HeLa细胞株
hct 116、hela、MEFs细胞参数介绍.doc
HELAHeLa (ATCC® CCL-2™)ATCC：Hela细胞，源于黑人31岁女性，子宫颈腺癌，是一种附着型上皮细胞，要求存于液氮中。
These cells are a suitable transfection host.This cell line can be used to screen for Escherichia coli strains with invasive potential.Biosafety Level：（2 [Cells contain human papilloma virus]Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.）Complete Growth Medium：The base medium for this cell line is ATCC-formulated Eagle's Minimum Essential Medium, Catalog No. 30-2003. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%.Subculturing（接种）：Volumes used in this protocol are for a 75 cm2flask; proportionally reduce or increase amount of dissociation medium for culture vessels of other sizes. CorningT-75 flasks (catalog #430641) are recommended for subculturing this product.1.Remove and discard culture medium.2.Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove alltraces of serum which contains trypsin inhibitor.3.Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an invertedmicroscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting forthe cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37C to facilitate dispersal.4.Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.5.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.6.Incubate cultures at 37C.Subcultivation Ratio:A subcultivation ratio of 1:2 to 1:6 is recommendedMedium Renewal:2 to 3 times per weekCryopreservation Freeze Medium: Complete growth medium supplemented with 5%(v/v) DMSOStorage Temperature: Liquid nitrogen vapor phaseCulture ConditionsAtmosphere: Air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%Temperature: 37°C论坛：贴壁生长，铺路石状，长得快，2-3天传代一次，传代不及时会造成老化的细胞堆积，看起来很脏。
Hela细胞简介
Hela细胞系（HeLa cell line）是生物学与医学研究中使用的源自一位名叫Henrietta Lacks美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞系。
这名美国妇女在1951年死于该癌症。
为了让Lacks保持匿名，此细胞株原宣称是依「Helen Lane」命名。
海拉细胞系被视为「不死的」（即，不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。
此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。
海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知Lacks本人也未得到她的许可），并用作癌症细胞模型（model cancer cells）研究。
海拉细胞系也被用作研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。
海拉细胞系是被人类乳突状瘤病毒第18型（Human Papillomavirus 18）转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。
已证实海拉细胞系难以控制。
此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物（cell culture），干扰生物学的研究。
污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。
据说有相当数目的体外细胞系（in vitro cell lines）其实就是海拉细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的海拉细胞系污染物取代了。
