食用菌生产技术 2灭菌和消毒

常用的 消毒剂
氧化剂
重金属 盐类
有机化 酸碱 合物 类物质
高锰 酸钾
过氧 化氢
氯
过氧 乙酸
酚类
醇类
甲醛
表面活 性剂
酸碱类物质
原理在于极端酸碱条件可使蛋白质变性 实例： 石灰以1：4或1：8配成糊状，消毒排泄物及 地面 醋酸加热蒸发可以进行空气消毒 苯甲酸、山梨酸和丙酸则是食品防腐剂
原理： 细胞蛋白质结合而使之变性 进入细胞后与酶上的—SH相结合而使酶失去活性 与细胞的主要代谢物发生螯合作用，或者取代细胞结构上的 主要元素，使正常的代谢物变成无效的化合物，从而抑制微 生物的生长或导致死亡
紫外线杀菌特性
使用范围：物体表面消毒和空气、 使用范围：物体表面消毒和空气、水的消 广泛应用于微生物化验室、医院、 毒。广泛应用于微生物化验室、医院、公 共场所的空气消毒 使用剂量： 使用剂量：1W/m3 注意事项：1.防止紫外线对人体的直接照 注意事项：1.防止紫外线对人体的直接照 射，以免损伤皮肤和眼结膜 提前30分钟开灯照射。 30分钟开灯照射 2. 提前30分钟开灯照射。
紫外线穿透力较弱
应用范围： 应用范围： 室内空气和不耐热物品的表面消毒 影响因素： 影响因素： 紫外线的波长、距离、照射时间； 紫外线的波长、距离、照射时间；
微生物的种类（ 微生物的种类（G-、G+、芽孢、 G+、芽孢、 病毒） 数量、 病毒）、数量、环境温度和湿度等
微波杀菌
微波是指频率在300MHz到300 000Mhz的电磁波 杀菌原理：微波的杀菌作用主要是微波的热效应造 成的。微生物在微波电磁场的作用下，吸收微波的 能量产生热效应，同时，微波造成分子加速运动使 细胞内部受到损害，从而导致微生物死亡 特点：加热均匀、热能利用率高、渗透能力强、加 热时间短 应用范围：进行培养基灭菌、酒精消毒
常规高压灭菌法
也称高压蒸汽灭菌法 本法是目前应用最广、 最有效的灭菌方法。 加压灭菌法适用于一 切微生物学实验室、 医疗保健机构或发酵 工厂中对培养基及多 种器材、物料的灭菌
高压蒸汽灭菌器的用法注意事项
在灭菌器内加入适量的水，约至金属标志处。 1 在灭菌器内加入适量的水，约至金属标志处。 将灭菌物品包扎好，小心放于隔板上。 2 将灭菌物品包扎好，小心放于隔板上。 将盖盖好，扭紧螺旋，关闭气阀。 3 将盖盖好，扭紧螺旋，关闭气阀。 接通电源，进行加热。 4 接通电源，进行加热。 排冷气：压强指针升至(0.02 (0.02MPa时 5 排冷气：压强指针升至(0.02-0.05) ×MPa时，打 开排气阀，排出器内所留冷空气， 开排气阀，排出器内所留冷空气，直至排完 压强升至所需压强时(0.1 (0.16 压强升至所需压强时(0.1-0.15) ×MPa ，开始计 达到规定时间后关掉电源。 时，达到规定时间后关掉电源。 待灭菌器中压力自行降至零时， 7 待灭菌器中压力自行降至零时，方可开盖取出被 灭菌物品，气未排完前切不可开盖。 灭菌物品，气未排完前切不可开盖。 对灭菌器进行必要的清洗。 8 对灭菌器进行必要的清洗。
巴氏消毒法
巴氏消毒法是一种中温消毒法， 巴氏消毒法是一种中温消毒法，具体的 处理温度和时间各不相同，一般在加水 处理温度和时间各不相同， 拌料后，建堆使料堆升温， 拌料后，建堆使料堆升温，达60~70℃ 下处理培养料。 下处理培养料。具体的方法可分两类 第一类是短时发酵， 60~70℃发酵 发酵5 第一类是短时发酵，在60~70℃发酵5-7 天，如普通发酵 另一类是长时发酵， 60~70℃发酵40发酵40 另一类是长时发酵，在60~70℃发酵4060天如双孢菇的粪草料发酵 天如双孢菇的粪草料发酵。 60天如双孢菇的粪草料发酵。
消毒 化学物 消毒
消毒剂
防腐剂 剂
理想的消毒剂应具有的特征
杀灭各种类型的微生 物。 作用迅速。 作用迅速。 不损伤机体组织或不 具毒性作用。 具毒性作用。 其杀菌作用不受有机 体的影响。 体的影响。 能透过被消毒的物体。 能透过被消毒的物体。 易溶于水， 易溶于水，与水形成 稳定的水溶液或乳化 液。 当接触热、 当接触热、光或不利 的天气条件时不易分 解。 不损害被消毒的材料。 不损害被消毒的材料。 价格低廉，运输方便。 价格低廉，运输方便。
