抗核抗体谱免疫印迹法

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不一致。 SSA和抗SSB抗体阳性可造成新生儿狼疮及婴儿心脏传导阻
滞等先天性心脏病。 抗SSA和抗SSB抗体常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、
光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关。
抗SS-A抗体 and 抗SS-B抗体
SS-A (Ro-60), Ro-52 and SS-B
功能: 调控RNA翻译
白伊娜,王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关 自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫 学杂志.2011(5):452-455.
抗PCNA抗体
抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)
抗核糖体P蛋白抗体为SLE的高特异性指标,阳性率在10-40%。 SLE患者伴有狼疮性脑病时,此抗体阳性率可达56-90%。SLE
SSc的标记抗体,阳性率20-30%。 多见于DSSc(弥漫型系统性硬化症),
病情进展快,提示预后不良。 与ILD (肺动脉高压) 、弥漫性皮肤
硬化有关,而PAH(间质性肺病)少见。
抗PM-Scl抗体
常见于多肌炎与硬化症的重叠症状中,在重叠症状中的阳 性率为50%;也可以仅出现于多肌炎患者中,阳性率为8%, 弥散性硬化症中的阳性率为2%-5%。
Sm含有u1、u2和u4-u6, 而nRNP(u1RNP)仅含 u1RNA。也即抗Sm抗 体阳性均伴有抗u1RNP 抗体,而抗u1RNP抗体 可以单独存在。
抗U1-nRNP与Sm抗体
抗Sm:SLE的标记性抗体,是前瞻性及回顾性诊断的指标。 阳性率低: SLE (30%)
抗U1RNP:多种CTD均可出现,与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相 关,但肾炎发生率低。 阳性率:40 - 60%,其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%)
抗原
阳性率
SS-A(Ro)
40-95%
SS-B(La)
40-95%
单链DNA(ss-DNA)
13%
RANA
70%
唾液腺分泌管
40-60%
类风湿因子
60-80%
多发性肌炎(PM)及皮肌炎(DM)
皮肤与肌肉受累的自身免疫疾病
症状: - 肌肉疼痛/肌无力 (如:肩膀/
骨盆)
皮肤症状:
- 膝盖/手指关节处皮肤异变 - 红斑 - 皮肤褪色
患者出现核糖体P蛋白抗体与中枢神经系统、肝脏或肾脏受累 有关。在抗核抗体阴性的SLE患者,抗核糖体抗体阳性有重要 诊断价值。
抗ds-DNA抗体
SLE 的血清特异性抗体。 多有致病性(IgG型),与亲和力(高)有关。 与LN与SLE疾病活动性相关,活动期达90%。可用于SLE
疾病活动期判断&药物疗效观察。 与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关。
IgG抗体将与相应的抗原结合。为检测已结合的抗体,在加入酶标羊抗人IgG(碱性 磷酸酶结合物) 第二次孵育,然后加入底物液以产生蓝紫色颜色反应。
抗核抗体谱的免疫印迹法原理
抗U1-nRNP与Sm抗体
靶抗原:位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的 核糖核蛋白, Sm和U1RNP是同一分子复合物 中的不同位点。
10% 5% 50% 40-50% 4% 3%
进行性系统性硬化症(SSc)
血管与结缔组织受累的自身免疫疾病 症状:
- 指端硬化 (thin, sclerotic fingers) - 爪型手 - 面具脸 (嘴周边出现皱纹, 嘴唇变薄) - 毛细血管扩张 (表面血管永久性扩张) - 表皮钙质沉着 (血管壁与皮肤钙化)
SS-A and SS-B 慢性炎症性结缔组织病
(CICTD)
多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)
Myositis Profile
夏普综合征(MCTD) nRNP
ANCA相关性血管炎
系统性红斑狼疮(SLE)
统性红斑狼疮(SLE) 是一种多发于青年女性的 累及多脏器的自身免疫性 炎症性结缔组织病,早期、 轻型和不典型的病例日渐 增多。有些重症患者(除 患者有弥漫性增生性肾小 球肾炎者外),有时亦可 自行缓解。有些患者呈 “一过性”发作,经过数 月的短暂病程后疾病可完 全消失。
高滴度抗U1RNP+ 抗Sm- MCTD
抗U1RNP+ 抗Sm+ SLE
抗U1RNP-
抗Sm+ 实验室误差? U1RNP丢失 ?
