血小板抗原抗体检测

血小板相关疾病
临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少 症主要有5种：
1. 血小板输注无效（PTR） 2. 输血后紫癜（PTP） 3. 新生儿同种免疫血小板减少症（FMAIT/NAIT） 4. 被动免疫血小板减少症（PAT）
血小板抗原
❖ 白细胞抗原：HLA抗原 ❖ 血小板存具有HLA-Ⅰ类抗原类抗原，主要是HLA-A
和HLA-B位点的抗原（少量表达的HLA-C抗原）。 ❖ HLA-Ⅰ类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中
吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。
血小板抗原
❖血小板特异性抗原（human platelet antigen， HPA）
HPA-1a,HPA-3,HPA-5b
其它抗体 抗GPⅡb/Ⅲa抗体
极少数为ABO抗体 少数为抗GPIa/IIa抗 体
多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位 于 GPIV/V 和 GPIa/IIa 同上
抗体检测及交叉配血
抗原定型
血小板相容性检测 抗体检测
交叉配型
建立血小板供者库
诊断血小板免疫性疾病 筛查血小板相容性供者
血小板抗原
血小板抗原
血小板抗原
❖ 24个抗原主要分布在糖蛋白GPⅡb，GPⅢa，GPⅠb，GPⅠa 以及CD109上 ；
❖ GPⅢa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4， HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw， HPA-14bw，HPA-16bw
血小板谱细胞 （三人份O型混合血小板）
50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔
阳性 水浴 洗30涤m5i次n
反应板 （已包被血小板单抗）
血小板单层
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞）
抗人IgG 各50μl/孔
200g,5min离 心
200g,5min离 心
阳性反应
阴性反应
筛选基因型相容的供者 避免血小板抗体的产生
采取预防和治疗措施 避免流产、出血等
减少血小板输注无效 避免紫癜、出血和死亡
血小板抗原定型
HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a ba ba b a b ab a b
阳性对照条带 等位基因条带
1bb
2ab
3bb
4aa 5aa 15aa
血小板抗原抗体
广州医科大学附属第五医院 输血科
目录
血小板抗原 血小板抗体 抗体检测及交叉配血
血小板相关疾病
血小板抗原
❖ 血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体, 并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.
❖ 血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
▪ 直接测定法
血小板表面结合血小板抗体的测定
▪ 间接测定法
Baidu Nhomakorabea血清内抗血小板抗体的测定
▪ 交叉配血试验
选择配合的血小板供体
▪ 质量控制
阴阳性对照
ELISA法(酶联免疫试验)
单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被 的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共 同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗 人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。
❖ 血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）
血小板抗原
血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 ❖ 来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所
固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O 型血小板和A或B型血清温育，血小板就会带上A或B抗原。 ❖ 不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异; ❖ 同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入 ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其 生命力不受影响.
❖ 主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板 特异性抗原
❖ 高频率抗原以“a”表示，低频率抗原以“b”表示 ❖ 人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发现以来，
迄今已经检出24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4 ，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗 原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。
血清学定型 ➢ 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 ➢ 缺点：特异性抗体来源困难
---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，
无其它HPA单抗。 基因定型 ➢ 限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) ➢ 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
被动同种异体免疫 性血小板减少症
移植相关同种异体 免疫性血小板减少 症
自发性血小板减少 症
继发于母体自发性 血小板减少症
HLA / HPA 抗 体
HPA1b(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, AntiCD36 HLA-I抗体50~80% 17~25%(日本人为 HPA-2b), HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA3b,HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b
血小板抗体检测 血清学
❖ ELISA法(酶联免疫试验) ❖ 血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA) ❖ 固相血小板免疫血清学试验(SPISA) ❖ 简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA) ❖ 流式细胞仪 ❖ 改良抗原俘获(ELISA) ❖ 免疫荧光试验
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
❖ GPⅡb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过 二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPⅡb上携带 HPA-3和 HPA-9bw；
血小板抗体
抗体 分类
疾病
同种 抗体
格兰茨曼血小板功 能不全病
同种 异 体抗 体
新生儿同种异体免 疫性血小板减少症
血小板输注无效症
血小板输血后紫癜
自身 抗体