一种识别人类迟复制的中期X染色体的简易方法
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Ｘ染色体， 在代谢型细胞中， 一条有活性；另一
条活性低。这条活性低的Ｘ 染色体，在间期核
中呈异固缩状态而形成Ｘ小体。如果某一个体 缺少一个Ｘ染色体， 则核型为 ４ ， ５ 其卵巢不 Ｘ Ｏ
・３ 呼
１６ 年 Ｓ ｍｄ用氖标记胸腺嚓咤放射自 ９３ ｃ ｉ ｈ 显影的方法， 观察中期染色体的 Ｄ Ａ复制情 Ｎ
置 ３－ ７ Ｃ温箱中培养。 ４收获细胞前 １ 小时左 右，每瓶加人 ． ０ ＢＤ Ｕ Ｒ溶液０ 毫升（ １ｕ／ ｌ ． １ 即 ０ｇｍ） ， ，继续培养
６ 小时左右后， 加入秋水仙素。 微克／ ． ８ 毫升， 继 续培养 ４ 小时左右。 ５收集细胞， ． 按常规方法作细胞学处理， 用 冷玻片滴片，立即置 ７－８℃ 烤箱中干燥， ５ ０ ３ 小时左右关闭烤箱， 令其自然冷却。 ６将玻片标本浸人已在水浴中升温至８０ ． ８ Ｃ 的 １ Ｎ ＨＰ ４ 临 用前用 Ｎ Ｏ 粉末调整 Ｍ ａ ２０ ａＨ ｐ Ｈ至 ８ ）溶液中 ２ 分钟， ． ０ ０ 取出后稍冷， 用已 加温至 ３℃ 的蒸馏水漂洗两次， ３ｃ 晾干， ７ 置 ７ Ｃ 用蒸馏水稀释的 Ｇｅ ｓ ｉ ：染色液 （ ４ 毫升蒸 ｍ 每 ０ 馏水中加 Ｇｅ ａ原液 ， ｉ ｍｓ 毫升） 染色 ２ ０分钟左
溶液中， ０ １００ｇ 在２０ ６００ 条件下离心７小时。 Ｃ ２
收集含有 Ｄ Ａ 区带的部分，装入透析袋 Ｎ
里，用 ＩｍＭ ＤＴ 和 １ ０ Ｏ Ｅ Ａ ０ ｍＭ ｒ－ Ｉ Ｔｉ ＨＣ ｐ ｓ Ｈ
分钟被溶解。 溶解的细胞用 １－６ 多 蔗糖梯度 （ ２ ０ 含有 ０ １ ｒ－ Ｃ， ８ １ ． Ｍ ｉＨ Ｉ ｐ ． ｍ ０ Ｔｓ Ｈ ２ Ｍ二疏基乙醇，Ｍ １Ｍ
［ ］ Ｕ ｉ ｒｕ， ａｄ ｏｚｒ Ｈ．１７． ｕ） ３ ｅ ｔ ｂ Ｈ ｎ Ｈ ｌｅ ｎａ ． ｔ ， ， ２ Ｊ ｒ ９ ｏ Ｗ
ｏ Ｍｏｅｕａ Ｂｉ ｏ ｙ ６ ： －３ ． ｆ ｌ ｌｒ ｏ ｇ ， １ ｃ ｌ ６ ３ ５
一种识别人类迟复制的中期 Ｘ染色体的简易方法
李 麓 芸 戴和平 夏家辉
大肠杆菌细胞在４ ℃下离心收集之后。Ｏ Ｃ Ｈ Ｉ ０１ ａＩ和 ２ 多蔗糖溶液） Ｃ， ＭＮ Ｃ ． ０ 中。
上述几个方法是分离制备 Ｄ ＮＡ比较常用 的方法。除此之外， 还有酸酚提取法， 碱变性制 备法等都是根据 Ｄ Ａ的性质分离制备的。因 Ｎ 此，在应用上可以依据实验本身客观条件不同
下悬浮于 ０ 毫升ｐ ８ 缓冲液 （Ｏ Ｍ ｉ 选择使用。 ． ， Ｈ ． ２ Ｉｍ Ｔ ｓ ｒ－ 加入溶菌酶 （．毫升含有 ４ ０ １ 毫克／ 毫升溶
