柔红霉素盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的HPLC分析

柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的

HPLC分析

作者：石涛陈莎莎朱宇鹏尚广东

【摘要】目的：成立柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的高效液相色谱分析方式。方式：色谱柱为Agilent HC-C18(250 mm ×mm ,5 m)；柱温为30 oC；流速为mL·min-1；流动相为十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-甲醇(500∶500∶60，用磷酸调pH ；检测波长为254 nm。结果：柔红霉素保留时间min，盐酸多柔比星保留时间min，盐酸表柔比星保留时间min；三种化合物进样量在2 g范围内与峰面积积分值呈良好线性关系；平均回收率为%~ %，RSD为%(n=5)；结论：本方式灵敏度高、准确，可以对盐酸多柔比星类化合物进行定性定量分析。

【关键词】柔红霉素；盐酸多柔比星；盐酸表柔比星；高效液相色谱法

【Abstract】Objective: To establish a HPLC method for the analysis of Daunorubicin, Doxorubicin and Epirubicin. METHODS: The determination was performed by HPLC using Agilent HC-C18 column (250 mm mm ,5 m) with the column temperature maintained at 30 oC. The mobile phase consisted of SDS-acetonitrile-methanol (500∶500∶60, ajust pH with H3PO4)at a flow rate of mL·min-1 and a UV detection

wavelength of 254 nm. RESULTS: The Daunorubicin retention time is min ,the Doxorubicin retention time is min ,the Epirubicin retention time is min; The linear range of the three compounds were 2 g,and the average recoveries of all stood at %~ % and RSD at %( n = 5 each); CONCLUSION: This method is sensitive, accurate, and it can be used for the qualitative and quantitative analysis of Daunorubicin, Doxorubicin and Epirubicin.

【Key words】Daunorubicin; Doxorubicin; Epirubicin; HPLC

柔红霉素和盐酸多柔比星为蒽环类抗生素[1]，盐酸多柔比星是柔红霉素的C-14位的羟化产物[2]，盐酸多柔比星氨基糖部份4’位异构化取得活性相当、但毒性减少的盐酸表柔比星[3]，是联合国世界卫生组织推荐的医治肿瘤化疗的大体药物，在国际和国内市场同类药物中占有较大的份额。目前盐酸多柔比星类化合物主如果通过化学半合成法[4]，问题是化学合成目标产物时可能含有其他的组份，质量控制需要各组份精准分析，因此定性和定量分析就很重要。2005版药典中有介绍盐酸多柔比星类化合物的分析方式，但没有柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星三种化合物的分析方式，故参照有关文献[5]，以高效液相色谱法成立盐酸多柔比星类化合物的分析方式。

1 材料

1100型高效液相色谱仪包括包括G2170AA型PC化学工作站、G1311A型四元梯度泵、G1314A型可变紫外检测器（美国Agilent公

司）；精密天平（Sarforius公司）；KQ250DB型数控超声波清洗器（昆山超声仪器厂）。柔红霉素（柔红霉素标准品，中国药品生物制品检定所，批号：130559~200501），盐酸多柔比星（Sigma公司，批号：038K1349），注射用盐酸表柔比星（盐酸表柔比星样品，浙江海正药业股分有限公司，批号：090803）；甲醇、乙腈为色谱级，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方式与结果

色谱条件:色谱柱：Agilent HC-C18 (250 mm×mm ,5μm)；柱温：30 oC；流速：mL·min-1；流动相：十二烷基硫酸钠溶液（g+ mL H3PO4+H2O+500mL, 用磷酸调pH ）-乙腈-甲醇(500∶500∶60)，检测波长254 nm；进样体积20μL。结果，在此条件下柔红霉素与盐酸多柔比星、盐酸表柔比星色谱峰可基线分离，柔红霉素保留时间min，盐酸多柔比星保留时间min，盐酸表柔比星保留时间min。该条件的成立为盐酸多柔比星类化合物进行定性分析奠定了基础（色谱见图1）。

样品溶液的制备:称取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1 mg，用水溶解配置各自贮存液1 mg·mL-1即1μg·μL -1。

线性关系的考察:精密吸取样品溶液、五、10、2五、50、100μL，别离置于mL eppendorf管中，用流动相稀释至1 mL，摇匀，精密吸取系列溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（X,μg）为横坐标，峰面积的积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，取得

回归方程及线性范围，回归方程的成立为盐酸多柔比星类化合物的定量分析奠定基础。结果见表1。

图1 高效液相色谱

A.柔红霉素；

B.盐酸多柔比星；

C.盐酸表柔比星；

D.三种标准品的混合物：1，盐酸多柔比星；2，盐酸表柔比星；3，柔红霉素表1 回归方程及线性范围

最低检测限测定:将样品溶液慢慢稀释，直至信噪比(S/ N) ≥3 ,此时的进样浓度即为检测限。以S/ N = 3 :1 肯定的柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星的最低检测浓度均为μg·mL-1，检测限为50 ng。

稳定性实验:取同一样品溶液,别离在0 、2 、4 、6 、8 、12 、24 h 测定峰面积。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星RSD均<%，表明供试品溶液在24h 内稳定性良好。

精密度实验:取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1mg ，按“”项下方式制备样品溶液，吸取20μL 注入液相色谱仪，重复进样6 次，按上述色谱条件测定峰面积。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星RSD 均<%，表明方式精密度良好。

重现性实验:取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品，