药品洁净实验室微生物控制和监测

再用接触碟分别轻压洁净服额头部、前胸部、手肘部(任一边)、膝盖部(任一
边)10秒钟后，盖回上盖，做上标识，标明操作人员代号、取样位置时间。
设备环境表面菌的检测
试验结束清场前检测 用接触碟或棉签擦拭对主要生产操作设备表面、地面和墙面进行取样后立
即对取样位置用消毒液擦拭。
设备表面擦拭样为操作时人员易接触位置，如反应釜釜体、抽滤器外表 面、烘箱门把手等部位。
环境的要求
ISO14644-1:2010 洁净度等级及悬浮粒子要求
洁净度 级别 物理参数 过滤完整 性 气流组织 单向流 监测周期 12个月 检漏试验、 监测周期 24个月 6 非单向流 空气流速 ＞.2m/s 0.2-0.5 监测周期 12个月 换气次数 压差 洁净区与非洁净 区之间压差不小 于10Pa; 不同级别洁净区 之间的压差不小 于5Pa 70-160h-1 监测周期 12个月 30-65% 温度 相对湿度
数据分析及偏差处理
⒈对日常环境监测的数据进行分析和回顾
⑴通过收集的数据和趋势分析；
①总结和评估无菌生产环境或洁净实验室是否受控， ②评估警戒限度和纠偏限度是否适合及所采取的纠偏措施是否正确。 ⒉正确评估微生物污染 不仅仅关注微生物数量，更应关注微生物污染检出的频率
①在一个采样周期内同一环境中多点发现污染，预示风险增加，应仔细评估。
浮游菌检测
准备及检测程序
培养皿直径为90mm，培养皿的有效期为14天。
TSA（胰酪大豆琼脂） 检测程序 按仪器说明书规定程序进行操作。 注意点 使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min。
每个点采集结束后，都需要等消毒剂蒸发之后再检测下个点。
表面菌检测
检测范围 环境、设备和人员采用接触碟或棉拭子擦拭
29000 不作规定
环境的要求 ISO14644-1:2010 洁净度等级及悬浮粒子要求
ISO等级序数 （N） 1 2 3 4 5 0.1μ m 10 100 1000 10000 100000 0.2μ m 2 24 237 2370 23700 10 102 1020 10200 0.3μ m 0.5μ m 1μ m 5μ m
4 35 352 3520 8 83 832 29
6
7 8 9
1000000
237000
102000
35200
352000 3520000 35200000
8320
83200 832000 8320000
293
2930 29300 293000
GMP对洁净环境微生物监测动态标准
中国（2010）、欧盟、WHO
采样及监测
空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌的采样点、数量、位置、次数、采样量 、最少平皿数及采样注意事项参见国家标准； GB/T 16292-2010 GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010
洁净室环境 检测
培养基
胰酪大豆胨琼脂（TSA） 细菌、酵母菌和霉菌的生长必要时可加入添加剂
造成高度的污染风险。
警戒限度和纠偏限度
微生物监测警戒限度和纠偏限度的制定 根据历史数据，结合不同洁净区域的标准，采用数理统计方法 ，制定适
当的微生物监测警戒限度和纠偏限度。
一般可将平均值加上2倍的标准差作为警戒限度。 加上3倍标准差作为纠偏限度。
定期回顾评价，如历史数据表明环境有所改善，限度应作出相应调整以反
接触碟法
操作人员出A级区前，在规定房间进行取样。 直径为55mm的凸碟， TSA （胰酪大豆琼脂）。 将充满规定的琼脂培养基的接触碟取样后置规定温度下培养计数 结果以cfu/碟报告。
人员表面菌检测
接触碟 先分别取2只手套五指样，再取额头、前胸、手肘和膝盖样。 打开接触碟盖子，将五指轻轻按于接触碟培养基上10秒钟后，盖回上盖，做 上标识。
②几个点同时有污染的现象可能由不规范采样操作引起。应仔细回顾采样操作 过程。 在污染后的几天对环境进行重新采样是没有意义的，因为采样过程不具有可重 复性
⒊偏差处理 当微生物监测结果超出警戒限度和纠偏限度时，应当按照偏差处理规程进行处理 并采取纠正措施，并进行评估。 重大偏差 关键区域（A级）微生物监测数值若大于15 cfu，应迅速调查原因。
概 述
悬浮粒子数和微生物数控制适用洁净级别控制的实验室。 浮游菌和沉降菌、工作台面和墙壁、表面微生物检测，控制和监测洁 净室微生物污染状况确保药品质量安全及检测结果的准确性。 单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）
悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行监测。
GB/T16292-2010 医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌 的测试方法 - 2010版中国药典
洁净区环境微生物的控制
调查范围 - 无菌生产人员 - 微生物检查人员 - QA/QC人员
报告书
检测结束，由QC及时出具检验报告书报告书 一式两 份，一份附在检验原始记录中，一份发 给车间。
洁净区环境微生物的控制
检验原始记录由质量保证部存档。 附件: ⒈ 微生物检测记录 ⒉洁净区（室）微生物检测报告
按程序通知有关部门。
在开始生产前复测。 人员培训。 当有≥2次超过行动限时采取以下措施；
洁净区环境微生物的控制
确定可能污染微生物的原因并调查样品是独立的还是涉及整个区域，
人员 的水平，健康，技术，清洁程序等。更衣程序房间/洁净空气 装置的HEPA过滤器完整性已进行的过程趋势图中的以前的检测结果 或其他已确定的问题。
映环境实际质量状况。。
洁净环境微生物纠偏限度参考值
浮游菌纠偏限度① cfu/m3
1③ 7 10
洁净度级别
A级 B级 C级
沉降菌纠偏限度（）② cfu /4小时②
1③ 3 5
D级
100
50
注： ①数据表示建议的环境质量水平，也可根据检测或分析方法的类型确定 微生物纠偏限度标准。 ②可根据需要增加沉降碟数。 ③A级环境的样品，正常情况下应无微生物污染。
棉签擦拭法
用于不规则表面的取样，如地面、台面、墙壁、设备、门把手等。
⒈用孔面积为2Ocm2的无菌的金属模饭压在测试面上，将无菌棉签用O. 9无 菌氯化纳溶液占湿，在板孔范围内擦抹5次，换1支棉签再擦抹5次，共擦 抹10次，5个位置100cm2 ， 每支棉签抹完后立即剪断 (或烧断)，投入盛 有30mlO.9%无菌氧化纳需液的锥型瓶(或大试管〉中 ，摇晃约1分钟，即 得供试液。 ⒉取供试液，按 中国药典2015年版微生物计数方法测定。 每个棉签取样面积为25 cm2，微生物计数结果以CFU。
空气悬浮粒子标准
悬浮粒子最大允许数/立方米
洁净度级别 静态 ≥0.5μ m ≥5.0μ m(2) 3520 20 动态(3) ≥0.5μ m ≥5.0μ m 3520 20
A级(1) B级
C级 D级
3520
352000 3520000
29
2900 29000
352000
3520000 不作规定
2900
洁净区环境微生物的控制
警戒限 用来指示环境中的微生物数是否有偏离正常水平的可能性。 结果超出警戒限应采取的措施;
鉴别微生物
调查是否存在的取样/检验程序的偏差并分析操作过程中环境系统，生产 工艺是否存在的偏差。评估结果趋势。 行动限 测试同一个房间不同点的微生物数连续三次超过警戒线., 表示环境中的微生物数污染水平已严重偏离正常水平， 并且对产品质量
药品洁净实验室微生物控制和监测
概 述
《2015版药典》参考国家及国外标准制定了统一的标准 参考标准 ⒈ USP(35)〈1116〉药品无菌操作环境的微生物控制和监测指导原则 ⒉ ISO 14644 洁净室及相关受控环境附录无菌药品生产质量管理规范 ⒊ GB/T16292-2010 医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游和沉降菌的测试方法
沉降菌的检测
培养皿的直径为90mm，培养皿的有效期为14天 TSA（胰酪大豆琼脂）
将已制备好的培养皿，放置在主要操作区内并接近于操作高度，打开培养
皿盖，将盖子倒扣放置，使培养基表面暴露4h，培养。 C级，D级区域每个房间放置2个点。 动态检测沉降时间为操作全过程，可以不足4h；若生产操作超过 4h，需 要更换新的培养 皿。 A级区域每个房间4个点，根据操作人员活动频率和风险影响放置。
空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面 微生物
洁净室 检测
以下情况及时调整检测频率
⒈连续超过纠偏限和警戒限。 ⒉关键区域内发现有污染存在。
⒊空气净化系统进行任何重大的维修。
⒋消毒规程改变。 ⒌设备有重大维修。 ⒍洁净室（区）结构或区域分布有重大变动。 ⒎引起微生物污染的事故。 ⒏日常操作记录反映出倾向性的数据。 2010版 GMP
。 确认主要的物理参数过滤系统完整性，空气流速，气流组织、换气次数、压
差、温度和相对湿度等。 空气悬浮粒子和微生物
