胚胎移植术一0504

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– 间隔一定时间处理:100~120天 – 更换激素制剂。
以12月6日羊采胚实习超排程序
时间 11.30 上午 下午
交配/HCG1000IU
11.29
11.28 11.27 11.17
FSH10IU
FSH15/20IU FSH15/20IU PG0.2mg FSH40/35IU FSH40/35IU PG0.3mg
(5)超数排卵的效果评价
• 发情率 有部分暗发情,需适时直检;
• 排卵数 牛10~15枚,过多受精率、可 用胚下降; • 受精率 低于自然发情排出的卵子,应 增加输精次数;
• 回收率 PG后48小时发情的供体牛输 卵管胚胎回收率高; • 发情周期 超排后孕激素浓度高,需
(6)影响超排效果的因素
• 个体反应差别;
(3)牛超排应用-PMSG
PMSG超排模式
发 情
PMSG PG PG 发情配种 抗血清 采胚
0d
12d
13d
14d
15d
16d
23d
牛超排应用--FSH
• 在发情周期(发情当天为0d)的9~13d 中的任何一天开始肌注FSH,以递减 剂量连续肌注4d,每天注射两次,总 剂量为300~500IU。在第一次注射FSH 后48h及60h,各肌注一次PGF2α或氯 前列烯醇0.2~0.4mg。
• 羊多在供体超排前一起用孕激素阴道
羊同期发情——放栓
4.供体母畜发情配种 受体发情不配种
• 必须用优秀的种公畜进行多次配种,一般 隔8-12h进行一次配种,直到发情结束。
– 配种前应对种公畜的精液进行质量检查。
• 优秀种公畜不足时,可考虑首次采用本交, 以后采用人工授精,也可以全部采用人工 授精。 • 受体母牛发情不输精。
1.5
1.5~2 2.5
3
2~4
6~7
7~8
15
猪 马
1~2
1~3
2~3
3.5~5 2~2.5 5~6
6
13
1
1.5
3
4~4.5 4~6
6
8
37

交配后 10~11 h
1
1~1.5 1.5~2 2
2.5~4 3~4
5.胚胎的收集
• 冲胚液现多用杜氏磷酸盐缓冲液 (PBS)、合成输卵管液(SOF)、 布林斯特液等。 • 冲胚液可加1-5%牛血清白蛋白, 也可不加。
VADE 10 (ml)
氯PG (mg) 0.6/0. 4 卵巢处于静止 进一步促进发 需大量启动发 育 育
上 午 不 出 现 发 情 时 才用
• 10月15日供体采集胚胎,采胚结束时向子宫 灌注抗菌素及PG,胚胎进行冷冻保存。 • 10月8~9日观察发情情况并输精,第一次输精 时注射LRH三支; • 10月6日第二次注射PG三支/头; • 10月4日开始注射FSH进行供体牛超排; • 10月3日检查供体牛,记录供体牛情况,包括 产犊时间、体膘、产奶量、发情时间、子宫 卵巢状况、左右两侧的大小、黄体大小,以 便确定最后头数和剂量; • 9月28~29日观察供体牛发情情况,做好记录, 没发情的检查黄体,并子宫灌注露它净,观
手术采胚方法
• 羊在排卵后2~3d输卵管采胚或4~7d子宫角手 术法采胚。 • 输卵管法:按照外科手术要求在腹中线作一 切口,找到输卵管和子宫,引出切口外,观 察卵巢上的排卵情况与数量,再用注射器把 冲胚液20~30ml注入子宫角前端,在输卵管 伞部插入一根玻璃管或塑料导管,把冲洗液 接入器皿内,等待检胚。 • 子宫角法:在子宫角基部插入二路式冲胚管, 并充气固定,再用冲卵针头从子宫角尖端插
30年代首先在绵羊、山羊方面进行,到 家畜试验 1934年绵羊、1949年山羊、1951年猪与 阶段 牛、1970年马方面先后移植成功。
畜牧生产 头良种牛犊。目前世界上胚胎移植牛 应用阶段 年生产量已超过35万头。
1985年美国利用胚胎移植繁殖了约5万
我国
牛胚胎移植最早在1951年取得成功。50 年代鲜胚、73年冻胚、80年代甘油加蔗 糖、90年代乙二醇、86年二分割胚、89 年体外受精成功。
(2)超数排卵的方法与药物
