实验切片和方法

红细胞计数法：

一．方法与步骤

1. 用2ml定量吸管吸2ml稀释液于小试管中

2. 吸血10微升吹入小试管中，摇匀

3. 盖玻片盖于计数室上

4. 充血于计数池内

5. 静止3min

6. 镜检计数R×10000＝红细胞数/mm3

注意事项：

1. 数上不数下，数左不数右

2. 所用器材要清洁、干燥、

3. 吸血前药混匀

4. 充液无气泡

二．小鼠石蜡切片的制作

材料和用具

小白鼠

95%及无水乙醇固定剂蛋白甘油染色液盐酸乙醇二甲苯切片石蜡中性树胶

氨水。

解剖刀一套单面刀片切片刀切片机载玻片盖玻片标本瓶、烧杯、量筒、漏斗、染色缸、树胶瓶、乙醇灯、毛笔、绘图纸、滤纸、标签纸、熔蜡箱（或恒温箱）、展片台（或烫板）、小木块、蜡带盒、烤片盒、切片托盘、显微镜。

切片制作步骤

（1）取材：将小白鼠脱臼处死，打开腹腔，用锐利的刀片切取小块组织，组织块的大小以厚度不超过5mm为宜。

（2）固定：用4%甲醛溶液固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。

（3）冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。

（4）脱水：70%酒精（1.5h）→80%酒精（1.5h）→95%酒精I（1.5h）→95%酒精II（1.5h）→无水乙醇Ⅰ（1.5h）→无水乙醇Ⅱ（1.5h）

（5）透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ（1h）,是组织达到透明为止。

（6）浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。

石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h）→石蜡III（1h）

浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片

的质量。

（7）包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。

（8）切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成4~7-8μm的石蜡带。

（9）贴片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。

（10）烤片：将粘好的载玻片置于50℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。

（11）苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。

①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10min。

②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min

③染色：

A将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精染液中10~30min，使核着色

B用自来水洗去切片上残余的染液

C用盐酸乙醇分色数秒钟

D入1%氨水或自来水浸洗，使切片颜色呈蓝色

E在蒸馏水中浸片刻

F切片依次入70%、80%和90%的乙醇，各历时1~2min

G入伊红染液，染2~5min，使细胞质着色

（12）脱水：切片依次入95%乙醇I、95%乙醇II、无水乙醇I、无水乙醇II，各停1~5min （13）透明：切片入1：1无水乙醇与二甲苯、二甲苯I、二甲苯II，各停1~5min

（14）封固：将切片从二甲苯II取出，擦去材料周围的二甲苯，在材料中央滴一小滴中性树胶，然后盖上盖玻片。切片封好后，待树胶干燥，贴上标签，写明切片名称，即可观察。