培养基模拟灌装试验PPT学习课件
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• 目的
– 证明生产线采用无菌工艺生产无菌产品的能力 – 对人员进行资格确认 – 符合GMP的要求
16
试验前的准备工作
• 设备确认 • 通风系统（HVAC）、水系统的验证 • 设备的清洗和消毒CIP,SIP • 灭菌工艺验证 • 湿热、干热灭菌工艺 • 除菌过滤的验证 • 空气过滤器的完好性检测 • 容器/胶塞密闭性测试 • 人员培训 • 洁净室环境达到设计要求
产品、容器和密封件分别进行灭菌，然后进行 灌封
在极高洁净环境下进行灌装和密封 产品在最终容器中不再做进一步的灭菌处理 对各个组成部分的灭菌工艺需要进行严格验证
和监控 在灌封前和灌封过程中的操作会带来污染风险
10
什么是无菌生产工艺？
– 生产环境 • 洁净区 • 人员
– 药液制备和过滤 – 药液除菌过滤前的微生物负荷 – 过滤器完整性测试和验证 – 生产设备和内包装材料的准备和灭菌 – 灌装过程 – 转运＼冻干＼轧盖 – 无菌工艺过程验证
22
关键因素三: 培养基及培养条件 (1/3)
• 培养基必须适应广谱微生物的生长，包括需氧菌、 酵母菌和霉菌（非选择性培养基）。
• 较好的澄明度，较小的粘度，易于除菌过滤。 • 推荐使用大豆消化酪素琼脂培养基(SCD) ，以及
大豆胰蛋白胨肉汤(TSB)。 • 如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时，
或在环境中分离出厌氧菌时，可能需要使用厌氧 培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM)。
23
关键因素三: 培养基及培养条件 (2/3)
• 培养基必须做促生长试验，按药典方法（10版药 典新规定）进行评价。有条件的推荐使用1~2种 最常见的环境分离菌。
• 促生长试验可以同步或14天培养后进行。用于促 生长试验的培养基培养前需经过同样的工艺步骤 （例如清洗、灭菌、充氮、灌装、冻干等）
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关键因素二: 试验的次数和频率
• 培养基模拟试验的初始验证，至少需要成功的连 续进行 3 次独立的模拟试验（建议在不同的工作 日进行试验）。
• 首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次， 每次进行1批即可。
• 当生产线发生变更，并且经过评估可能对无菌生 产工艺有潜在危险时，应当进行额外的培养基灌 装试验。
13
无菌操作最重要的部分
个人认为是
所有操作人员的无菌保障意识
14
为什么需要进行培养基灌封试验？
※无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之 一，确保产品无菌是该工艺最大的难点。
※减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措 施。 ..Байду номын сангаас员培训 ..无菌工艺验证
15
定义
使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对无 菌工艺进行验证。又称为“工艺模拟试 验”.
5
风险：结合了发生危害的可 能性和危害的严重性
评估风险的参数
严重性6
可能性
风险评估
可能性 可探测性 严重性 风险
最终灭菌的 无菌制剂
较小
非最终灭菌 的无菌制剂
较大
很差
严重 大
很差
严重 很大
7
非最终灭菌制剂 的风险大不大？
8
我们如何做到上述的无菌保障水平
无菌生产工艺
9
什么是无菌生产工艺？
无菌生产工艺
• 通常情况，在培养结束后，一些玻璃瓶（从生产 开始、中间、结束时取样）进行微生物接种。
24
关键因素三: 培养基及培养条件 (3/3)
• 培养温度 全部样品应在20-35℃(±2.5℃)下培养14天。通常 在 20-25℃下 培养 7 天，然后在30-35℃下培养 7 天；或者在30-35℃培养 7 天后，再转移到 2025℃培养 7 天。
20
关键因素一:起始步骤
新版GMP第四十八条：。。。应尽可能模拟常规 的无菌生产工艺，并包括所有对结果有影响的关 键生产工序。。。 1、从配制开始：冻干制剂从液体配料开始，需要更 多量的培养基，考察的最全面。（如工艺要求配 好的液体需要在配制罐中蒸汽灭菌的应从配制开 始） 2、从除菌过滤前开始：考察的内容包括除菌过滤系 统，考察较全面，培养基不需要灭菌，需要考虑 生物负荷。 3、从除菌过滤后面开始：只考察灌封等操作过程， 培养基需要事先灭菌。
允许污染的数量（瓶） 0
≤1 ≤2
≤3
4
无菌检查的局限性
• 试验目的：不合格的可能性(%) • 试验批量：60,000支 • 试验方法：按无菌测试方法
真实的不合格率 1％
测试20支样品 不合格的可能性
18.2%
5％
64.2%
15％
96.1%
测试40支样品 不合格的可能性
33.1%
87.2%
99.8%
用培养基灌封的结果为它的不合理的进行辩护。
18
培养基灌装方案
• 需要考虑的关键因素 : • 起始步骤 • 试验的次数和频率 • 培养基及培养条件 • 灌装数量 • 容器体积 • 灌装体积 • 灌装速度
19
培养基灌装方案
• 灌装过程的持续时间 • 人员和工作班次 • 环境监测措施 • 干预措施 • 容器的检查 • 培养方法 • 可接受标准 • 污染调查
11
什么是无菌生产工艺？
Environment 环境
原料
人Pe员rsonnel
工艺验证
无菌检验
12
作业环节与风险
作业环节 验证难易度 人员依赖程度
灭菌
易
低
房间设计
N/A
N/A
环境监测
中等
可变
消毒
难
高
更衣
难
很高
物品转移
难
高
无菌技术（灌封） 难
很高
无菌装配
难
很高
相关风险 低 中等 高 高 很高 高 很高 很高
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培养基灌装的原则
• 通常情况下，应该包括产品实际操作过程中可能 发生的“最差条件”
必须考虑可能采取那些干预措施 ?