图 １ 一个 ４， Ｙ个体的染色体核型， ７Ｘ Ｘ
箭头所指 为迟 复制的 Ｘ染 色体
二、迟复制 Ｘ染色体浅染色的机理
中期染色体的两条姊妹染色单体各由一条 Ｄ Ａ 链所组成，而 Ｄ Ｎ ＮＡ 是由四种单核普酸 （ 其中包括胸腺１咤核普酸） １ ９ ； １ 以不同的排列组合 形成联结而成的两条互补的多核普酸链形成的 一种双螺旋结构。 当细胞在加有 Ｂ Ｄ Ｕ Ｒ培养 液中进行分裂时，Ｂ Ｄ Ｕ Ｒ能取代胸腺嚓淀核普 酸， 渗入到新复制的 Ｄ ＮＡ核普酸链中。这样，
我们参照 ＫｍＭ ａａ ｉ． １等的方法， ｙ． Ｌ１ 采用 Ｂ Ｄ － ＵＲ
Ｇｅ ｓ ｉ ａ技术识别迟复制的中期Ｘ染色体， ｍ 方法 简便， 效果满意， 现将操作方法及基本原理介绍
如下。
一 、操作技术
１用常规方法配制含 ２ 外小牛血清或 Ａ ． ０ Ｂ 型人血清 Ｒ Ｍ ６０ Ｐ １４培养基， １０ 每 ０ 毫升培养 基中加 ２ 并的 Ｐ Ａ溶液 ３ 毫升， ０ Ｈ －５ 用２ 毫升 的容量培养瓶分装 ， 毫升培养基，置冰箱中保 存。 ２用万分之一分析天平称取 Ｂ Ｄ ． Ｕ Ｒ粉末 （ 瑞士 Ｆｕ ｌ ｋ产品） 一毫克， 置无菌青霉素瓶中， 在无菌室中加人无菌生理盐水 ２ 毫升，用黑布 避光置冰箱中保存。 ３抽取待检者静脉血 ２毫升，分别加人培 ． 养瓶中， 用８号针头每瓶滴 ８ ２ 轻轻摇匀 －１ 滴，
参
１ ： ３ ３ １ ５ ３ － ７． ６
考
文
献பைடு நூலகம்
ｅ ｅ ［ ］ Ｋ ｍ Ｍｙ， ａ， ７． Ｃ ｔｇ ｎｔ Ｃ ｌ Ｇ ｎｔ １ ｉ ． ａ ｅ ｌ １ ５ ｙｏ ｅｅ． ｌ ｅ． ｔ ９ ．
［ ］ ｅｂｉｈ， ｅ ａ ， １ ７． ｙｏ ｅ ｅ． ｅｌ ２ Ｓａｒ ｔ Ｍ． ｌ ９ ８ Ｃ ｔｇｎｔ Ｃ ｌ ｇ ｔ ．
Ｇ ｎ ｔ ２ ： － １４ ｅｅ． ０ １０ ５ ． ， ５
． ３５ 、
当在细胞终止培养前１小时加入 Ｂ Ｄ ０ Ｕ Ｒ后， 由 于组成迟复制的那条Ｘ 染色体的两条染色单体 的 Ｄ Ａ链的一条核普酸链的胸腺嚓淀大部分 Ｎ
被 ＢＤ Ｕ Ｒ取代， 而使该中期染色体出现了螺旋 化降低的倾向， 从而影响了与 Ｇｅ ｓ染料的亲 ｍ。 和力，因而着色浅。这样根据这条染色体与其 它染色体所呈现的鲜明不同的颜色，就可以鉴 定它为迟复制的Ｘ染色体。
发育而呈条索状，并表现出多种的临床症状。
有的个体中， Ｘ也可增多， 可多到 ３ 个， －， 但也
只有一条Ｘ具有活性， 其它各条活性低， 故可形 成２ 个Ｘ小体，这种人常伴有智力发育障碍 －４
等一系列临床表现，但并没有女性化更强的表 现。因此，我们检查这种活性低的Ｘ染色体就 可帮助临床确诊。
Ｌｏ 提出“ ｙｎ 单个Ｘ 活动假说气 认为女性的两条