当人员流动、超净工作台等重大设备运转、空气调节系统等重大变化时应重 新进行参数测试。 测试结果不能作为最终判断依据，应进行综合分析判断。
监测方法
悬浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面菌的测试方法 GB/T 16292-2010医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法；
微生物洁净实 无菌检查（以 A/B 级或 每次实验
验室 A/C级为例） 微生物限度检查以 A/C 每周一次 级为例） C级 每季度一次
空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面
微生物（手套及操作服） 空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面 微生物（手套及操作服） 空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面 微生物
Hale Waihona Puke Baidu
D级
每半年一次
分析是独立是与其他联系，应回顾和追溯两周前的微生物监测数据，并考虑是否
对样品召回。 -USP(35)〈1116〉品无菌操作环境的微生物控制和监测指导原则
洁净区环境微生物的控制
措施 调查 鉴别微生物。 是否存在的取样/检验程序的偏差。 操作过程中环境系统，生产工艺是否存在偏差。 评估结果趋势。 根据现行程序对相关区域再清洁消毒
洁净度级别
浮游菌 cfu/m3
沉降菌 （90mm） cfu /4小时 1 5 50
表面微生物 接触碟 （55mm） cfu /碟 1 5 25 5指手套 cfu /手套 1 5 －
A级 B级 C级
1 10 100
D级
200
100
50
－
注：① 表中各数值均为平均值。 ②单个 沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多 个沉降碟连续进行监测并累积计数。
GB/T 16294-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法；
GB/T 16293-2010医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法。
药品洁净实验室监测项目及频次（参考）
受控区域 隔离系统 洁净度级别 内部 采样频次 每次实验 监测项目 空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面 微生物（手套） 相邻外部 每月一次 空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面 微生物
消除和减少消毒剂和抗生素的作用。， 沙氏葡萄糖琼脂(SDA)或玫瑰红钠琼脂培养基酵母菌和霉菌的监测。
通常，不监控厌氧菌，因为这些微生物在环境中不能生存。如需要应对微需
氧和低氧环境下生长的微生物进行监测。 用于环境微生物监测的培养基须特别防护。 双层包装和终端灭菌，否则使用前应进行100%的预培养以防止外来的污染物 带到环境中及避免出现假阳性结果。
5
-
7 8
非单向流 非单向流 -
-
30-70h-1
10-20h-1
人员
从事药品洁净实验室微生物监测和控制的人员应符合现行《中国药典
》附录中“药品微生物实验室指导原则”的相关要求。
参数确认
初次使用的洁净实验室应进行参数确认，物理参数的测试应当在微生物监测
方案实施之前进行。为 确保操作顺畅，保证设备系统的运行能力和可靠性
胰酪大豆胨琼脂（TSA），培养温度为30℃-35℃，时间不少于2天。
沙氏葡萄糖琼脂(SDA)，培养温度为20℃-25℃，时间不少于5天。如需要可
以延长至7天。 稀释剂
0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
胰酪大豆胨肉汤（TSB）或其他适宜的稀释剂。
洁净室微生物监测
在净化空气系统正常运行不少于10min后开始测试。 静态测试时测试人员不得多于2人。
检验环境
国际要求:制药洁净环境分级为A级、B级、C级、D级。
A（百级）、B（千级）、C（万级）、D（十万级）
2015版药典对药品检验环境的要求 无菌检查 在无菌的环境单向流空气区域内或隔离系统中进行，符合无菌检
查的环境要求。 微生物限度检查 在无菌的环境单向流空气区域内进行，符合微生物检查的环 境要求。 。