有学者认为此细胞系是一新的物种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。
在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。
科学研究史在Hela出现之前，科学家已经实现了某些动物细胞的人工培养，但尚未成功培养人类细胞；人类细胞由于分裂次数有限，难以实现长期留存。
肿瘤细胞HeLa以其顽强的生命力和繁殖力成为科学家获得的第一个人类细胞系。
据估计，全世界用于研究而繁育的Hela细胞的总数目已经远远超过了Lacks女士本人所有的细胞数，甚至有人认为可以将HeLa细胞看做一个新的物种。
截至2009年，全世界已经有超过60000篇科学论文是基于对HeLa细胞的研究，并且这一数字还以每月300篇的速度不断增长着。
细胞实验方案
HALA细胞工程实验培养方案背景知识：Hela Cells是细胞学与医学研究中使用的一种细胞，源自一位美国妇女海莉耶塔·拉克斯（Henrietta Lacks）的子宫颈癌细胞的细胞系。
这名美国妇女在1951年死于该癌症。
为了让拉克斯保持匿名，此细胞株原宣称是依“Helen Lane”命名。
HeLa细胞系被视为“不死的”（即不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。
此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。
海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知拉克斯本人也未得到她的许可），并用作癌症模式细胞研究。
HeLa细胞系也被用作研究细胞信号传导。
海拉细胞系是被人类乳突病毒第18型转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。
已证实海拉细胞系难以控制。
此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物，干扰生物学的研究。
污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。
据说有相当数目的体外细胞系其实就是HeLa细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的HeLa细胞系污染物取代了。
实验原理：(1)细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。
目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
(2)体外培养过程中，随着培养时间的延长，细胞的分裂繁殖，培养物越来越大长满培养空间并因接触抑制而生长缓慢，此时须将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿中，这个过程称为传代（passage）或再培养（subculture）意义：①细胞生长、增殖的需要；②扩大培养，获得大量同种细胞，为后续研究做准备。
宫颈癌Hela细胞株中Bcrp1+表型细胞的侵袭力
检验， 计量资料行 t 检验。
+
Hela 细胞 （ 上海中科院细胞研究所 ） ， Bcrp1 及 2 2. 1 结 果 宫颈癌 Hela 细胞系中 Bcrp1 的表达情况
－
Bcrp1 直标抗体、 Matrigel、 Transwell （ BD 公司 ） ， 标准胎牛血清 （ 灏洋生物公司） ， 高糖 DMEM 培养基、 胰蛋白酶（ Gibco 公司 ） ， 庆大霉素注射液（ 天津药业） ， 青链霉素（ 华北制药） 。 1. 2 细胞免疫荧光标记及流式细胞仪分选
1
+ + + +
肿瘤干细胞学说把肿瘤看作是一种干细胞疾病 ， 虽然目前 此学说的证据并不是很多 ， 人们对此也持有不同的看法 ， 但现 有的事实仍然具有一定的说服力 。 它揭示了在临床实践中一 — —就是肿瘤干细胞 味杀伤肿瘤细胞也不能根治肿瘤的原因 — 对作用于细胞周期或快速分化细胞的药物 往往处于休眠状态， 本身就有耐药性； 同时， 肿瘤干细胞高表达 ABC 转运蛋白， 可 保护细胞免受外源性化学物质的破坏 泵出细胞毒性物质，
+ － 和侵袭能力， 为了明确 Bcrp1 表型细胞与 Bcrp1 表型细胞侵
0. 02% EDTA 消化 收 集 Hela 细 胞； 加 入 单 克 隆 抗 体 PEBcrp1 300 目网过 20 μl /10 细胞于总体积 100 μl 的染色缓冲液中， 滤， 流式细胞仪检测、 分选。以上步骤均无菌操作。 1. 3 Boyden 体外重组基底膜侵袭试验 Hela 细胞侵袭重组
The research of the ability of migration and invasion of Bcrp1 + Hela cells ZHANG SongLing， ZHANG HaiPeng，WANG JianLiu. Department of Obstetric and Gynecology，Peking University People's Hospital， Peking 100044 ，China 【Abstract】 Objective To identify the ability of migration and invasion of Bcrp1 + phenotype Hela cells and in order to make sure if Bcrp1 is the marker of cervical cancer stem cells or not. Methods Methods Flow cytometry was used to isolate the Bcrp1 + cells in Hela cell line ，tumor cell migration and invasion were measured by Boyden chamber to identify the ability of Bcrp1 + phenotype Hela cells. Results Hela cells contained 7. 