，按下表操作。
管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-二硝基水杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃水浴中加热5 min，取出冷却至27~30 ℃后以蒸馏水定容至25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调至540 nm 波长，用零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。
2．还原糖及总糖的待测液的制备（1）还原糖待测液的制备：取3.0 g 小麦淀粉，置于100 mL 三角瓶内，缓缓加入50 mL 蒸馏水，边注水边搅拌，直至均匀溶解，将溶液置于于50 ℃恒温水浴加热20 min ，离心机过滤5 min ，用20 mL 蒸馏水清洗残液，再用离心机过滤，然后将2次上清液集中于100 mL 容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1.0 g 食用面粉，放在100 mL 的三角瓶中，加入10 mL 6 mol/L HCl 及15 mL 蒸馏水，置于沸水浴中加热水解30 min ，取1~2滴水解液于白瓷板上，加1 滴碘-碘化钾溶液，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显蓝色。
待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH 中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤液全部收集在100 mL 的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，混匀。
精确取10mL 定容过的水解液，移入另一个100mL 的容量瓶，以水稀释定容，作为总糖待测液。
（3）显色和比色，取4支25 mL 刻度试管，编号，按下表所示的量操作。
管号还原糖测定管号 总糖测定管号 ① ② Ⅰ Ⅱ 还原糖待测液/mL 2 2 0 0 总糖待测液/mL 0 0 1 1 蒸馏水/mL0 0 1 1 3,5-二硝基水杨酸/mL1.51.51.51.5将各管内液体混匀，在沸水浴中加热5 min ，取出冷却至36 ℃，蒸馏水定容至25 mL 。
将分光光度计调至540 nm 波长，以葡萄糖零号管调零，在分虽读取①、②、Ⅰ、Ⅱ4个管的吸光度。
3．还原糖及总糖的测定以管①、②的吸光度平均值和管Ⅰ、Ⅱ的吸光度平均值，分别是在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的含量。
(mg)ω()/%=100(mg)´´提取液总体积查曲线所得还原糖质量测定时取用体积还原糖样品质量(mg)ω()/%=0.9100(mg)´创查曲线所得还原糖质量稀释倍数总糖样品质量六、结果处理（1）标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
（2）用其他含糖材料，以试验材料比较其含糖量的差异。
（3）小麦淀粉中含有何种糖？在提取总糖时，其他杂质是否会影响到测定？实验一 二硝基水杨酸比色法测定总糖含量 1、实验操作第一步省略，见板书2、还原糖待测液的制备选用漏斗，不用离心机 显色和比色时，加一个空白，见板书实验二酶的生化基础实验（3学时）一、实验目的（1）加深对酶的性质的认识。
（2）了解酶特性的实验原理。
（3）掌握温度对酶活力的影响，pH对酶活性的影响，唾液酶活化和抑制的三个实验。
（4）了解酶催化的高效性，特异性，进一步掌握酶的代谢反应及其调控机理。
二、实验原理酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异（专一）性，即一种酶只能对一种或一类化合物起催化作用，例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都催化糖苷的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖，还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或者激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素对酶活性的影响。
1．温度对酶活力的影响酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。
大多数动物酶的最适温度为37~40℃，植物酶的最适温度为50~60 ℃。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。
有些酶的干燥制剂，即使加热到100 ℃，其活性并无明显改变，但在100 ℃的溶液中却很快地完全失去活性。
低温能降低或抑制酶的活性，但不能推动酶活性。
2．pH对酶活性的影响酶的活性受环境pH的影响极为显著，不同酶的最适应的pH不同，本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。
3．唾液酶的活性和抑制酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
三、实验仪器（1）分光光度计（722型或最新型），恒温水浴；（2）锥形瓶：50 mL；（3）量筒：100 mL；（4）漏斗：φ4 cm；（5）温度计：0~100 ℃；（6）滴管；（7）吸量管：0.2 mL，0.5 mL，1 mL，2 mL，5 mL；（8）试管：1.5 cm×1.5 cm。
四、实验试剂（1）Fe粉；（2）ω(淀粉)=1%的溶液，用ω(NaCl)=0.3%的溶液配制；（3）ω(淀粉)=0.5%的溶液，用ω(NaCl)=0.3%的溶液配制；（4）唾液淀粉酶溶液：先用蒸馏水漱口，再含10 mL左右蒸馏水轻轻漱动，数分钟后吐出，收集在烧杯中，过滤，得到清澈的唾液淀粉酶原液，稀释100~200倍，混匀备用；（5）碘化钾-碘溶液：将碘化钾20 g及碘10 g溶于100 mL水中，使用前稀释10倍；（6）浓度为0.1 mol/L柠檬酸溶液；（7）浓度为0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液；（8）pH试纸（pH=4.9~8）；（9）ω(氯化钠)=1%的溶液；（10）ω(CuSO4·5H2O)=1%的溶液；（11）ω(硫酸钠)=1%的溶液；（12）本乃狄（Benedict）试剂：17.3 g CuSO4·5H2O加100 mL蒸馏水加热溶解，冷却，173 g柠檬酸钠和100 g Na2CO3·2H2O，以600 mL蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000 mL，过滤除去深沉；（13）ω(蔗糖)=2%的溶液：用分析纯蔗糖新配制；（14）磷酸缓冲液：A液（0.2mol/L Na2HPO4）：称取28.40 g Na2HPO4溶于1000 mL 蒸馏水中；B液（0.1 mol/L 柠檬酸）：称取21.01 g柠檬酸溶于1000 mL蒸馏水中；（15）实验材料：马铃薯；（16）ω(H2O2)=2%。
五、实验操作1．酶催化的高效性酶催化的高效性实验：取4支试管，按下表操作。
操作项目管号1 2 3 4ω(H2O2)=2% /mL 3 3 3 3生马铃薯小块/块 2 0 0 0熟马铃薯小块/块0 2 0 0 铁粉0 0 小匙0现象解释实验现象2. 酶催化的专一性蔗糖酶溶液的制取：取1 g干酵母，放入研钵中，加少量石英砂和水研磨，加蒸馏水50 mL，静置片刻，过滤即得。
酶催化的专一性实验：取6支干净试管，按下表操作。
操作项目管号1 2 3 4 5 6ω(淀粉)=1% /mL 1 1 0 0 1 0 ω(蔗糖)=2%/mL 0 0 1 1 0 1唾液淀粉酶原液/mL 1 0 1 0 0 0 蔗糖酶溶液/mL 0 1 0 1 0 0 蒸馏水0 0 0 0 1 1酶促水解摇匀，37 ℃水浴中保温10 min 本乃狄试剂/mL 2 2 2 2 2 2 反应摇匀，沸水浴中保温5~10 min现象解释实验现象3．温度对酶活力的影响淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。
最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈的颜色来判断。
（1）温度对酶活力的影响1取3支试管，按下表操作。
操作项目管号1 2 3唾液淀粉酶溶液/mL 1 1 1pH=7.0磷酸缓冲液/mL 2 2 2在一定温度下预处理5min 0 ℃37 ℃70 ℃ω(淀粉）=1%的溶液/mL 2 2 2摇匀，保持各自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2 min，各加1滴碘液，混匀，观察并记录各管反应现象。
（2）温度对酶活力的影响2取3支试管，编号后按下表加入试剂。
管号 1 2 3 淀粉溶液/mL 1.5 1.5 1.5稀释唾液/mL 1 1 －煮沸过的稀释唾液/mL －－ 1摇匀后，将1号和3号两个试管放入37 ℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中，10 min 后取出，将2号试管内液体分为两半，用碘-碘化钾液来检验1、2、3号试管淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，记录并解释结果。