• 最差条件 • ������ 高于或低于正常范围的条件限度，与正常生
产条件相比最有可能造成工艺或生产失败的条件。 • ������ 注意 • ������ 如果某些做法会带来污染的风险，则不允许
一百万个已灭菌物品或制剂中存活的微生物数低于一。 • 非最终灭菌无菌制剂：目标是零生长，但在污染率低于
0.1%，可信度在95%时是可以接受的。
3
什么是污染率低于0.1%？
计算公式：实际污染率 = (95%置信限值)/(灌封容器 数) × 100%
培养基灌装试验的批量与判断合格的标准
批量（瓶）
3000 4750 6300 7760
培养基模拟 灌装试验
1
无菌的概念
什么是无菌? –理论上：无菌＝没有任何活的微生物 –实际上：我们无法证明产品中没有活微 生物存在
2
无菌的概念
“无菌”的实际定义: • ������ 经生长和繁殖证明无生物 • ������ 实际为概率上的无菌，普遍接受的标准是： • 最终灭菌无菌制剂：微生物存活的概率达到10-6，即保证
– 证明生产线采用无菌工艺生产无菌产品的能力 – 对人员进行资格确认 – 符合GMP的要求
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试验前的准备工作
• 设备确认 • 通风系统（HVAC）、水系统的验证 • 设备的清洗和消毒CIP,SIP • 灭菌工艺验证 • 湿热、干热灭菌工艺 • 除菌过滤的验证 • 空气过滤器的完好性检测 • 容器/胶塞密闭性测试 • 人员培训 • 洁净室环境达到设计要求
产品、容器和密封件分别进行灭菌，然后进行 灌封
在极高洁净环境下进行灌装和密封 产品在最终容器中不再做进一步的灭菌处理 对各个组成部分的灭菌工艺需要进行严格验证
和监控 在灌封前和灌封过程中的操作会带来污染风险
10
什么是无菌生产工艺？
– 生产环境 • 洁净区 • 人员
– 药液制备和过滤 – 药液除菌过滤前的微生物负荷 – 过滤器完整性测试和验证 – 生产设备和内包装材料的准备和灭菌 – 灌装过程 – 转运＼冻干＼轧盖 – 无菌工艺过程验证
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关键因素三: 培养基及培养条件 (1/3)
• 培养基必须适应广谱微生物的生长，包括需氧菌、 酵母菌和霉菌（非选择性培养基）。
• 较好的澄明度，较小的粘度，易于除菌过滤。 • 推荐使用大豆消化酪素琼脂培养基(SCD) ，以及
大豆胰蛋白胨肉汤(TSB)。 • 如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时，
或在环境中分离出厌氧菌时，可能需要使用厌氧 培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM)。
23
关键因素三: 培养基及培养条件 (2/3)
• 培养基必须做促生长试验，按药典方法（10版药 典新规定）进行评价。有条件的推荐使用1~2种 最常见的环境分离菌。
• 促生长试验可以同步或14天培养后进行。用于促 生长试验的培养基培养前需经过同样的工艺步骤 （例如清洗、灭菌、充氮、灌装、冻干等）
21
关键因素二: 试验的次数和频率
• 培养基模拟试验的初始验证，至少需要成功的连 续进行 3 次独立的模拟试验（建议在不同的工作 日进行试验）。
• 首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次， 每次进行1批即可。
• 当生产线发生变更，并且经过评估可能对无菌生 产工艺有潜在危险时，应当进行额外的培养基灌 装试验。
13
无菌操作最重要的部分
个人认为是
所有操作人员的无菌保障意识
14
为什么需要进行培养基灌封试验？
※无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之 一，确保产品无菌是该工艺最大的难点。
※减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措 施。 ..Байду номын сангаас员培训 ..无菌工艺验证
15
定义
使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对无 菌工艺进行验证。又称为“工艺模拟试 验”.