1% Bcrp1 + cells. The number of invasive cells under the chamber of Bcrp1 + cells was 99 ʃ 14. 2 ，the depth of invasion through matrigel was （ 365. 61 ʃ 52. 32 ） μm. The number of invasive cells under the chamber of Bcrp1 － cells was 57 ʃ 13. 3 ，the depth of invasion through matrigel was （ 301. 04 ʃ 53. 81 ） μm. The difference between the two groups was significant. Conclusions Bcrp1 + cells have more migration and invasion ability than Bcrp1 － cells. Bcrp1 might be the marker of cervical cancer stem cells. 【Key words】 Cervical cancer； Bcrp1 ； Cancer stem cells 肿瘤干细胞学说为肿瘤治疗开拓了新的思路 ， 现已在急性 髓性白血病、 乳腺癌、 脑胶质瘤等肿瘤组织中成功分离出了肿 瘤干细胞， 但国内外尚未见宫颈癌干细胞成功分离的报道 。 因 此， 本实验 对 表 达 肿 瘤 干 细 胞 通 用 标 记 物 乳 腺 癌 耐 药 蛋 白 （ breast cancer resistance protein 1 ， Bcrp1 ） 的宫颈 Hela 细胞展开 研究， 观察其是否具备较强的侵袭及转移能力 。 1 1. 1 材料与方法 材料
《2024年HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关联》范文
《HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关联》篇一一、引言HeLa细胞作为人类癌细胞株的代表，具有特殊的生物学特性，其传代能力之强、生长速度之快，使得它成为科研领域中广泛应用的细胞模型。
随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因组和转录组会发生动态变化，这些变化与细胞的生物学行为密切相关。
本文旨在探讨HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关系，以期为癌症研究和细胞生物学提供更多有价值的理论依据。
二、HeLa细胞的基因组变化在HeLa细胞长期传代过程中，基因组的变化主要表现在以下几个方面：1. 遗传不稳定性的增加：随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因组会逐渐发生突变和染色体畸变，导致遗传不稳定性增加。
这些突变和畸变可能影响基因的表达和功能，从而影响细胞的生物学行为。
2. 特定基因的突变：在传代过程中，某些特定基因可能会发生突变，如肿瘤相关基因、凋亡相关基因等。
这些突变可能导致细胞增殖、凋亡等生物学过程的改变，从而影响细胞的生长和分化。
3. 基因表达谱的改变：随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因表达谱也会发生变化。
这种变化可能是由于基因组结构的变化或表观遗传学修饰的影响所导致的。
这些变化可能导致细胞的功能和表型发生改变。
三、HeLa细胞的转录组变化转录组是指特定细胞或组织在某一状态下所有转录产物的总和。
在HeLa细胞长期传代过程中，转录组的变化主要表现在以下几个方面：1. 转录因子的变化：随着传代次数的增加，HeLa细胞的转录因子可能会发生变化。
这些变化可能影响基因的表达和调控，从而影响细胞的生物学行为。
2. 差异表达基因的增加：在传代过程中，某些基因的表达水平可能会发生变化，导致差异表达基因的增加。
这些差异表达基因可能参与细胞的增殖、凋亡、迁移等生物学过程。
3. 基因表达的时序变化：随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因表达可能会发生时序变化。
这种时序变化可能导致细胞在某一时刻具有特定的功能或表型，从而影响细胞的生物学行为。
HeLa_细胞内及组织内纳米碳点含量测定
引用格式：毕禄莎, 汪丹, 李昊, 等. HeLa 细胞内及组织内纳米碳点含量测定[J]. 中国测试，2023, 49(11): 76-82. BI Lusha, WANG Dan, LI Hao, et al. Measurement of nano-carbon dots in HeLa cells and tissues[J]. China Measurement & Test, 2023, 49(11): 76-82.DOI: 10.11857/j.issn.1674-5124.2023040035HeLa 细胞内及组织内纳米碳点含量测定毕禄莎1， 汪 丹2， 李 昊3， 赵梦凡4(1. 西南医科大学附属医院药学部，四川 成都 646000; 2. 成都大学，四川 成都 610106;3. 西南医科大学附属医院临床研究中心，四川 成都 646000;4. 西南医科大学附属医院乳腺外科，四川 成都 646000)摘 要: 为解决纳米碳点无对照品而难以定量的缺陷，该文利用碳点稳定的荧光性，以纯荧光化合物为“替代对照品”，建立碳点的细胞内及组织内含量测定方法。
