银染步骤(消除深背景)
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摘要：我们做蛋白质电泳的人都知道,银染色很灵敏,有很强的说服力,但通常胶背景较深,不易扫描.在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法.
我们做蛋白质电泳的人都知道,银染色很灵敏,有很强的说服力,但通常胶背景较深,不易扫描.在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法.
Step Reagent Time/min
Fix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60
Rinse 50% EtOH 5 min, 3 times
Sensitive 0.02% Na2S2O3 1 min
Rinse Double distilled H2O 1 min, 3 times
Silver 0.5% AgNO3, 0.075% HCHO(现用现加) 20 min
Wash* Double distilled H2O 1 min, 2 times
Develop 6% Na2CO3, 0.0004% Na2S2O3, 0.05% HCHO 4-15 min
Stop 50% EtOH, 12% HAC
*说明,此步中洗涤过程要控制好,时间太长,可能显色时间太长甚至染不出色；反之,时间太短,银没有洗干净,背景变深.但做几次以后就很快掌握了.