组培模块五植物脱毒技术

植物组织培养脱毒快繁技术的综述

植物组织培养脱毒快繁技术的综述摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。

本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况，简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法，并介绍了几种常用的病毒检测方法。

本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。

同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。

关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景1植物组织培养研究概况1.1研究简史自从1943年怀特（White）提出植物细胞“全能性”（Totipotency）学说及诸多后学者（Steward，1958，Guha和Marteshwari，1964）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。

我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作，创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[1]。

目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。

脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。

例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等，已成为现代农民致富的新宠[2]。

1.2植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。

由于培养物是脱离植物母体，在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。

植物脱毒技术 PPT课件

3、原球茎的诱导

茎尖、叶片、花梗愈伤组织形成原球茎茎尖：KC+BA0.5-2+NAA0.01-0.5 叶片：1/2MS+BA2+NAA0.5+CM50
4、原球茎的增殖与分化

接种的茎尖4-6 周后可形成原球茎，以未抽芽的原球茎为外植体进行继代培养，不断进行原球茎的增殖。培养基：MS+BA0.1-5+NAA0.5-1+香蕉或椰汁液
烟草黄瓜花叶病毒“脉坏死症”
感染病毒病的郁金香
第一节
茎尖培养脱毒
一、病毒在植物体内的分布
病毒侵染到植株的叶片后,经过一段时间,即向附近细胞增殖转移,转移速度很慢,每小时只有几微米。当叶片内病毒浓度增大到一定量时,就转移到韧皮部,随后通过维管束转移到其他部分。
由于植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有。所以，应用茎尖培养脱毒研究获得成功。由于茎尖培养脱毒效果好，后代遗传性稳定，所以是目前生产上最常用的脱毒措施。
第二节
其他途径脱毒
一、愈伤组织脱毒
在受感染的组织形成的愈伤组织中，并
非所有的细胞都均匀一致地带有该种病原。在用机械方法由受烟草花叶病毒（TMV）侵染的烟草愈伤组织中分离出来的单个细胞中，只有40%带有这种病毒。由受侵染的愈伤组织中能再生出很多不含有TMV的植株。
二、珠心胚培养脱毒
柑桔类多胚品种中除一个受精胚以外，

扩大繁殖与生根培养
茎切段生芽扩大繁殖法叶切块生芽扩大繁殖法

移栽
五、药用植物
枸杞初代培养继代增殖培养生根培养试管苗的移栽
二、指示植物检测法

浅谈组培苗的脱毒及应用

浅谈组培苗的脱毒及应用植物在生长过程中几乎都会受到病毒的侵染，尤其是无性繁殖的植物，病毒严重影响果树、蔬菜、花卉和树木等植物的生长发育，造成产量降低、品质下降，严重时甚至造成植物的死亡，给农业生产造成巨大的经济损失，全世界每年因病毒造成的经济损失中，粮食作物达200 亿美元，经济作物达600 亿美元[1]。

第九次国际病毒委员会公布的病毒数量达到了2000 多种，归属于6 个目87 个科19 个亚科349 个属。

1 植物病毒的传播方式及为害病毒的传播途径多种多种，如昆虫传播、土壤传播、机械传播、无性繁殖材料传播，甚至有些病毒可以通过种子传播。

植物感染病毒之后主要表现为内部症状和外部症状2 个方面：内部症状主要有组织病变坏死、茎部微管组织和叶部坏死、产生激素、引起组织增生或产生各种类型的内含体，植物正常的生理代谢受到干扰，叶绿素、花青素及激素等的产生受到改变；外部症状主要有变色、坏死、畸形等相应的异常症状。

植物感染病毒造成的经济损失是比较大的，如葡萄的扇叶病毒可使葡萄每年减产10%～15%，非洲可可树的肿枝病可使产量减少50%以上，马铃薯的退化病毒可使产量减少50%～70%。

对于观赏性的植物，病毒导致花朵变少变小，甚至畸形、变色，从而失去观赏价值。

2 植物脱毒的方式2.1 茎尖分生组织培养脱毒1952 年Morel 等从感染花叶病毒和斑萎病毒的大丽花植株上切取茎尖分生组织进行培养，并获得脱毒苗。

茎尖分生组织培养脱毒苗是利用了病毒在植物体内分布不均匀的特点，病毒主要通过微管组织进行转移，而茎尖不含有微管系统，茎尖中的叶原基能分泌生长素抑制病毒的增殖，所以茎尖几乎不含有病毒或病毒的浓度很低，通过剥离茎尖或根尖进行培养，可获得脱毒苗。