将具有良好成像性能的碳点作为候选碳点，以甲酚紫、罗丹明6G 为对照品，建立候选碳点及其叶酸偶联物HeLa 细胞内以及生物组织中的含量测定法及其方法学验证。
结果表明，三种候选碳点DCCDs 、ACUCDs 、UCPG-Fe 及其叶酸偶联物在HeLa 细胞内和组织内，均在一定浓度范围内具有良好的线性关系（r 2=0.993 3~0.999 2），平均回收率为86.61%~102.5%，精密度RSD 在2.82%~3.91%之间。
以此分别检测出细胞内DCCDs 和FA-DCCDs 在摄取时间3 、6、9 、12 h 的纳米碳点含量在0.125 5~0.266 5 μg/mL 之间及0.891 7~1.239 μg/mL 之间；肝、肾组织内DCCDs 在摄取时间20、30、40、50、60、70 min 的纳米碳点含量分别在1.132~1.756 μg/mL 之间及0.335 8~0.704 3 μg/mL 之间。
05实验五 宫颈癌HeLa细胞的培养nj(2)改
3、通入CO2，使液体变为金黄色，说明 培养基完全溶好。 4、溶好以后置于超净台中进行0.22um 滤过除菌，分装至试剂瓶中。 5、瓶口封好，-20℃或4℃贮存。
（三）小牛血清的处理
新买的新生小牛血清一定要灭活；
将新生小牛血清不开封置于56℃水浴 锅中30min,期间要不时轻轻晃动，使
2．谷氨酰胺储备液（200mM）：
1.5g的谷氨酰胺溶于50ml3DW中 （30mg/ml=200mM),0.22um过滤至1.5ml 离心管中。 -20℃贮存。
注：200mM=200mmol/L（毫摩尔每升)
3.饱和NaHCO3的配制
每组称取10g的NaHCO3溶于200ml 3DW 中，过滤除菌后分装于50ml试剂瓶。 4℃保存
七、思考题：
血清在细胞培养中有何作用？
为什么配制培养基之前要反复处理配制用水
并要事先高压处理？
配制培养基时调节pH值的目的是什么？
实验五 宫颈癌HeLa细胞株培养
二、培养基的配制
一、实验目的
熟练掌握RPMI 1640培养基的配制方法。
二、实验原理
组织培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血 清配制而成。合成培养基有商品出售，它是根据细胞 生长的需要按一定配方制成的粉状物质。其主要成分 是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅 助物质。它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。 小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细 胞生长所必需的生长因子、激素、贴附因子等，是合 成培养基所无法替代的。此外它还能中和有毒物质的 毒性。
受热均匀，防止沉淀析出。
已灭活的血清贮存于4℃。
细胞株和细胞系
细胞株和细胞系摘要“细胞株”和“细胞系”是动物细胞工程中常用的两个名词，但由于概念不清，使用混乱，为中学生物教学带来不必要的困惑。
本文拟就这两个名词的历史渊源和现实应用进行讨论。
关键词细胞株细胞系1 名词的由来细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela 系称为“株”。
1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群，细胞系（cell line）由此产生，之后这两个名词长期混用。
即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后，到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的，不仅在商品名中混用，在专业文献中亦十分严重。
2 名词使用的现实情况2．1 中学教材定义在人教版高中生物（选修）全一册第70页中，细胞株被定义为经原代培养的组织细胞，培养到第10代左右，度过第一次死亡危机后的细胞群，这种细胞的遗传物质没有发生改变；细胞系则被定义为可以度过第二次死亡危机，传代培养到40~50代的细胞，这部分细胞的遗传物质发生了部分改变并且细胞带有癌变的特点，这种细胞在适宜条件下无限传代。
2．2 文献定义由新鲜组织制成的细胞培养物称原代细胞，这种细胞经首次传代成功后的细胞称做细胞系，可泛指一般可能传代的细胞，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成，这种细胞世系含有多种细胞类型。
若用胰蛋白酶等将原代细胞消解分散后，再培养一代，称次代培养。
如果不能继续传代或传代有限，可称为“有限细胞系（finite cell line）”或“已建立的细胞系（established line）”。
能够连续传代的细胞叫做“连续细胞系或无限细胞系（infinite cell line）”。
Hela细胞的研究及对癌症研究的贡献
当初的难题是：那些癌细胞总是很快死掉，即使有少量的“幸存者”，它们也根本不会
生长无法满足研究的需要。
2
2、Hela cells的特点
Ⅰ、可以连续传代
Ⅱ、细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去
Ⅲ、此细胞系跟其它癌细胞相比，增殖异常迅速
Ⅳ、感染性极强
Fig.3 衰老的问题
Hela细胞生长奇快，甚至超越一般癌细胞。Hela细胞经历细胞分裂时可维持端粒酶活 性以维持瑞粒长度，一般细胞的端粒会随着老化而变短，终至细胞死亡。海乐细胞利用此
In A State Strain Of Human Malignant Epithelial Cells (Strain Hela)Derived From An Epidermoid Carcinoma Of The
Cervix”.[J]Journal of Experimental Medicine . 1953 ,97 (5): 695–710.