１ ７． ｃ ｉ Ａ ｉ Ｂｅｅｒｈ ５ ３ ３ ５ ０ ９ ８ Ｎｕｌ ｃ ｃｄ ｓａｃ ， ８－ ９． ｅ ： ＿
在冰上放置 ４ ０秒。 紧接着加入 ０ ． ５毫升 １ 多 Ｂｉ５， ％ 脱氧胆酸盐、０ １ Ｅ Ｔ 和 ｒ－ ８ ０ ｊ ． ４ ． Ｍ Ｄ Ａ ０
ｌｍｍ 精眯 ＨＣ ｏ Ｉ溶液 。细胞在 １℃下处理三 ０
况， 发现在正常女性的两条Ｘ染色体中， 有一条
用自来水冲洗， 置室温待干。 Ｘ染色体 Ｄ Ａ复制较迟， Ｎ 而被大量标记， 在正 右， ７在普通光学显微镜下观察可见迟复制的 ． 常男性中的 Ｘ染色体没有这种迟复制的现象， Ｘ染色体呈现明显的浅着色， 如图 １ 箭头所指。 因此认为，这条迟复制的Ｘ染色体就是在间期 图１ 是一个外周血细胞的中期染 色体 图。 表 核中形成Ｘ小体的那条呈异固缩状态的Ｘ染色 ７ ７Ｘ Ｘ 体。此后，在医学遗传学中应用这一方法来研 示一个具有 ４ 条染色体，其核型为 ４， Ｙ 究迟复制的中期Ｘ染色体，但由于放射自显影 的个休的染色体图。 方法复杂， 且需防护设备， 难于推广应用。 现在，
ＥＴ Ｄ Ａ和 ， Ｍ Ｃ） Ｍ Ｍ １，在 ４ ｇｚ ℃下ａ ０ｇ ９ ０离 ０
心片分钟， 离心管中出现三条带（ 中、 ， 上、 下）用 吸管吸出离心管中间出现一条乳白色的带，这 部份就是折叠的染色体 Ｄ Ａ 需要立即进行 Ｎ ， 实验， 否则大约 ３ 分钟后它就会失去折叠的特 ０
性。
（ 五） 折．染色体的提取法
８ 缓冲液透析。 ． ０
（ 四） 冷酚法 将离心收集的细胞悬浮于 ｐ ７ 的 ０１Ｍ Ｈ ． ４ ． ５ 氯化钠和 Ｏ１ Ｅ Ｔ ． Ｄ Ａ中。加 １ Ｍ 毫克／ 毫升的蛋 白酶Ｋ ｒ ａＫ ， （ ｏ ｓ ） 再加 ２ 关的 Ｓ Ｓ ｐｎｅ ０ Ｄ ，使最终 浓度为０ 并， ３℃ 保温 １ 小时。加等体积 ． 在 ７ ３ ６ 的重蒸酚，抽提三次。用十分之一浓度的 ＳＣ Ｓ 透析水相三到五次。
（ 湖南医学院第一附属医院妇产科） （ 湖南医学院医学遗传研究室）
正常人体细胞的染色体为 ４ 条， ３ 其 ６ ２ 对， 中 ２ 对是男女共同的， ２ 称为常染色体， 另一对 男女有别， 称为性染色体， 男性是 Ｘ ， Ｙ 女性是 Ｘ ｏ 染色体上有男性决定因子，一般来说， Ｘ Ｙ 有 Ｙ就能形成辜丸。女性有两个 Ｘ，１６ 年 ９１
菌酶、．２ Ｔｉ ＨＣ，Ｈ７２和 ００Ｍ ＤＴ ， ０１Ｍ ｒ－ Ｉｐ ． ｓ ．５ Ｅ Ａ） 参
３ ： １ ４ ５ ６ ３ － ０． ６
考
文
献
［ 〕 Ｃｏ ｅ Ｒ Ｃ， ７． ｃ ｒ ｌ ｉ ｌ ｅ ｅ ｓ １ ｌ ｓ ． １ ２ Ｂ ｔ ｉｏ ｃ Ｂ ｒ ｉ， ｗ ， ． ９ ａ ｅｏ ｇ ａ ｉｃ ［ ］ ｈ ｓ ， Ｈ ｎｓ ｅ Ｃ Ｃ， ｌ ｍ ， Ｇ， ２ Ｃ ｌｏ Ｒ， ｔ ｈｌ ． Ｗｉｉ ｓ Ｊ ． ｓ ｎ ． ｅ ｅ ， ． ｌ ａ ．
