前列腺特异性抗原(PSA)的检测
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捕获微球的检测原理
捕获抗体-抗原-检测抗体夹心复合物
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四、PSA的检测方法
检测原理
样本检测区
红光用于鉴定微球
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绿光用于检测荧光信 号的强弱
四、PSA的检测方法
２．仪器与试剂
试剂： 仪器
Luminex100 液相芯片检测仪
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四、PSA的检测方法
1.实验原理
捕获分子
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待测分子
报告分子
四、PSA的检测方法
捕获微球
聚苯乙烯材料，大小均一，直径5.6 um 标记了两种荧光染料，每种染料的浓度有 10个梯度，通过调整两种染料的比例可以获 得100种不同染色的微球 标记了针对检测物的捕获分子作为探针
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四、PSA的检测方法
Luminex技术与ELISA方法
高通量检测：用微量标本进行多个指标检 测 比ELISA的灵敏度高100-10000倍
重复性好
操作简便、省时省力
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荧光聚苯乙烯球 96孔滤过板 ELISA PSA试剂盒 抗PSA单克隆抗体 5G6(ab10186)和 抗PSA单克隆抗体
ACS180化学 发光免疫分析仪
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四、PSA的检测方法
3.方法：
微球的交联
藻红蛋白标记二抗
Luminex液相芯片检测
绘制标准品曲线,并建立线性方程
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四、PSA的检测方法
1.实验原理
Array-ELISA技术平台主要包含3项技术:酶促化学发光技术、 现代微阵列技术以及低温电荷耦合器（CCD)成像技术。 原理是在保证相互无干扰的前提下,多种特异性的生物活性物 质以特定的微阵列形式排列于每个微孔板板孔内,待血清或血浆中 抗体/抗原与包被抗原/抗体特异性结合后,再与酶标抗体结合形成 免疫复合物,加入发光液,经生物芯片阅读仪分析处理,可同时获得 多项指标定量检测结果
）和PSA速率（血清PSA水平的年变化率:PSAV），帮助鉴别 良性前列腺增生和前列腺癌
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二、ＰＳＡ的制备
（一）组织和细胞可溶性抗原的粗提 （二）可溶性抗原的提取和纯化 （三）纯化抗原的鉴定
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二、ＰＳＡ的制备
（一）组织和细胞可溶性抗原的粗提
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四、PSA的检测方法
荧光微球
颜色编码的微球
每种微球的地址由两 种红色荧光颜料的掺 入比例唯一决定
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四、PSA的检测方法
紫 色 染 色 浓 度 逐 渐 增 大
红色染料浓度逐渐增大
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四、PSA的检测方法
1.组织匀浆的制备—— 高速捣碎组织法
2.细胞的破碎——冻融法
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二、ＰＳＡ的制备
（二）可溶性抗原的提取和纯化---聚乙二醇沉淀法
通常选用分子量为2000-6000的PEG，蛋白质分子量越大， 沉淀所需PEG浓度越低
（三）纯化抗原的鉴定 分子量的鉴定方法--- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
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四、PSA的检测方法
２．仪器与试剂
Roche Cobas601电化学发光分析仪
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Array- ELISA原理试剂盒
四、PSA的检测方法
3.方法：------双抗体夹心法
经生物芯片阅读仪分析处理,可同时获得多项指标定量检测结果
前列腺特异性抗原（PSA）的检测
目录
一 、
二 、 三 、 四 、
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PSA简介
PSA的制备
抗血清的制备
PSA的检测方法
一、 ＰＳＡ简介
• 前列腺特异性抗原（Prostate specific antigen，PSA）
是由前列腺上皮细胞合成分泌至精液中，是精浆的 主要成分之一。
19世纪60年代末，Hare发现，在前列腺液及精液中含有一种分
子量大约34000的精液特异性蛋白质
前列腺液中以有活性的游离形式（ f-PSA ）存在，血清中的
PSA主要以结合形式存在，通常以f-PSA与结合PSA的和，总 PSA（t-PSA）代表血清总的PSA水平。
百度文库
临床上常用血清 PSA 密度（ PSA 与前列腺体积的比值 :PSAD
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三.抗血清的制备
（一）选择免疫动物---雄性成年小鼠 （二）免疫方法----皮下注射 （三）动物采血法----断尾采血法
（四）抗血清的纯化---亲和层析法
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四、PSA的检测方法
（一）化学发光法
（二）放射免疫法
（三）电化学发光免疫分析法 （四）Array-ELISA 法 （五）Luminex液相芯片