4
4、克隆技术的奠基
Fig.5 A、Typical clones produced from single HeLa cells growing on glass slides above a feeder layer ( X 1.7). B、Photomicrograph
of a typical clone (X50).[2]
Fig.4 A Somaliboy is injected with inactivated poliovirus vaccine (Mogadishu, 1993)
当初的研究遇到的难题是，研究已使用外神经系组织与猴子做实验，无法用人体与其他动
物做实验， Jonas Salk首次将脊髓灰质炎疫苗的研究使用到人体体外第一个活细胞Hela用于研究
海拉细胞系
• 2. 贴壁期：
• • •
• 3. 潜伏期：
• 4. 对数生长期： •
• •
血清质量好坏是细胞培养的关键
• 常用血清有胎牛血清、新生牛血 清、小牛血清、兔血清、马血清 等 • 根据牛出生时间和血清采制分离 方法分为： • 1、胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿 刺取血； • 2、新生牛血清：出生12-24小时 新生牛静脉采血； • 3.小牛血清：出生三月龄小牛动脉 采血分离血清； • 其中以胎牛血清质量最好。优质 血清的标准：透明，淡黄色，无 沉淀物，无细菌、支原体、病毒 污染。
细胞的培养
• 传代培养
细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种 到新的培养器皿中。培养细胞的“一代”，不表 示细胞分裂一次，而是指培养细胞从接种到再次 转移培养的过程。在一次传代培养中，细胞能倍 增3-6次。
• 原代培养
取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞 在传代之前称为原代培养。一旦进行传代培养，便 不再是原代培养，而改称为细胞系。
哈拉尔德· 楚尔· 豪森
HPV疫苗——救命的疫苗
近些年，去香港除了旅游和 购物外，又多了个理由，那 就是打“宫颈癌疫苗” （HPV疫苗）。HPV疫苗市场 空前火爆！ 2016年7月18日， 希瑞适 （Cervarix，人乳头状瘤病毒 (HPV)疫苗[16型和18型]）获 得中国食品药品监督管理总 局的上市许可，成为国内首 个获批的预防宫颈癌的HPV 疫苗，预计到2017年初才能 真正上市。
•
她的细胞，将永远造福于人类
• 1951年10月4日，由于癌症扩散 到了全身，拉克丝病逝于约翰· 霍 布金斯大学医院隔离病房。拉克 丝的遗体，被埋葬于自家的庭院， 连墓碑也没有树立。但是海拉的 细胞至今依然存活，继续为人类 健康发挥着积极作用。 • 2010年3月，帕蒂略教授捐款为 拉克丝树立了墓碑。墓碑上镌刻 着这样一行字：“她的细胞，将 永远造胞 (HeLa)的应用
Hela-Luc 细胞使用说明书
Hela-Luc 细胞使用说明书产品基本信息产品货号YC-A012-Luc-P 细胞名称Hela-Luc 细胞形态上皮样,贴壁细胞荧光抗性无荧光，Puro 传代比例1:3~1:6培养体系90%DMEM+10%FBS冻存液体系50%DMEM+40%FBS+10%DMSO半药浓度Puro=1.0µg/ml特殊备注产品验证数据（1）荧光素酶检测流程利用Dual-Luciferase®Reporter Assay System 试剂盒（Promega，Cat：E1910）说明书进行荧光素酶活性检测，并在酶标仪（BioTek，型号：Synergy LX）的化学发光模块下进行萤火虫荧光素酶反应强度读数。
图1荧光素酶活性检测流程（2）荧光素酶检测结果样品复孔1复孔2复孔3平均值表达倍数Hela-Luc566931588273636864597356.000653.324 Hela7441252747914.333Luciferase稳转细胞株介绍基因报告系统广泛应用于真核生物基因表达和细胞生理学的研究，是提高实验准确度的常用方法。
荧光素酶（Luciferase）是以荧光素（luciferin）或脂肪醛（firefly aldehyde）为底物来检测荧光素酶活性的一种常见基因报告系统，因其具有方便快捷、灵敏度强、成功率高等优点，在基因表达的研究中得到广泛应用。