条活性低。这条活性低的Ｘ 染色体，在间期核
中呈异固缩状态而形成Ｘ小体。如果某一个体 缺少一个Ｘ染色体， 则核型为 ４ ， ５ 其卵巢不 Ｘ Ｏ
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１６ 年 Ｓ ｍｄ用氖标记胸腺嚓咤放射自 ９３ ｃ ｉ ｈ 显影的方法， 观察中期染色体的 Ｄ Ａ复制情 Ｎ
置 ３－ ７ Ｃ温箱中培养。 ４收获细胞前 １ 小时左 右，每瓶加人 ． ０ ＢＤ Ｕ Ｒ溶液０ 毫升（ １ｕ／ ｌ ． １ 即 ０ｇｍ） ， ，继续培养
６ 小时左右后， 加入秋水仙素。 微克／ ． ８ 毫升， 继 续培养 ４ 小时左右。 ５收集细胞， ． 按常规方法作细胞学处理， 用 冷玻片滴片，立即置 ７－８℃ 烤箱中干燥， ５ ０ ３ 小时左右关闭烤箱， 令其自然冷却。 ６将玻片标本浸人已在水浴中升温至８０ ． ８ Ｃ 的 １ Ｎ ＨＰ ４ 临 用前用 Ｎ Ｏ 粉末调整 Ｍ ａ ２０ ａＨ ｐ Ｈ至 ８ ）溶液中 ２ 分钟， ． ０ ０ 取出后稍冷， 用已 加温至 ３℃ 的蒸馏水漂洗两次， ３ｃ 晾干， ７ 置 ７ Ｃ 用蒸馏水稀释的 Ｇｅ ｓ ｉ ：染色液 （ ４ 毫升蒸 ｍ 每 ０ 馏水中加 Ｇｅ ａ原液 ， ｉ ｍｓ 毫升） 染色 ２ ０分钟左
溶液中， ０ １００ｇ 在２０ ６００ 条件下离心７小时。 Ｃ ２
收集含有 Ｄ Ａ 区带的部分，装入透析袋 Ｎ
里，用 ＩｍＭ ＤＴ 和 １ ０ Ｏ Ｅ Ａ ０ ｍＭ ｒ－ Ｉ Ｔｉ ＨＣ ｐ ｓ Ｈ
分钟被溶解。 溶解的细胞用 １－６ 多 蔗糖梯度 （ ２ ０ 含有 ０ １ ｒ－ Ｃ， ８ １ ． Ｍ ｉＨ Ｉ ｐ ． ｍ ０ Ｔｓ Ｈ ２ Ｍ二疏基乙醇，Ｍ １Ｍ
［ ］ Ｕ ｉ ｒｕ， ａｄ ｏｚｒ Ｈ．１７． ｕ） ３ ｅ ｔ ｂ Ｈ ｎ Ｈ ｌｅ ｎａ ． ｔ ， ， ２ Ｊ ｒ ９ ｏ Ｗ
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一种识别人类迟复制的中期 Ｘ染色体的简易方法
李 麓 芸 戴和平 夏家辉
大肠杆菌细胞在４ ℃下离心收集之后。Ｏ Ｃ Ｈ Ｉ ０１ ａＩ和 ２ 多蔗糖溶液） Ｃ， ＭＮ Ｃ ． ０ 中。
上述几个方法是分离制备 Ｄ ＮＡ比较常用 的方法。除此之外， 还有酸酚提取法， 碱变性制 备法等都是根据 Ｄ Ａ的性质分离制备的。因 Ｎ 此，在应用上可以依据实验本身客观条件不同
下悬浮于 ０ 毫升ｐ ８ 缓冲液 （Ｏ Ｍ ｉ 选择使用。 ． ， Ｈ ． ２ Ｉｍ Ｔ ｓ ｒ－ 加入溶菌酶 （．毫升含有 ４ ０ １ 毫克／ 毫升溶
图 １ 一个 ４， Ｙ个体的染色体核型， ７Ｘ Ｘ
箭头所指 为迟 复制的 Ｘ染 色体
