高敏肌钙蛋白的应用

cTnT-hs比第四代肌钙蛋白T有更好的检测灵敏度
TnT gen 4th (10% CV) &TnT-hs (99th percentile)
Sensitivity %
93 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 0 - 3h 3 - 6h 6 - 9h 9 - 12h >12h 98 100 98 94 100
French J and White H
Heart 2004; 90(1): 99–106.
心脏标志物检测的历史
AST, angiotensin sensitivity test; CK, creatine kinase; INH, immunoassay; LD, lactate dehydrogenase
French J and White H
Heart 2004; 90(1): 99–
肌钙蛋白是诊断心梗的最佳生物标志物
2007年NACB指南推荐
检测 Myocardial necrosis cTn (mCKMB) cTn (mCKMB) 推荐等级 I 证据强度 B 推荐 推荐用于所有具有ACS症状的患者 进行心梗诊断时，生物标志物检测应结合 临床病史、体检和心电图检测 心脏肌钙蛋白是诊断心梗的最佳生物标志 物 当心脏肌钙蛋白不可用时，可用CKMB替代 应在就诊入院时即采集血样检测，并根据 临床情况进行连续检测 对于绝大多数患者，至少应在入院时和6 －9小时内检测两次 对于有ACS病史的患者，24小时内检测出 一次肌钙蛋白（或CKMB）高于99百分位参 考值，即应怀疑心肌梗死可能
世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术
高敏肌钙蛋白T：更先进的检测技术
• 生物素捕获抗体保持不变。检测抗体的基因经过重新设计，用人IgG C1区域 取代鼠单克隆抗体FAB片段的连续C1区域，形成人鼠嵌合型检测抗体 获益：进一步减少易受嗜异性抗体（HAMAs）的干扰 ，提高了检测的准确度 • 样本量由15μ L增加到50μ L，增加检测抗体的钌浓度，和通过缓冲区优化降 低背景信号来实现
60 50
Total CV [%]
40 30 20 10 0 1 10 100 hs Troponin T [pg/mL] 1000 10000
10% CV at 0.013ng/ml
TnT-hs 在第99百分位数的URL值时能小于10% CV (< 14 pg/ml)
Apple F
et al. NACB Practice Guidelines in ACS ; Circulation 2007, 352-355
cTnT-hs正常人群中第99百分位数:0.014 ng/ml
Reference Study Kiel Elecsys® TnThs DR, n = 445
第三代
1996年
Elecsys® Troponin T
第四代
2005年
Elecsys®Troponin T
第五代
2010年
Elecsys® Troponin T– hs
cTnT-hs与第四代肌钙蛋白T比较
更低的检测阈值，更精确的检测参考值
TnT generation 10 pg/ml 10 - 25 000 pg/ml 10 pg/ml 30 pg/ml 100 pg/ml
高敏肌钙蛋白T的应用
Contents
为何要使用肌钙蛋白 为何要使用高敏肌钙蛋白
为何要使用高敏肌钙蛋白T
如何解读高敏肌钙蛋白T检测结果
Contents
为何要使用肌钙蛋白 为何要使用高敏肌钙蛋白
为何要使用高敏肌钙蛋白T
如何解读高敏肌钙蛋白T检测结果
急性心肌梗死(MI)后心脏标志物的分泌
心脏标记物升高量与心肌坏死程度成正比
小于99百分位参考值,符合指南对Leabharlann Baidu检测标准的要求
Inter-Assay Precision (NCCLS) (Total Imprecision: Controls / HS Pools)
E1 70 e 41 1 Spec. CV 1 00 - 2000 201 0 Spec. CV 1 3-1 00
4th