抗SS-A/Ro-52抗体 RNA + SS-A (60 kDa) + Ro-52
hY-RNA
RNA + SS-A (60 kDa)
hY-RNA
Boire et al., 1995: - Ro-52抗体不与SS-A 抗原结合 - 纯化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52
抗核小体抗体(ANuA)
核小体是真核细胞染色质的基本 复制单位,含组蛋白二聚体 H2A-H2B和H3-H4,其外面为 146个碱基对组成的双链DNA。
参与SLE发病机制:多克隆B细 胞活化剂产生ANuA,先于其他 ANA促进抗dsDNA与AHA形成 参与LN的发生。
抗核小体抗体(ANuA)
核小体抗体是SLE的诊断标记,其诊断灵敏度为70-90%。 在SLE的活性期,此抗体的检出率几乎为100%,在非活动期 的SLE中为62%(相应的dsDNA抗体检出率仅为3.3%)。
整个细胞,包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期 蛋白等。
自身免疫性疾病与ANAs的相关性
第二章
2 自身免疫性疾病与ANAs的相关 性 单击添加文本 … …
慢性炎症性结缔组织病
慢性炎症性结缔组织病 (CICTD)
干燥综合征 (SS)
系统性红斑狼疮 (SLE) dsDNA
系统性硬化症 (SSc) Scl -70 and CenpB
指端硬化,爪型手
面具脸
毛细血管扩张
皮肤钙质沉着
ANAs与进行性系统性硬化症(SSc)的相关性
弥漫性进行性系统性硬化症(DSSC)
抗原
阳性率
原纤维蛋白
5-10%
PM-Scl(PM-1)
50-70%
Scl-70
25-75%
RNA多聚酶Ⅰ
4%
7-2-RNP(To)
罕见
NOR-90(核仁形成区)
罕见
局限性进行性系统性硬化症(LSSC)
面具脸
毛细血管扩张
皮肤钙质沉着
抗CENP-B抗体
主要靶抗原:着丝点蛋白-B 多见于LSSc,病程缓慢,提示预后较好。 CREST综合征:软组织钙化(C),雷诺现象(R),食道功
能障碍(E),指端硬化(S),毛细血管扩张(T),但并非 标记抗体,也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等。 国外文献:与PAH相关,而ILD少见 中国人群:未发现与PAH(肺动脉高压)相关,但ILD(间 质性肺疾病)少见
抗Jo-1抗体
靶抗原:组氨酸tRNA合成酶 胞浆中的磷酸蛋白
抗Jo-1抗体
PM/DM的标记抗体,阳性率20-30% 抗体效价与疾病活动性相关 抗Jo-1抗体综合征:急性发热,对称性关节炎,技工手,雷
诺现象,肌炎(相对轻) ,肺间质病变 其他抗合成酶抗体:抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ
传统定义:
针对细胞核成分的自身抗体的总称。
根据细胞核内靶抗原分子理化特性和分布部位分类:
➢多核苷酸:dsDNA,ssDNA ,RNA ➢组蛋白:H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B复合体 ➢核浆中的核糖核蛋白(ENA):Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La ➢核仁抗原:U3-nRNP/Fibrillaria,PM-Scl/PM-1,7-2-RNP/To,
类风湿关节炎中的抗核抗体
抗原
阳性率
组蛋白
15-50%
单链DNA(ssDNA)
8%
U1-nRNP
3%
RANA
90-95%
干燥综合征(SS)
外分泌腺受累的自身免疫疾病
症状: - 口腔干燥 - 唾液及眼泪减少 - 腮腺肿胀 - 胰腺外分泌腺分泌不足
口腔干燥
腮腺肿胀
ANAs与干燥综合征(SS)的相关性
原发性干燥综合征中的自身抗体
抗SS-A/Ro-52抗体 抗SS-A (60 kDa)和抗Ro-52 总是分开检测!
WHY?