二、迟复制 Ｘ染色体浅染色的机理
中期染色体的两条姊妹染色单体各由一条 Ｄ Ａ 链所组成，而 Ｄ Ｎ ＮＡ 是由四种单核普酸 （ 其中包括胸腺１咤核普酸） １ ９ ； １ 以不同的排列组合 形成联结而成的两条互补的多核普酸链形成的 一种双螺旋结构。 当细胞在加有 Ｂ Ｄ Ｕ Ｒ培养 液中进行分裂时，Ｂ Ｄ Ｕ Ｒ能取代胸腺嚓淀核普 酸， 渗入到新复制的 Ｄ ＮＡ核普酸链中。这样，
我们参照 ＫｍＭ ａａ ｉ． １等的方法， ｙ． Ｌ１ 采用 Ｂ Ｄ － ＵＲ
Ｇｅ ｓ ｉ ａ技术识别迟复制的中期Ｘ染色体， ｍ 方法 简便， 效果满意， 现将操作方法及基本原理介绍
如下。
一 、操作技术
１用常规方法配制含 ２ 外小牛血清或 Ａ ． ０ Ｂ 型人血清 Ｒ Ｍ ６０ Ｐ １４培养基， １０ 每 ０ 毫升培养 基中加 ２ 并的 Ｐ Ａ溶液 ３ 毫升， ０ Ｈ －５ 用２ 毫升 的容量培养瓶分装 ， 毫升培养基，置冰箱中保 存。 ２用万分之一分析天平称取 Ｂ Ｄ ． Ｕ Ｒ粉末 （ 瑞士 Ｆｕ ｌ ｋ产品） 一毫克， 置无菌青霉素瓶中， 在无菌室中加人无菌生理盐水 ２ 毫升，用黑布 避光置冰箱中保存。 ３抽取待检者静脉血 ２毫升，分别加人培 ． 养瓶中， 用８号针头每瓶滴 ８ ２ 轻轻摇匀 －１ 滴，
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１ ： ３ ３ １ ５ ３ － ７． ６
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［ ］ ｅｂｉｈ， ｅ ａ ， １ ７． ｙｏ ｅ ｅ． ｅｌ ２ Ｓａｒ ｔ Ｍ． ｌ ９ ８ Ｃ ｔｇｎｔ Ｃ ｌ ｇ ｔ ．
Ｇ ｎ ｔ ２ ： － １４ ｅｅ． ０ １０ ５ ． ， ５
． ３５ 、
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被 ＢＤ Ｕ Ｒ取代， 而使该中期染色体出现了螺旋 化降低的倾向， 从而影响了与 Ｇｅ ｓ染料的亲 ｍ。 和力，因而着色浅。这样根据这条染色体与其 它染色体所呈现的鲜明不同的颜色，就可以鉴 定它为迟复制的Ｘ染色体。
发育而呈条索状，并表现出多种的临床症状。
有的个体中， Ｘ也可增多， 可多到 ３ 个， －， 但也
只有一条Ｘ具有活性， 其它各条活性低， 故可形 成２ 个Ｘ小体，这种人常伴有智力发育障碍 －４
等一系列临床表现，但并没有女性化更强的表 现。因此，我们检查这种活性低的Ｘ染色体就 可帮助临床确诊。
Ｌｏ 提出“ ｙｎ 单个Ｘ 活动假说气 认为女性的两条