最低检测阈值 检测范围 99百分位参考值 LoQ (10% CV)
TnT-hs
3 pg/ml 3-10 000 pg/ml
14 pg/ml 13 pg/ml 100 pg/ml
WHO 诊断参考值
cTnT-hs沿用了最先进的电化学发光技术
先进的检测技术
电化学发光技术
电化学发光免疫测定法（Elecsys）发展于 1996年，它在发光反应中加 入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、化学发光免疫测定之后的新 一代标记免疫测定技术，是电化学和免疫测定相结合的产物。
*症状出现后时间
最早被 检测时间*
1.5-2小时 1.5-2小时 2-3小时 3-4小时 4-6小时 6-10小时 6-10小时
持续可检 测时间
8-12小时 8-12小时 1-2天 7-14天 2-3天 3-5天 5-7天
灵敏度 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋
特异性 ＋＋ ＋ ＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋ ＋ +
制作工艺不断进步，肌钙蛋白检测水平不断提高
第一代 第二代
1989年 1993年
ELISA Troponin T Enzymun Troponin Elecsys Troponin T
第一代心脏特异性单克隆抗体 第二代心脏特异性单克隆抗体 （定标液：牛肌钙蛋白） 第二代心脏特异性单克隆抗体 （定标液,人基因重组肌钙蛋白） 不受肝素干扰 最低检测浓度: 0.003 ng/ml第99 百分位数: < 0.014 ng/ml 10% CV: 0.013 ng/ml
ACS 诊断过程中肌钙蛋白的使用
2007年ESC指南推荐 诊断流程
就诊 询问病史 心电图 生化检测
Troponins阳性
胸闷，胸痛 怀疑ACS（急性冠脉综合症）
持续ST段抬高 ST/T段异常 心电图正常
Troponins 阴性X2
危险分层
高危
ST段抬高心梗 （STEMI） 非ST段抬高心梗
低危
不稳定性心绞痛
肌钙蛋白是最佳诊断心肌损伤标志物
2007年ESC 指南
• 心脏肌钙蛋白是最佳的诊断心肌损伤的标志物 • 比传统心脏酶谱（如CK和CKMB）有更好的灵敏度和特异性 • 肌红蛋白对于心肌细胞损伤的灵敏度和特异性不佳，ESC不推荐用于常规 诊断和危险分层 • 肌钙蛋白诊断心肌梗死的参考值应使用健康人群99百分位参考值 • 99百分位参考值的检测偏异度应小于10％ • 肌钙蛋白检测的血样应正确采集 • 应在60分钟内得到检测结果 • 如果初次检测阴性，应在6－12小时内复查 • 结合其他心肌缺血症状（胸痛，ST段改变），肌钙蛋白阳性可诊断心梗
I
A
cTn (mCKMB)
I
C
cTn (mCKMB)
I
C
不稳定心绞痛和非ST段抬高心肌梗死患者的管理
2007年ACC/AHA 指南
早期危险分层推荐 Class I • 对于所有表现为胸部不适的怀疑ACS患者均应进行心脏标志物检测 • 心脏特异性肌钙蛋白是最佳的标志物 • 症状出现6小时内心脏标志物检测阴性的患者，应在8－12小时内复测心脏标志物 Class IIa • 心脏标志物至少应连续检测2－3次，间隔6－8小时，以评估梗死范围和坏死程度 Class IIb • 患者症状出现6小时内，肌钙蛋白可以与早期心脏损伤指标 （如肌红蛋白）联合 检测 • 患者症状出现6小时内，应综合判断肌钙蛋白2小时变化情况和肌红蛋白2小时变 化情况 • 患者症状出现6小时内，可同时检测肌红蛋白与肌钙蛋白基线水平和90分钟变化 趋势
507位超过20分钟胸痛患者
TnT gen 4 TnT hs
NACB/IFCC指南对于ACS心脏标志物检测的建议 检测99百分位参考值变异系数(CV)≤10%
• 每个心脏标志物都应建立参考决定范围，且是基于正常健康无心脏疾病 史的人群（参考人群） • 对于心脏肌钙蛋白和CK-MB值的升高应定义为测量值超过参考对照组的 第99百分位数
• 每个检测第99百分位数变异系数CV应 ≤ 10%
