抗菌药敏试验的意义

药敏试验的意义：

1.查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体化疗方案、节省费用。

2. 进行耐药监测，为医院感染控制部门提供防治依据，为经验用药提供可靠依据。

3.利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐药菌株的出现，延长新药使用寿命。

4. 为新药的研究和评估提供有价值的信息。

（二）、药物敏感试验规则

目前世界上通用的规则是德国和欧洲标准，而我国主要以临床试验室标准化委员会（CLSI ），即美国国家实验室标准委员会(NCCLS) 的规则为标准，这个标准主要包括CLSI 纸片扩散法（M2 ）和需氧菌稀释法（M7 ）。（三）、抗菌药物敏感性试验结果参照标准

1.标准的正确使用

M100 –即新表M100-S17 ，每年更新1 次；包括M2 和M7 文件，M2 –即纸片扩散法(DD) 文件M2-A9 ，M7 –即MIC 文件M7-A7 。M2 、M7 文件每3 年更新一次；使用文件时应注意文件是否已更新，避免使用旧文件造成判断结果失误。

2.获得文件的方法

如果购买厂家的纸片可向厂家索取标准，每年国际化会议也会颁发此文件的中心内容。

（四）、CLSIM-100 表内容：CLSIM-100 表主要包括版本中的更新要点、各版本抗菌药物分组、M2 纸片扩散法用的表、M7 MIC 用的表、M7 MIC 用的表及词汇表等内容。

2007 年主要更新内容

有关“或”的章节，即同类抗生素能否相互替代的问题；耐药性的增长及连续发生株的测试原则；不适于尿中分离菌的药物，大环内酯类的说明；革兰阴性菌及阳性菌的更新部分；质量评估和质量控制方面的更新。

（五）、试验与报告中抗菌药物的选择

M-100 表将抗菌药物分成A.B.C.U.O 组

1 、表1 和表1A 中所列A 组药物被认为对特定菌群的常规的首选试验组合以及常规结果报告中应该出现的药物。

2 、B 组包含一些临床上重要的，特别是针对医院内感染的药物，也可以用于首选试验。但是，它们只是被选择性地报告，例如当细菌对A 组同类药物耐药时，可以选用。其他报告指征可包括以下几点：特定的标本来源( 如对脑脊液中的肠道杆菌用三代头孢菌素或者对泌尿道的分离菌株用TMP/SMZ) ；多种细菌感染；多部位感染；对 A 组药物过敏、耐受或无效的病例；为流行病学调查目的向感染控制组报告。

3 、C 组包括替代性或补充性抗菌药物，可在以下情况进行试验：某些单位隐匿局部或广泛流行的对数种基本药物耐药的菌株；治疗对基本药物过敏的患者；治疗少见菌的感染( 如氯霉素对沙门菌属或某些假单胞菌属) ；为流行病学目的向感染控制组报告。

4 、U 组(“泌尿道”) 列出了某些仅用于治疗泌尿道感染的抗微生物药( 如呋喃妥因和某些喹诺酮类药物) 。除泌尿道，其它感染部位分离的病原菌不用此组药物进行试验。

5 、O 组(“其它”) 对该组细菌有临床适应症但一般不允许常规试验与报告的药物。

6 、Inv 组(“研究性”) 对该菌群作研究用且尚未经FDA 批准的药物。

（六）、试验操作的基本原则

1. 临床标本不能直接做药敏试验，目的以准确结果回报临床。

2. 不应在同一平板做混合菌药敏试验。

3. 与感染无关菌株（定植菌）不做药敏试验。

4. 判断标准：一菌一药一规则。

二、方法分类简介及标准化操作流程

药敏试验分为以下实验方法：纸片扩散法、Etest 法、琼脂对倍稀释法、肉汤对倍稀释法、仪器法。

（一）纸片扩散法

主要介绍内容包括：纸片扩散法的原理、培养基的制备、接种物的制备及接种、贴药敏纸片、孵育与判读。

1 、KB 法原理：将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的

琼脂平板上。经培养后，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌环。测量抑菌环的大小，根据判读标准即可判定该细菌对某种药物的敏感程度

操作流程图

注意事项：

1.全程无菌操作

2. 湿度控制

3. 胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的影响

4. 培养基用水

5. 质控

培养基种类

1.Mueller-Hinton 琼脂培养基（非苛氧菌）

2. HTM 培养基：其组成成分如下：M-H 琼脂粉；15μɡ/ml 牛羟基血红素；PH7.2-7.4 ；NCCLS 不推荐用M-H 巧克力培养基作嗜血杆菌药敏试验。（嗜血杆菌）

3.GC 琼脂. 此补充品( 1 升水中加入1.1g L- 胱氨酸，0.03g 盐酸鸟嘌呤，3mg 盐酸硫胺，13mg 对鞍基苯甲酸，0.01g 维生素B12 ，0.1g 辅羧酶，0.25gNAD ， 1.0g 腺嘌呤，10gL- 谷氨酰胺，100g 葡萄糖，和0.2g 硝酸铁) 是在GC 琼脂高压灭菌后加入的. （淋病奈瑟菌）

4. 5 －7% 脱纤维羊血的M-H 琼脂（链球菌）

培养基的制作过程中最重要的是厚度，即厚度4mm 是最重要的因素。

2. 接种物的制备

1). 直接菌落悬液法多用，广泛

2). 生长法少用，局限性

3). 注意事项：

嗜血杆菌、淋球菌配制菌悬液必须采用巧克力培养基上的菌落作直接悬浮法。菌液浓度应严格要求0.5 麦氏单位。选取新鲜的纯菌落，配置0.5 麦氏单位的菌悬液，：接种物浊度调整好后，最好在15 分钟内接种，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，挤出多余的接种菌液。用棉拭子在无菌的稍干燥的M-H 琼脂表面划线接种，再重复操作两次，每次将平板转动约60 度，保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘。在加含药的纸片之前，可以将培养皿盖半开3-5 分钟，但不超过15 分钟，促使表面过多的水分被吸收。

4 、药物选择注意

1.通过CLSI 推荐表选择药物，标志性药物不可少，如：FOX- STAPH，CN120- ENTEROCOCCI。纸片顺序可做调整，如：测定E.coli和Klebsiella pneumoniae时CAZ 、CTX 纸