• FSH法 牛40-50mg或400~500IU ,羊2025mg – 半衰期短,需多次注射 – 剂量递减注射 • PMSG法 牛2000-3000IU,羊1000IU – 半衰期长,一次注射 – 发情时需注射抗孕马血清 • 为提高群体超排同期化程度,在超排前用孕 激素或PG预处理。 • 为提高超排效果,第一次促性腺激素后48、 72h注射PG0.4~0.6mg
供体配种
牛 胚 胎 不 同 发 育 阶 段
各种家畜的胚胎发育
排卵 时间 发育速度(排卵后天数) 2C 4C 8C 16C 进入 子宫 3~4 胚泡 形成 7~8 脱离 透明 带 9~11 附植 开始 22

绵 羊
结束后 10~11 h
1~1.5 2~3
3
4
开始后 24~30 h
开始后 35~45 h 结束前 1~2d
• 泌乳;
• 年龄和胎次;
• 超排时间:有较小卵泡时敏感,大卵泡时 反应差(对PMSG); • 品种:对PMSG的反映黑白花为1,利木 赞牛0.9,夏洛来2.5 ; • 季节;
提高超排效果的措施
• 用孕激素预处理能提高母畜对促性腺激 素的敏感性; • 控制激素剂量。过量排卵率降低,雌激 素升高,使发育中的胚胎质量下降; • 开始超排时,已有优势卵泡的,由于处 理时间和卵巢机能发育的步调不一致, 效果常不佳; • 提高反复超排效果的措施:
奶牛孕激素+FSH超排
• 在发情周期的任一天埋植“牛欢”,并肌 注苯甲酸雌二醇2mg、黄体酮50mg。 • 第4d起连续4d8次减量注射FSH260mg(加 拿大产)。剂量分别为60、40、20、10mg。 • 第6d上午肌注PG0.4mg,下午撤栓,观察 发情。
发情
FSH 10d
FSH FSH/PG FSH 11d 12d 13d
输精
采胚
0d
14d
21d
FSH超排模式图
(4)羊超排应用
• 绵 羊 在 周 期 12-13d 一 次 PMSG7501500IU , 出 现 发 情 后 或 配 种 当 天 HCG500-750IU.也可同母牛,PMSG后, 隔日PG。 • 波尔山羊对FSH极敏感,总量60~132IU 处理5头羊均过量,卵子未受精, 37~44IU处理则冲出受精卵,平均14枚。 (动繁2001。3张令进) • 宁波FSH总量138、150IU分别冲出9.5、 12.5枚胚胎(97年余文莉)。 • PMSG1000~1350IU 肌 注 , 加 HCG750~1000IU静注得到排卵数7.4个,
充分发挥优良母畜的繁殖潜力。
胚 胎 移 植 的 意 义
加速品种改良,扩大良种畜群。
节省引种费用,便于品种资源保存。
防止疫病传播与不孕。
诱发肉畜产双胎,提高生产效率。
为其它胚胎生物技术提供研究手段。
胚 胎 移 植 发 展 概 况
实验生物 1890年英国剑桥大学Walter Heape氏 学阶段 在安哥拉兔上移植成功;
• 意义:
–使受体与供体母畜处在同一生理 阶段。 • 方法:
–有孕激素延长黄体期法、PG缩 短黄体期法。
受体与供体的同期发情
• 牛多在供体实施超排时用PG对受体 进行同期发情处理;
– 在供体注射PG的前一天受体母畜 肌注或子宫灌注氯前列烯醇0.4mg。 – 如在灌注氯前列烯醇后24h配合注 射FSH、PMSG,可明显提高同期 发情效果。
同一物种:供体和受体在 分类学上的相同属性。
同一性原则: 胚胎移植前 后所处的环 境的同一性
同一生理阶段:受体和供 体在发情时间上的同期性
同一解剖位置:空间环境 的一致性。
胚胎的 发育期限 必须处于周期黄体期内; 胚胎脱离透明带以前。 胚胎的 质量
胚胎必须是正常的,并在处理过 程中不受不良因素的影响。
• 在发情周期的第10~13d中任意一天肌注 PMSG1500~3000IU一次即可,在注射 PMSG后48h及60h,分别肌注PGF2α或 氯前列烯醇0.4~0.6mg。母牛出现发情 后12h,再肌注抗PMSG血清,剂量以 能中和PMSG的活性为准。 • 发情第16~17dPMSG2500IU,48h后 PG0.6mg,3~4d发情,在第一次输精 时用抗血清2500IU。
家兔
时间 内容 时间
小白鼠
内容
5.24上 午 5.28上 午 5.30上 午 5.31上 午
PMSG5060IU HCG75IU、 交配 输卵管采胚 子宫角采胚
5.26上 午 5.28上 午 5.30上 午 5.31上 午
PMSG10IU
HCG10IU、交 配 输卵管采胚
子宫角采胚