所供Luciferase稳转细胞株采用慢病毒法构建，除稳定高效地表达luciferase基因外，还具有特异性强、成像质量高、发光强度可精确定量等优点，可实现包括启动子活性研究、哺乳动物细胞双杂交实验以及活体动物成像实验等多方面的灵活应用。
图2Luciferase稳转肿瘤细胞株体内成像过程细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在100X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。
(完整word版)稳定细胞株筛选实验
稳定细胞株筛选实验本实验使用过表达human Oct-4—EGFP的慢病毒感染HeLa细胞。
该病毒的表达框为pLenti—CMV-Oct—4-EGFP-3FLAG—PGK—Puro： CMV启动子驱动Oct-4—EGFP基因的表达，同时由PGK启动子驱动puromycin抗性基因的表达。
在感染HeLa细胞72h后，通过加入并维持2μg/μL的puromycin杀死未被有效感染的细胞。
从而在puromycin药物的维持下最终获得Oct-4-EGFP稳定表达的混合稳定株。
关键词:Oct—4—EGFP,稳定细胞株，HeLa，慢病毒一、实验原理外源基因在细胞中的表达可分为两大类，一类是瞬时表达，一类是稳定表达(永久表达）.前者外源DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，虽然可以达到高水平的表达，但通常只持续几天。
后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。
建立稳定细胞株，一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶细胞进行筛选。
最常用的抗性标记基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素(puromycin），常用Hygromycin B、G418和puromycin进行选择性筛选.传统的稳定株筛选方法需要通过外源基因的瞬时转染后对靶细胞进行筛选，最终获得从单一细胞扩增起来的稳定细胞株, 该方法阳性率低，周期长，工作量大。
慢病毒是一种RNA病毒，携带的外源基因在病毒感染细胞后需要逆转录为DNA，再整合到宿主细胞基因组以后才能表达。
利用慢病毒必须整合到宿主基因组的特性来筛选稳定株的方法克服了传统方法的弊端，可以在短时间内获得高效率的稳定细胞株。
筛选得到的细胞或者可稳定表达目的蛋白,用于蛋白的扩增和富集；或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。
[晶莱生物]二、实验目的通过慢病毒感染配合药物筛选的方法获得稳定表达Oct-4-EGFP的HeLa稳定细胞株。
两种方法建立人宫颈癌细胞顺铂耐药细胞株及其r耐药性的评价
两种方法建立人宫颈癌细胞顺铂耐药细胞株及其r耐药性的评价陈晶;李祎博;邓金桂【摘要】目的:通过两种方法建立顺铂耐药的人宫颈癌细胞耐药细胞株,对其耐药性进行分析.方法:用小剂量诱导法和大剂量冲击法分别建立Hela细胞顺铂耐药细胞株.比较正常Hela细胞株和两种方法建立的顺铂耐药Hela细胞株的RI指数和相关耐药基因表达情况,评价耐药细胞株是否成功建立.绘制三种细胞的生长曲线,计算比较三种细胞的细胞倍增时间.结果:成功用两种方法建立了Hela细胞顺铂耐药细胞株,分别命名为Hela/DDP细胞株和Hela/DDPs细胞株,其耐药相关基因的表达、RI指数、细胞倍增时间表达均与亲代Hela细胞有明显差异.结论:成功用两种方法建立两株Hela细胞耐药细胞株,分别属低度或中度耐药.【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2017(029)013【总页数】4页(P50-52,62)【关键词】Hela细胞;顺铂;耐药;小剂量法;大剂量法【作者】陈晶;李祎博;邓金桂【作者单位】沈阳医学院附属中心医院,辽宁沈阳 110024;沈阳医学院附属中心医院,辽宁沈阳 110024;沈阳医学院附属中心医院,辽宁沈阳 110024【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤，我国每年新发病例为13.2万，约有3万妇女死于宫颈癌。