动物微生物课程组
灼烧法
直接在火焰灼烧灭菌。 直接在火焰灼烧灭菌。 特点： 特点： 最简单、 最简单、最彻底的加 热灭菌方法， 热灭菌方法， 对被灭菌物品破坏极 大 应用范围： 应用范围： 接种工具 金属小工具 试管口的灭菌
烘烤灭菌
在电热干燥箱内（见图）利用热空气灭菌。 在电热干燥箱内（见图）利用热空气灭菌。一般箱内空气升 温到150~170℃ 维持1~2h 150~170℃， 温到150~170℃，维持1~2h 注意：电热干燥箱内温度不要超过180℃ 180℃， 注意：电热干燥箱内温度不要超过180℃，以防棉塞和包装 纸等烤焦而燃烧 应用范围：玻璃器皿、 应用范围：玻璃器皿、陶瓷制品等
第二节 灭菌和消毒
几个基本概念 常用的灭菌方法 常用的消毒方法 影响灭菌和消毒的因素
彻底杀灭一切 微生物
控制有害微 生物的措施
部分杀死 （仅杀灭病 原微生物）
杀灭法 灭菌 杀菌 溶菌 消毒
抑制霉腐 微生物
抑制法 防腐 化疗
抑制宿主体 内的病原微 生物
几个基本概念
灭菌 指采用某种强烈的理化因素杀死物体中所有微生物的措施， 指采用某种强烈的理化因素杀死物体中所有微生物的措施， 包括病原微生物和非病原微生物。 包括病原微生物和非病原微生物。灭菌后的物体不再有可存活 的微生物。 的微生物。 消毒 是指利用某种方法杀死物质中所有病原微生物的一种措施。 是指利用某种方法杀死物质中所有病原微生物的一种措施。
波长210 328nm的紫外线具有杀菌作用 波长 紫外线： 紫外线： 210～328nm的紫外线具有杀菌作用 265nm者杀菌力最强 者杀菌力最强。 136-400nm 265nm者杀菌力最强。 136-
杀菌机理： 干扰DNA的复制与转录 杀菌机理： 干扰DNA DNA的复制与转录 特点： 特点：
过滤除菌
原理：利用过滤介质除去菌体 种类： 以棉花、玻璃纤维或石棉为过滤介质 膜滤器 ：微孔滤膜（由醋酸纤维素或硝酸 纤维素制成的比较坚韧的具有微孔 （25~0.025nm）的膜）为过滤介质 微孔滤膜特点： 孔径小 价格低 可高压灭菌
不易阻塞、滤速快、 不易阻塞、滤速快、可处理大容量的液体 但当滤膜孔径小于0.22nm时易引起孔阻塞， 0.22nm时易引起孔阻塞 但当滤膜孔径小于0.22nm时易引起孔阻塞，且过 滤除菌无法滤除病毒、噬菌体和支原体。 滤除菌无法滤除病毒、噬菌体和支原体。 核孔滤器：由核辐射出来的很薄的聚碳酸胶片， 核孔滤器：由核辐射出来的很薄的聚碳酸胶片， 再经化学蚀刻而制成的过滤介质 应用：1.液体过滤 应用：1.液体过滤 用于对热敏感液体的除菌， 用于对热敏感液体的除菌，如含有酶或维生素的 溶液、血清等。 溶液、血清等。 2.气体过滤 如超净工作台） 气体过滤（ 2.气体过滤（如超净工作台）采用过滤方法获得 无菌空气
防腐 是在某些化学物质或物理因子作用下， 是在某些化学物质或物理因子作用下，能防止或抑制微生物 生长繁殖但又未死亡的一种措施，这是一种抑菌作用。 生长繁殖但又未死亡的一种措施，这是一种抑菌作用。
灭菌、消毒、防腐的比较
比较项目 处理因素 处理对象 微生物类 型 对微生物 作用 实例 灭菌 强理、化因素 消毒 理、化因素 防腐 理、化因素 任何物体内外 生物体表、酒、 有机质物体内 乳等 外 一切微生物 有关病原菌 一切微生物 彻底杀灭 高压、常压 蒸汽灭菌； 辐射灭菌 杀死或抑制 抑制或杀死
法
湿热灭菌法
A. 煮沸消毒法 B. 常压流通蒸汽消毒法 C. 间歇灭菌法 D. 高压蒸汽灭菌法 E. 巴氏消毒法
动物微生物课程组
干热灭菌(dry 1 干热灭菌(dry heat sterilization )
焚烧灭菌法：常用于废弃物、病畜尸体等处理。 焚烧灭菌法：常用于废弃物、病畜尸体等处理。 烧灼灭菌法：是直接火焰灭菌，如接种环、 烧灼灭菌法：是直接火焰灭菌，如接种环、试管
