马铃薯多酚氧化酶的提取与褐变的条件与抑制

《马铃薯多酚氧化酶的提取与褐变的条件与抑制》

实验时间：2010年11月17日12:30-17:10

实验目的：我们希望探究马铃薯切开后为何会变色及如何抑制。于是我们决定尝试提取多酚氧化酶并研究其褐变的条件。

实验原理:我们通过3组实验，提取粗酶液，通过对比不同条件下粗酶液的颜色变化来探究多酚氧化酶的活性。

实验过程：

一、提取粗酶液

1．取10.0g 洗净去皮的马铃薯块茎，切碎，放入研钵中。

2．加约15ml的磷酸缓冲液研磨成匀浆。

3．匀浆后4层纱布过滤，得到一次过滤粗酶液。

二、进行对比试验

1.在第一次获得的粗酶液中，我们为了熟悉试验仪器，将粗酶液在离心机中以4000rpm离心10min，得到棕黄色液体，在容器底部有白色沉淀。将离心后上层清夜倒入1号试管，20分钟后棕黄色液体变为深棕色。一个小时后无明显变化，4.5小时后发现上层液体出现黑色颗粒。

2.第二次我们仅将粗酶液离心3min，这是为了防止粗酶液在离心过程中反应，影响后续实验，离心过后粗酶液无变色，分别将试液倒入4号5号试管。将4号试管在酒精灯上煮沸后静置，将5号试管在酒精灯上加热1分钟后静置。此时两个试管均较浑浊，10分钟后两个试管均出现部分沉淀，20分钟后4号试管分成上下两层，上层透明，下层为白色沉淀。5号试管分成上中下三层，上层为白色絮状物，中层透明，下层为白色沉淀。40分钟试管后无变化。说明加热可以抑制多酚氧化酶。

3.第三次同第二次离心3min后将粗酶液加入8.2.7.3.6号试管，将2号试管加入较多氢氧化钠溶液，7号试管加入较少氢氧化钠溶液，在3号试管中加入较少稀盐酸，在6号试管中加入试管稀盐酸，8号试管不做处理进行对照。

4.5小时后8号试管中液体变为灰色，上层出现极细的黑色颗粒。2号试管中液体变为棕黑色，上层出现极细的黑色颗粒，下层较透明。7号试管中液体变为灰色，上层出现极细的黑色颗粒。3号试管中液体变为棕灰色，上层出现极细的黑色颗粒比下层棕色深。号试管中液体变得极为浑浊，不透明，无沉淀分层现象，为白色。

4.最后我们进行了一次验证实验，将4块马铃薯切为1cm×1cm×1cm大小的方块。分别在酒精灯上加热，滴加氢氧化钠溶液后用纸吸干

高一（17）班李罡陈帆影张文祥

2010年11月17日