NACB： National Academy of Clinical Biochemistry美国临床生化科学院 IFCC：international federation of clincal chemistry and laboratory medicine 国际临床 化学学会
肌钙蛋白生理 (Troponin)
心 肌 纤 维
•肌纤维由平行的粗丝和细丝组成网状结构。粗丝是肌球蛋白复合体；细 丝由肌动蛋白，原肌球蛋白和肌钙蛋白组成 •肌钙蛋白在骨骼肌和心肌中广泛存在: •肌钙蛋白C结合Ca离子 – 存在于骨骼肌和心肌 •肌钙蛋白I是肌动蛋白抑制亚基 – 仅存在于心肌中 •肌钙蛋白T是原肌球蛋白结合亚基, 推动肌肉收缩–仅存在于心肌中
高敏肌钙蛋白T 敏感性↑特异性↑
为何要使用高敏肌钙蛋白
• 高敏肌钙蛋白带来检验的进步 • 更高的敏感性 • 更佳的准确度
• 高敏肌钙蛋白带来临床的获益 • 提前诊断心梗时间 • 发现更多心梗患者
为何要使用高敏肌钙蛋白
• 高敏肌钙蛋白带来检验的进步 • 更高的敏感性 • 更佳的准确度
• 高敏肌钙蛋白带来临床的获益 • 提前诊断心梗时间 • 发现更多心梗患者
获益：提高了分析检测的灵敏度，最低检测阈值由0.01ng/ml降低到0.003ng/ml
高敏肌钙蛋白检测过程
• 生物素捕获抗体（2.5μ g/mL），钌标记检测抗体（2.5μ g/mL），样本在均 相中培养4.5分（Elecsys 2010/cobas e 411；STAT应用）或9分钟（Modular E170/cobas e 611；正常应用）。 • 添加链霉亲和素包裹的珠，在第二个4.5或9分钟的培养期内所形成的免疫复 合物结合成微粒物。 • 在第二次培养期后，反应混合物被转送入测量单元，其中珠被磁极捕获至电 极表面。清洗测量单元去除未绑定的标记并注满包含三丙胺的检测缓冲液。 • 给电极施以电压后，释放出的化学发光可以由光电倍增器检测到。 • 结果通过2点校准曲线确定且具有仪器特异性。
Clin Chem 43;3:458-466; 1997
心肌损伤后，肌钙蛋白T浓度升高时间早，持续时间长
是理想的心肌损伤标志物
分子量 (KD）
12 16 83 38 96 103 135
蛋白 脂肪酸结合蛋白（Fatty acid binding protein） 肌红蛋白（Myoglobin） 心肌型肌酸激酶同功酶(CKMB) 肌钙蛋白T（Troponin T） 肌酸激酶(CK) 天冬氨酸转氨酶(Aspartate transaminase) 乳酸脱氢酶（LDH）
来自TnThs 546位健康志愿者 DR01all
120 100
TnT hs DR01 f
TnThs DR01 m
Frequency
80 60 40 20 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8
99th perc. 13.0 pg/mL (all) 10.0 pg/mL (female) 13.2 pg/mL (male)
诊断
治疗
再灌注
介入治疗
非介入治疗
Europeon Heart Journal (2007)28,1598-1660
Contents
为何要使用肌钙蛋白 为何要使用高敏肌钙蛋白
为何要使用高敏肌钙蛋白T
如何解读高敏肌钙蛋白T检测结果
MI早期诊断所遇到的挑战
肌红蛋白/CKMB 敏感性↑特异性↓
肌钙蛋白 敏感性↓ 特异性↑
肌钙蛋白是特异性最好的心脏标志物
骨骼肌损伤(Marathon Runners马拉松选手) n = 41
100
相对升高
10 1
0.1
Mgb
[60µg/L] 18/21
CKMB
[7.5µg/L] 3/21
cTnI
[2.5µg/L] 0/21
cTnT
[0.1µg/L] 0/21
43名马拉松选手奔跑3天后，血液中肌钙蛋白浓度未有升高 肌红蛋白和CKMB则有升高
初步结果 (445 人) 第99百分位数 = 0.014 ng/ml
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 25 30 40 Troponin T [pg/mL]
Confidential: For Internal Use Only
TnT-hs检测10% CV为0.013 ng/ml