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在冰上放置 ４ ０秒。 紧接着加入 ０ ． ５毫升 １ 多 Ｂｉ５， ％ 脱氧胆酸盐、０ １ Ｅ Ｔ 和 ｒ－ ８ ０ ｊ ． ４ ． Ｍ Ｄ Ａ ０
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况， 发现在正常女性的两条Ｘ染色体中， 有一条
用自来水冲洗， 置室温待干。 Ｘ染色体 Ｄ Ａ复制较迟， Ｎ 而被大量标记， 在正 右， ７在普通光学显微镜下观察可见迟复制的 ． 常男性中的 Ｘ染色体没有这种迟复制的现象， Ｘ染色体呈现明显的浅着色， 如图 １ 箭头所指。 因此认为，这条迟复制的Ｘ染色体就是在间期 图１ 是一个外周血细胞的中期染 色体 图。 表 核中形成Ｘ小体的那条呈异固缩状态的Ｘ染色 ７ ７Ｘ Ｘ 体。此后，在医学遗传学中应用这一方法来研 示一个具有 ４ 条染色体，其核型为 ４， Ｙ 究迟复制的中期Ｘ染色体，但由于放射自显影 的个休的染色体图。 方法复杂， 且需防护设备， 难于推广应用。 现在，
ＥＴ Ｄ Ａ和 ， Ｍ Ｃ） Ｍ Ｍ １，在 ４ ｇｚ ℃下ａ ０ｇ ９ ０离 ０
心片分钟， 离心管中出现三条带（ 中、 ， 上、 下）用 吸管吸出离心管中间出现一条乳白色的带，这 部份就是折叠的染色体 Ｄ Ａ 需要立即进行 Ｎ ， 实验， 否则大约 ３ 分钟后它就会失去折叠的特 ０
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（ 五） 折．染色体的提取法
８ 缓冲液透析。 ． ０
（ 四） 冷酚法 将离心收集的细胞悬浮于 ｐ ７ 的 ０１Ｍ Ｈ ． ４ ． ５ 氯化钠和 Ｏ１ Ｅ Ｔ ． Ｄ Ａ中。加 １ Ｍ 毫克／ 毫升的蛋 白酶Ｋ ｒ ａＫ ， （ ｏ ｓ ） 再加 ２ 关的 Ｓ Ｓ ｐｎｅ ０ Ｄ ，使最终 浓度为０ 并， ３℃ 保温 １ 小时。加等体积 ． 在 ７ ３ ６ 的重蒸酚，抽提三次。用十分之一浓度的 ＳＣ Ｓ 透析水相三到五次。
（ 湖南医学院第一附属医院妇产科） （ 湖南医学院医学遗传研究室）
正常人体细胞的染色体为 ４ 条， ３ 其 ６ ２ 对， 中 ２ 对是男女共同的， ２ 称为常染色体， 另一对 男女有别， 称为性染色体， 男性是 Ｘ ， Ｙ 女性是 Ｘ ｏ 染色体上有男性决定因子，一般来说， Ｘ Ｙ 有 Ｙ就能形成辜丸。女性有两个 Ｘ，１６ 年 ９１
菌酶、．２ Ｔｉ ＨＣ，Ｈ７２和 ００Ｍ ＤＴ ， ０１Ｍ ｒ－ Ｉｐ ． ｓ ．５ Ｅ Ａ） 参
３ ： １ ４ ５ ６ ３ － ０． ６
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文
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