抗SS-A/Ro-52抗体
- 天然 SS-A = RNA + SS-A 60 kDa 蛋白质 – 无需 Ro-52。 - Ro-52 并非 SLE 或 SS 患者诊断所需抗体。 - SS-A 60和 Ro-52抗原的混合包被会降低SSA抗体的疾病特异性。 - 欧蒙产品始终分别检测 SS-A 60 和Ro-52。
功能:RNA聚合酶III辅助蛋白
抗SS-A (60 kDa)抗体
干燥综合症: 40-95%
SLE:
20-60%
新生儿狼疮: 96%
X
抗Ro-52 (52 kDa)抗体 非特异
抗SS-B抗体 干燥综合症: 40-95%
SLE:
10-20%
新生儿狼疮: 78%
抗Scl-70抗体
靶抗原:DNA拓朴异构酶I的降解产物 主要存在核仁中。
核小体抗体对SLE的诊断灵敏度高于dsDNA抗体,抗核 小体抗体甚至可在dsDNA抗体阴性的病人中检测到。它们是 SLE恶化的早期标记,因为它们比dsDNA抗体更早出现。
抗组蛋白抗体
可出现于多种结缔组织病,不具有诊断特异性。 SLE :50%活动期SLE 可达90.2%与LN(狼疮
性肾炎)相关,与SLE疾病活动性存在一定意义 的相关性。 药物性狼疮(DIL):>90%如:异烟肼、苯妥因 钠、青霉胺、雌激素等,仅有AHA而无其他ANA, 强烈支持DIL。 其他结缔组织病:23-30% 如:RA、PBC、SSc等
系统性红斑狼疮(SLE)
SLE在临床上各器官受累的表现
神经系统受累 (30%) 皮肤 (蝴蝶状皮疹, 盘状狼疮; 74%)
浆膜炎 (胸膜炎, 心包炎; 77%)
狼疮肾炎 (51%) 血液系统受累 (贫血等; 60%)
关节炎 (至少2个关节以上 受累;96%)
ANAs与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性
4-6-S-RNA ➢着丝点:着丝点蛋白 ➢其他蛋白:Scl-70 , PCNA,核点 , Mi-1, Mi-2, Ku,板层素,
NOR-90
抗核抗体谱的定义
广义定义:
指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解 已不再局限于核成分,而是指抗核酸(nucleic acid)和核 蛋白(nucleoprotein)抗体的总称。
50%
心磷脂
40-60%
类风湿关节炎(RA)
类风湿关节炎(RA) 是一种病因未明的慢性、 以炎性滑膜炎为主的系 统性疾病。
其特征是手、足小关 节的多关节、对称性、 侵袭性关节炎症,经常 伴有关节外器官受累及 血清类风湿因子阳性, 可以导致关节畸形及功 能丧失。
ANAs与类风湿关节炎(RA)的相关性
ANAs与多发性肌炎(PM)及皮肌炎(DM)的相关性
多肌炎和皮肌炎 抗原 PM-Scl(PM-1) Jo-1(组氨酰-tRNA合成酶) Mi-1 Mi-2 Ku 单链AND(ss-DNA) PL-7(苏氨酰-tRNA合成酶) PL-12(丙氨酰-tRNA合成 酶)
阳性率 50-70% 25-35%
抗原
阳性率
着丝点
80-95%
抗核抗体谱的检测及意义
第三章 3 抗核抗体谱的检测及意义
1. 抗核抗体谱的免疫印迹法原理 2. 抗核抗体谱的临床意义
抗核抗体谱的免疫印迹法原理
抗核抗体谱的检测采用免疫印迹法(Immunoblotting Test,IBT),用于定性检测人血清 中抗核抗体谱共15中抗体。 条膜上平行包被了经纯化的抗核抗体谱中要检测的抗原及质控带。 第一次孵育时,已稀释的病人样本与膜条上的抗原反应。如果样本阳性,特异性的
抗SS-A/Ro-52抗体 抗Ro-52抗体:不同组别中均可出现
抗SS-B抗体
在原发性SS病人中,抗SSA/Ro和抗SSB/La阳性率分别为 60%和40%,它们是诊断干燥综合征的血清学标志。
抗SSB抗体较抗SSA抗体诊断干燥综合征更为特异。 免疫扩散法与免疫印迹法(Western Blot)得出的结果常常
系统性红斑狼疮(SLE)中的自身抗体
抗原
阳性率
双链DNA
60-90%
单链DNA
70-95%
RNA
50%
组蛋白
95%
U1-nRNP
15-40%
Sm
5-40%
SS-A(Ro)
20-60%
SS-B(La)
10-20%wenku.baidu.com
细胞周期蛋白(PCNA)
3%
Ku
10%
核糖体P蛋白(rRNP)
10%
热休克蛋白90kDA:Hsp-90
抗核抗体谱检测及其临床意义
1
课程 章节
抗核抗体谱的定义
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2 自身免疫性疾病与ANAs的相关性
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3 抗核抗体谱的检测及意义
1. 抗核抗体谱的免疫印迹法原理 2. 抗核抗体谱的临床意义
抗核抗体谱的定义
第一章
1 抗核抗体谱的定义
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抗核抗体谱的定义
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