手术和放疗是宫颈癌的主要治疗方法，但近年来国内外通过基础和临床研究肯定了术前化疗及同步放疗、化疗在宫颈癌治疗中的作用[1,2]。
顺铂是最有效的化疗用单药，是临床上最广泛的抗癌药物之一，抗瘤谱广泛，但其固有的或获得的耐药性又降低了其疗效[3,4]。
通过体外建立顺铂耐药的人宫颈癌耐药细胞株，可为宫颈癌化疗治疗的耐药机制的研究提供基础。
本文通过两种方法建立顺铂耐药的人宫颈癌细胞耐药细胞株，对其耐药性进行分析。
1.1 材料1.1.1 细胞株 Hela细胞株由深圳市人民医院医学中心馈赠。
1.1.2 主要试剂 PRMI 1640培养基，Trizol试剂盒(Invitrogen公司)，顺铂(昆明贵研药业公司)，CCK8试剂盒(日本同仁公司)，DNA提取试剂盒(上海生工公司)，反转录试剂盒miScript II RT Kit(Qiagen公司)，PCR反应试剂盒miScript PCR System(Qiagen公司)，PCR引物(大连宝生物公司)，其他试剂均为国内分析纯。
人宫颈癌获得性放射抗拒细胞株(Hela-R)DNA修复能力的观察
细胞 显 著 增 多 。Ｈｅ ｌ ａ — Ｒ 细 胞 株 放 疗后 ２ ４ ｈ与 ４ ８ ｈ ， 彗 星 尾 长 均 短 于 Ｈｅ ｌ ａ细 胞株 。Ｘ 射 线 照 射 １ ｈ后 ， Ｈｅ ｌ ａ — Ｒ 细胞 株 Ｅ ｄ Ｕ 荧光 强度 为 １ ２ １ ． ３ ２ ±３ ９ ． ６ ７ （ Ｐ ＜０ ． ０ １ ） ， 高 于 Ｈｅ ｌ ａ细胞 株 。结 论
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： １ ６ ７ １ ８ ３ ４ ８ （ ２ Ｏ １ ３ ） １ ２ － １ ３ ７ ０ — ０ ４
Ｏｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ ｔ ｈｅ ＤＮＡ ｒ ｅ ｐ ａ ｉ ｒ ｃ ａ ｐａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ ｃ ｑ ｕｉ ｒ ｅ ｄ ｒ ａ ｄｉ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ｆ ｒ ｏｍ ｈｕ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ Ｌｉ ｕ Ｃｈｅ ｎ， Ｐａｎ ｇ Ｘｕ ｅ ｌ ｉ
（ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｏｎ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｓ ｔ Ｈｏ ｓ ｐｉ ｔ ａ ｌ ， Ｔｈ ｉ ｒ ｄ Ｍｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ｎ ｇ ４ ０ ０ ０ ３ ８ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： ０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ＤＮＡ ｒ ｅ ｐ ａ ｉ ｒ ｃ ａ ｐ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｄ ｉ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ（ Ｈｅ ｌ ａ — Ｒ）ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ
检测由Hela细胞引起的细胞交叉污染的方法及引物[发明专利]
