萌发菌液体菌种生产试验

萌发菌液体菌种生产试验

刘益清2

湖南省汉寿县龙阳镇大杨社区

萌发菌主要用于天麻生产中蒴果种子的萌发生长，长期以来都是采用固体方法生产菌种，菌丝生长速度慢、周期长；我们利用100L发酵罐进行了萌发菌液体菌种的生产试验，现将情况介绍如下。

—材料和方法

1.1 母种：使用普通PDA加富培养基。

1.2 摇瓶菌种：配方a 马铃250克、葡萄糖20克、蚕蛹粉4克、磷酸二氢钾1.5克、硫酸镁1克、VB110ug、水1000ml。配方b 在配方a的基础上加麸皮50克。配方c 在配方a的基础上加麸皮100克。每个1000ml摇瓶装600ml培养液，121℃灭菌40′，无菌接入母种3-5块，24℃下静置培养4d，再磁力搅拌培养6-7d。测量菌丝生物量的方法采用静置2hr、观察菌丝沉积物占液体总体积的方法。

1.3 发酵罐培养液体菌种

1.3.1 培养液配方：根据摇瓶试验而确定的配方为：玉米粉1%、葡萄糖2%、麸皮1%、蛋白胨0.3%、磷酸二氢钾0.15%、硫酸镁0.1%、VB1 10mg/L，植物油0.3%，ph自然。生产中玉米粉越细越好，麸皮用布袋包好放入罐中煮至80-90℃（高海拔地区可以到95℃）保温20-30′后取出，开空气压缩机吹动液体，再加入调成浆的玉米粉，吹约10′待玉米粉糊化不会再结块时停止吹气，加入其它成分进行高压灭菌40′，冷却至24-25℃无菌接入摇瓶菌种（本次接种量为0.75%V/V），通气培养7天。用接种枪将菌种接入固体培养基上。

1.4 萌发菌固体培养基配方

a 树叶68.5%、麸皮15%、粗木屑15%、石膏1%、糖0.5%、PH自然。

b 麦粒

69.5%、木屑30%、石膏1%、糖0.5%（用于室内纯密环菌+萌发菌+天麻种子袋栽试验）

二试验结果

2.1 摇瓶培养中止时各配方菌丝量为：配方a10%左右、配方b85%左右、配方c95%，配方a菌量太小不能使用、配方c菌量大但菌丝呈糊状，液体不清，不易观察，使用起来不放心，配方b菌球在1-2mm大小，液体清澈为较好配方，我们用此瓶作发酵罐用菌种。

2.2 发酵罐培养结果

接种量0.75%、培养温度24-25℃、通气量1：0.5-1（V：V），在发酵罐中的培养时间以7d为最好，菌球大小为0.5-2mm、密度1000-1200个/ml、菌丝粗壮、洁白。

2.3 接种在固体培养基上24hr内菌丝萌发生长，随接种量的加大菌丝满瓶袋的时间缩短，最快10d可以长满菌丝，

三小结

用液体方法生产萌发菌是可行的，在萌发菌液体培养基中添加麸皮有利于菌丝生长，添加麸皮一方面可以平衡营养，另一方面可能添加麸皮后液体的ph值在灭菌后下降较多，对菌丝生长有利。