3.受体的准备--同期发情
以5月30日牛采胚实习的超排程序
时间
5.24 5.23 5.22 5.21 5.20
上午
输精 FSH30IU/发情 FSH50IU FSH70IU FSH100IU PG0.6
下午
输精/LRH FSH30IU FSH50IU/PG0. 6 FSH70IU
5.19
5.10
FSH100
实验动物超排程序
胚胎收集方法
• 部位:输卵管、子宫角 • 方法:
– 手术法 • 输卵管冲胚:顺向冲胚、逆向冲胚 • 子宫角冲胚 – 非手术法 • 二通管 • 三通管
手 术 法 采 胚
采胚前准备
• 羊多用手术法采胚,仰卧保定,术部 乳房前腹中线旁,两条乳静脉间,或 后肢股内侧鼠鼷部。
• 术前停食24~48h,肌注静松灵0.5ml, 局麻用0.5%普卡。也可2%普卡2~3ml 或多卡因2ml尾荐硬膜外麻醉。
任务三 胚胎移植的技术程序
供体良种母畜
同期发情 超数排卵 良种来自百度文库畜精液 发情配种 胚胎检查和选择 发情不配种 受体移植 妊娠 发情配种或 再作供体 分娩良种后代 受体母畜
采集胚胎
1.供体和受体的选择
• 供体 – 具有遗传优势,在育种上有相当高的育种价 值; – 具有良好的繁殖能力,无生殖道疾病,产后 60d以上 ; – 牛年龄3-5岁; – 体质强健,健康无病,营养良好的母畜作供 体; • 受体 – 应繁殖性能好,对地方适应性强,容易购买, 体型中上等的母畜,如本地牛羊及生产性能 低的其它牛羊;
受体牛 供体牛
2.供体的准备--超数排卵
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(1)超数排卵的原理
• 潜力:一头牛出生时有6~10万个卵母细 胞,一生中存活15年,只发情不配种也 仅有255个卵母细胞成熟,占0.2~0.4%, 潜力很大; • 可能:一个发情周期中有三个卵泡发生 波,象接力赛一样,大多数卵母细胞都 在发育中途萎缩或黄体化,只有最后一 个卵母细胞能成熟排卵; • 措施:在发情周期的末期,使用适当剂 量的促性腺激素处理,以提高体内促性
本单元重点
• 胚胎移植的生物学基础与原则; • 供体超数排卵程序的制定; • 胚胎采集的方法。
胚胎移植技术
1
胚胎移植技术概述
2
胚胎移植技术的原理
3
胚胎移植的技术程序
任 务 一 胚 胎 移 植 技 术 概
• 胚胎移植,是将一头良种母畜配 种受孕后的早期胚胎取出,或体 外受精的早期胚胎移植到另一头 同种的生理状态相同的母畜体内, 使之继续发育成为新个体,所以 也称借腹怀胎。 • 提供胚胎的个体是供体;接受胚 胎的个体是受体。 • 胚胎移植的时间一般是发育至多 细胞的桑椹胚或囊胚阶段的胚胎
任务二
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1. 胚 胎 移 植 的 生 理 学 基
1
早期胚胎处于游离状态
母畜发情后生殖器官的孕向发育
2
3
妊娠信号是由胚胎发出的 中发 移植的胚胎具有免疫耐受性
胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响 孕妊
化激娠 素期 变中 变孕情 化激周 素期
4
5
2. 胚 胎 移 植 的 基 本 原 则
• 周期第16~17d开始,分4d八次减量注 射FSH,总量40~100mg或300~500IU, 第一天总量一半,第二天余量一半, 在第一次FSH后72h肌注
山西牛FSH超排实例(单位:mg)
项目 第一 天 第二 天 第三 天 第四 天 第五 天
FSH 1.5/1. 1.3/1. 1.1/1. 0.8/0. 0.3 3 1 8 (mg) 5
2004年九峰牧场供体超排及采胚程 序
供体超排FSH注射程序
上午
时间 10.4 10.5 10.6 10.7 10.8 100 70 50 30 发情 FSH PG
下午
FSH 100 70 50 30 配种1支、LRH3支 0.6 PG
10.9
10.15
配种一支(输到颈口内或两角的浅部不 要太深) 采集胚胎并冷冻,子宫灌注PG、抗菌素
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