![检测由Hela细胞引起的细胞交叉污染的方法及引物[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4c7d093c77c66137ee06eff9aef8941ea76e4b93.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810252672.X(22)申请日 2018.03.26(71)申请人 福州大学地址 350000 福建省福州市闽侯县上街镇大学城学园路2号福州大学新区(72)发明人 林峻 (74)专利代理机构 福州君诚知识产权代理有限公司 35211代理人 戴雨君(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/686(2018.01)C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01)(54)发明名称检测由Hela细胞引起的细胞交叉污染的方法及引物(57)摘要本发明公开了检测由Hela细胞引起的细胞交叉污染的方法及引物，包括A组引物对和B组引物对，所述方法为：1）以待检细胞培养物上清液作为第一轮PCR模板，以Hela细胞纯培养的上清液作为PCR阳性对照，用A组引物对进行第一轮PCR；2）以第一轮PCR产物作为第二轮PCR模板，用B组引物对进行第二轮PCR；3）琼脂糖凝胶电泳检测第二轮PCR产物，判断待检细胞是否被Hela细胞污染。
本发明耗时短、成本低，灵敏度高，传统的STR鉴定法灵敏度低，在作为污染源的细胞数量低于总细胞数量的10%时，STR无法检测到细胞污染，而本发明灵敏度提高到了1%，是STR的10倍。
本发明无需提取核酸，无需破坏细胞，可以直接检测，是“无损无创”的检测方法。
权利要求书1页 说明书5页序列表1页 附图2页CN 108359746 A 2018.08.03C N 108359746A1.检测由Hela细胞引起的细胞交叉污染的引物，其特征在于：其包括A组引物对和B组引物对，所述A组引物对的序列如下：A组上游引物：5’GGTGCCAGAAACCGTTGAATC 3’；A组下游引物：5’CGTCGGGCTGGTAAATGTTGA 3’；所述B组引物对的序列如下：B组上游引物：5’CAACCGAGCACGACAGGAA 3’；B组下游引物：5’ATTGCTCGTGACATAGAAGG 3’。
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HeLa细胞株
在生物学与医学研究中，HeLa细胞是指源自一名美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞。
这名美国妇女名叫Henrietta Lacks，于1951年死于癌症。
本来为了让Lacks保持匿名，此细胞株宣称是依“Helen Lane”命名。
HeLa细胞株被George Gey分送给众研究单位（而未通知Lacks本人也未得到她的许可），因用作癌症研究而广为流传。
至今已被视为“不死的”，也就是说此细胞株（不同于其他人类细胞）不会老死，而且可以不限次数的分裂下去，而且已被培养出一个不间断的系列。
从1951年至今，Hela细胞已经培养了50多年，分裂了18000次以上仍然没有停止的迹象。
此细胞株即使和其他癌细胞相比，增殖依然异常迅速。
一般两天左右即可长到35000000～40000000个。
然而，由于当初采集细胞时并没有征得患者或家属的同意，HeLa细胞株广泛应用引发了一系列的医学伦理问题。
2009年，Rebecca Skloot将这个具有传奇性的故事编撰成书，书名为《永生的海拉》[1]。
此细胞株被用作“model cancer cells”来研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。
HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒（Human Papillomavirus 18 或HPV18）转型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。
目前已经证实HeLa细胞株难以控制。
此细胞株有时会污染同一实验室的其他细胞培养环境（cell culture），进而影响生物研究。
由于研究人员很少检查已确立的细胞株的本质和纯粹度，因此污染的程度不明。
据说有相当数目的“人造”细胞株其实是HeLa细胞株，也就是说原来的细胞株被一群受到HeLa细胞株污染的快速增殖细胞淹没了。
有的学者已经认为此细胞株其实是一新的品种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。
在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。