5
风险：结合了发生危害的可 能性和危害的严重性
评估风险的参数
严重性6
可能性
风险评估
可能性 可探测性 严重性 风险
最终灭菌的 无菌制剂
较小
非最终灭菌 的无菌制剂
较大
很差
严重 大
很差
严重 很大
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非最终灭菌制剂 的风险大不大？
8
我们如何做到上述的无菌保障水平
无菌生产工艺
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什么是无菌生产工艺？
无菌生产工艺
• 通常情况，在培养结束后，一些玻璃瓶（从生产 开始、中间、结束时取样）进行微生物接种。
24
关键因素三: 培养基及培养条件 (3/3)
• 培养温度 全部样品应在20-35℃(±2.5℃)下培养14天。通常 在 20-25℃下 培养 7 天，然后在30-35℃下培养 7 天；或者在30-35℃培养 7 天后，再转移到 2025℃培养 7 天。
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关键因素一:起始步骤
新版GMP第四十八条：。。。应尽可能模拟常规 的无菌生产工艺，并包括所有对结果有影响的关 键生产工序。。。 1、从配制开始：冻干制剂从液体配料开始，需要更 多量的培养基，考察的最全面。（如工艺要求配 好的液体需要在配制罐中蒸汽灭菌的应从配制开 始） 2、从除菌过滤前开始：考察的内容包括除菌过滤系 统，考察较全面，培养基不需要灭菌，需要考虑 生物负荷。 3、从除菌过滤后面开始：只考察灌封等操作过程， 培养基需要事先灭菌。
允许污染的数量（瓶） 0
≤1 ≤2
≤3
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无菌检查的局限性
• 试验目的：不合格的可能性(%) • 试验批量：60,000支 • 试验方法：按无菌测试方法
真实的不合格率 1％
测试20支样品 不合格的可能性
18.2%
5％
64.2%
15％
96.1%
测试40支样品 不合格的可能性
33.1%
87.2%
99.8%
用培养基灌封的结果为它的不合理的进行辩护。
18
培养基灌装方案
• 需要考虑的关键因素 : • 起始步骤 • 试验的次数和频率 • 培养基及培养条件 • 灌装数量 • 容器体积 • 灌装体积 • 灌装速度
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培养基灌装方案
• 灌装过程的持续时间 • 人员和工作班次 • 环境监测措施 • 干预措施 • 容器的检查 • 培养方法 • 可接受标准 • 污染调查
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什么是无菌生产工艺？
Environment 环境
原料
人Pe员rsonnel
工艺验证
无菌检验
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作业环节与风险
作业环节 验证难易度 人员依赖程度
灭菌
易
低
房间设计
N/A
N/A
环境监测
中等
可变
消毒
难
高
更衣
难
很高
物品转移
难
高
无菌技术（灌封） 难
很高
无菌装配
难
很高
相关风险 低 中等 高 高 很高 高 很高 很高
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培养基灌装的原则
• 通常情况下，应该包括产品实际操作过程中可能 发生的“最差条件”
必须考虑可能采取那些干预措施 ?
• 最差条件 • ������ 高于或低于正常范围的条件限度，与正常生
产条件相比最有可能造成工艺或生产失败的条件。 • ������ 注意 • ������ 如果某些做法会带来污染的风险，则不允许
一百万个已灭菌物品或制剂中存活的微生物数低于一。 • 非最终灭菌无菌制剂：目标是零生长，但在污染率低于
0.1%，可信度在95%时是可以接受的。
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什么是污染率低于0.1%？
计算公式：实际污染率 = (95%置信限值)/(灌封容器 数) × 100%
培养基灌装试验的批量与判断合格的标准
批量（瓶）
3000 4750 6300 7760
培养基模拟 灌装试验
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无菌的概念
什么是无菌? –理论上：无菌＝没有任何活的微生物 –实际上：我们无法证明产品中没有活微 生物存在
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无菌的概念
“无菌”的实际定义: • ������ 经生长和繁殖证明无生物 • ������ 实际为概率上的无菌，普遍接受的标准是： • 最终灭菌无菌制剂：微生物存活的概率达到10-6，即保证