70%酒精消毒， 冷藏、干燥、 巴氏消毒法 糖渍、盐腌、 化学防腐剂
灭菌方法 加热灭菌 干热灭菌法 辐射灭菌 过滤除菌 干燥
湿热灭菌法 巴氏消毒法 煮沸消毒法 间歇灭菌法 常规加压灭菌法 连续加压灭菌法
灼烧法 干烤灭菌
加热（高温）灭菌
原理：微生物细胞的蛋白质、核酸等 大分子物质对高温非常敏感当环境温 度超过微生物的最高生长温度，将会 引起微生物死亡 应用范围：最广的一类灭菌或消毒的方
膜滤器 结构
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干燥
水是微生物细胞的重要成分，占生活细胞 的90%以上，它参与细胞内的各种生理活 动，因此说没有水就没有生命。降低物质 的含水量直至干燥，就可以抑制微生物的 生长，防止食品、衣物等物质的腐败与霉 变。因此干燥是保存各种物质的重要手段 之一
许多化学药剂能抑制或杀死微生物
灭菌剂 严 格 的 界 限 没 有 ， 间 者 之 三 剂 剂
重金属盐类
举例：
升汞（HgCl2），1 500~1：2000的升汞溶 升汞（HgCl2），1：500~1：2000的升汞溶 ）， 液对大多数细菌有杀灭作用，浓度为0.1% 液对大多数细菌有杀灭作用，浓度为0.1% 的升汞常用于人手和器皿的消毒 红汞：于皮肤、黏膜及小创伤的消毒。 红汞：于皮肤、黏膜及小创伤的消毒。 硫酸铜：对真菌和藻类效果较好， 硫酸铜：对真菌和藻类效果较好，常用于 游泳池的消毒 硫酸铜与石灰水以适当比例配制成波尔多 液，用于苹果、葡萄等果树的喷施，杀灭 用于苹果、葡萄等果树的喷施， 真菌、螨以及防治植物病害， 真菌、螨以及防治植物病害，
辐射灭菌
概念： 概念：是利用电磁 辐射产生的电磁波 杀死大多数物质上 的微生物的一种有 效方法 用于灭菌的电磁波 红外线， 红外线，效果差 可见光， 可见光，效果差 射线， X射线，电离杀菌 射线， γ射线，电离杀菌 微波， 微波，较常用 紫外线， 紫外线，最常用
紫外线杀菌
原理：当微生物被照射时，细胞的DNA吸收能量， 原理：当微生物被照射时，细胞的DNA吸收能量， DNA吸收能量 形成胸腺嘧啶二聚体， 形成胸腺嘧啶二聚体，此时腺嘌呤无法正确配 从而干扰DNA的复制和蛋白质的合成， DNA的复制和蛋白质的合成 对，从而干扰DNA的复制和蛋白质的合成，造成 微生物的死亡 杀菌波长257nm 257nm左右 杀菌波长257nm左右 杀菌特点：穿透力很弱，易被固形物吸收， 杀菌特点：穿透力很弱，易被固形物吸收，不 能透过普通玻璃和纸张。 能透过普通玻璃和纸张。
口等的灭菌。 口等的灭菌。
烘烤灭菌法：利用干燥烘箱以热空气进行灭菌的 烘烤灭菌法：
一种方法。适用于高温下不变质、 一种方法。适用于高温下不变质、不损坏等物品的 灭菌，如玻璃器皿、金属制品等。 灭菌，如玻璃器皿、金属制品等。由于热空气穿透 力较低，因此需加热到160℃维持1-2小时才能达到 力较低，因此需加热到160℃维持1 160℃维持 灭菌目的。 灭菌目的。
氧化剂
原理 作用于 蛋白质 的巯基 使蛋白 质和酶 失活， 强氧化 剂还可 破坏蛋 白质的 氨基和 酚羟基 种类 高锰 酸钾 特 点 在酸性溶液中作用增强； 有机物的存在会还原二氧 化锰；用于已经清洗的物 体表面消毒；浓度过高对 皮肤有刺激性。 分解成水和氧 缺点是容易因分解而失效 漂白粉 缺点是碱性太大 使用范围 0.1%高锰酸钾溶液常用于皮肤、口 腔和水果蔬菜消毒；2%~5%的溶液 能杀死芽孢
常见有卧式高压蒸汽灭菌锅和手提式高压 蒸汽灭菌锅 母种培养基灭菌：压力 母种培养基灭菌：压力0.1-0.15MPa，维持 ， 20min 原种、栽培种培养基灭菌： 原种、栽培种培养基灭菌： 压力0.1-0.15MPa，维持 压力 ，维持1.5-2h
常压灭菌法
此法用于大规模生产的培养基灭 菌 让培养基( 让培养基(料）在常压灭菌锅或灶 连续不断地进行加热、维持， 中连续不断地进行加热、维持， 培养基一般加热至100℃维持8 100℃维持 培养基一般加热至100℃维持8～ 16h。 16h。