捕获抗体-抗原-检测抗体夹心复合物
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四、PSA的检测方法
检测原理
样本检测区
红光用于鉴定微球
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绿光用于检测荧光信 号的强弱
四、PSA的检测方法
２．仪器与试剂
试剂： 仪器
Luminex100 液相芯片检测仪
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四、PSA的检测方法
1.实验原理
捕获分子
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待测分子
报告分子
四、PSA的检测方法
捕获微球
聚苯乙烯材料，大小均一，直径5.6 um 标记了两种荧光染料，每种染料的浓度有 10个梯度，通过调整两种染料的比例可以获 得100种不同染色的微球 标记了针对检测物的捕获分子作为探针
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四、PSA的检测方法
Luminex技术与ELISA方法
高通量检测：用微量标本进行多个指标检 测 比ELISA的灵敏度高100-10000倍
重复性好
操作简便、省时省力
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荧光聚苯乙烯球 96孔滤过板 ELISA PSA试剂盒 抗PSA单克隆抗体 5G6(ab10186)和 抗PSA单克隆抗体
ACS180化学 发光免疫分析仪
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四、PSA的检测方法
3.方法：
微球的交联
藻红蛋白标记二抗
Luminex液相芯片检测
绘制标准品曲线,并建立线性方程
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四、PSA的检测方法
1.实验原理
Array-ELISA技术平台主要包含3项技术:酶促化学发光技术、 现代微阵列技术以及低温电荷耦合器（CCD)成像技术。 原理是在保证相互无干扰的前提下,多种特异性的生物活性物 质以特定的微阵列形式排列于每个微孔板板孔内,待血清或血浆中 抗体/抗原与包被抗原/抗体特异性结合后,再与酶标抗体结合形成 免疫复合物,加入发光液,经生物芯片阅读仪分析处理,可同时获得 多项指标定量检测结果
）和PSA速率（血清PSA水平的年变化率:PSAV），帮助鉴别 良性前列腺增生和前列腺癌
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二、ＰＳＡ的制备
（一）组织和细胞可溶性抗原的粗提 （二）可溶性抗原的提取和纯化 （三）纯化抗原的鉴定
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二、ＰＳＡ的制备
（一）组织和细胞可溶性抗原的粗提
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四、PSA的检测方法
荧光微球
颜色编码的微球
每种微球的地址由两 种红色荧光颜料的掺 入比例唯一决定
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四、PSA的检测方法
紫 色 染 色 浓 度 逐 渐 增 大
红色染料浓度逐渐增大
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四、PSA的检测方法
1.组织匀浆的制备—— 高速捣碎组织法
2.细胞的破碎——冻融法
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二、ＰＳＡ的制备
（二）可溶性抗原的提取和纯化---聚乙二醇沉淀法
通常选用分子量为2000-6000的PEG，蛋白质分子量越大， 沉淀所需PEG浓度越低
（三）纯化抗原的鉴定 分子量的鉴定方法--- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
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四、PSA的检测方法
２．仪器与试剂
Roche Cobas601电化学发光分析仪
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Array- ELISA原理试剂盒
四、PSA的检测方法
3.方法：------双抗体夹心法
经生物芯片阅读仪分析处理,可同时获得多项指标定量检测结果
前列腺特异性抗原（PSA）的检测
目录
一 、
二 、 三 、 四 、
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PSA简介
PSA的制备
抗血清的制备
PSA的检测方法
一、 ＰＳＡ简介
• 前列腺特异性抗原（Prostate specific antigen，PSA）
是由前列腺上皮细胞合成分泌至精液中，是精浆的 主要成分之一。
19世纪60年代末，Hare发现，在前列腺液及精液中含有一种分
子量大约34000的精液特异性蛋白质
前列腺液中以有活性的游离形式（ f-PSA ）存在，血清中的
PSA主要以结合形式存在，通常以f-PSA与结合PSA的和，总 PSA（t-PSA）代表血清总的PSA水平。
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临床上常用血清 PSA 密度（ PSA 与前列腺体积的比值 :PSAD
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三.抗血清的制备
（一）选择免疫动物---雄性成年小鼠 （二）免疫方法----皮下注射 （三）动物采血法----断尾采血法
（四）抗血清的纯化---亲和层析法
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四、PSA的检测方法
（一）化学发光法
（二）放射免疫法
（三）电化学发光免疫分析法 （四）Array-ELISA 法 （五）Luminex液相芯片