剥去茎尖的大小是脱毒的关键，一般剥取0.1～1mm 茎尖进行培养，茎尖太小难于成活，茎尖太大脱毒效果差。

何新民等[2]对“红姑娘2 号”甘薯进行培养和脱毒研究，结果表明，剥去茎尖0.3～0.5mm 时，脱毒率为100%，当剥去茎尖0.6～0.8mm 时，脱毒率为93.3%。

高中生物第五章植物的组织培养技术第二节植物种苗脱毒技术学案中图版选修1

第二节植物种苗脱毒技术掌握植物种苗脱毒的基本过程。

一、种苗脱毒把茎尖分生组织从感染病毒的植株上剥离,在离体条件下进行组织培养,从而获得不含病毒的脱毒苗,这一过程称为种苗脱毒。

二、脱毒苗的培养实例1．马铃薯脱毒苗的培养（1）取材和消毒将欲脱毒的马铃薯块茎催芽,剪芽并剥去外叶，用自来水冲洗10 min，在无菌室内用质量分数为5％的漂白粉溶液消毒后，用无菌水冲洗2～3次。

(2)剥离和接种取马铃薯芽的尖端1～2 cm，在解剖镜下，用解剖刀小心地除去茎尖周围的叶片组织，露出顶端圆滑的分生区,用解剖针细心剥取所需的茎尖（约0。

1～0.5 cm）,接种于MS培养基上，切面接触培养基。

(3）培养于25 ℃、1 500～3 000 lx光照下培养，当长成3～4片叶的小植株时，即可移栽.2．草莓脱毒苗的培养3．探究切取茎尖的最佳长度在进行种苗脱毒时，切取的茎尖越小，脱毒效果就越好，但组织培养的速度就越慢，越不容易成活;如果切取的茎尖大一些，组织培养虽容易成功,但脱毒效果却很差.污染的预防污染就是指在组织培养过程中，培养容器内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育,从而导致培养失败的现象。

植物组织培养不同于扦插、分根、叶插等常规无性繁殖。

由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差,所以对培养条件的要求较高,对无菌操作的要求非常严格。

污染有两种类型：(1）细菌污染：菌斑呈黏液状，界限比较明显,一般接种后1～2天即能发现。

主要是大肠杆菌和链球菌。

一般是由接种人员造成的.（2）真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子,接种后3～10天才能发现.主要是霉菌污染，可能是植物材料灭菌不当造成的。

可以通过以下措施做好预防。

(1）防止外植体带菌。

①选择好外植体采集时期和采集部位。

外植体采集以春秋为宜，优先选择地上部分作为外植体，阴雨天勿采，晴天下午采，采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋.②在室内或无菌条件下进行预培养。

植物组织培养课件第6章B-植物脱毒

茎尖不带病毒原因：
I 病毒通过维管系统移动，分生组织中不存在维管系统
II 竞争机制：茎尖分生组织中，代谢活性高，竞争中病毒复制处于劣势
III 病毒钝化系统在茎尖分生组织内活性最高
IV 分生组织内高水平的内源激素抑制病毒的增殖
大茎尖
脱毒效果差，脱毒效果差，成苗易脱毒效果好，脱毒效果好，成苗难
指示植物穗接
嫁接后的植物
②抗血清(antisemm)鉴定法抗血清鉴定法利用了“ 血清反应” 利用了 “ 血清反应 ” ，用已知抗血清可以鉴定未知病毒“抗原” 鉴定未知病毒“抗原” 特点：特异性高；测定速度快，特点：特异性高；测定速度快，一般几小时甚至几分钟就可以完成；时甚至几分钟就可以完成；植物病毒鉴定中最有用的方法之一
II 植株热处理脱毒法试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。生长室温度35—40℃ 生长室温度 ℃ 光照3000—10000 lx 光照
评价：评价：利用了病毒的热敏性 i、并非所有病毒都有热敏性；、并非所有病毒都有热敏性； ii、热处理影响母体植株存活率；、热处理影响母体植株存活率；
小（0.1－1.0mm）－）
在满足培养材料成苗的前提下，成苗的前提下，茎尖越小越好
茎尖
小茎尖
顶端分生组织小茎尖：顶端分生组织+叶原基（1-2个），大小为0.1mm-1mm
香石竹（康乃馨）脱毒的具体操作过和如下：香石竹（康乃馨）脱毒的具体操作过和如下：（1）热处理将盆栽植株或离体瓶苗，在 36～38℃下处理2周，或每天在36℃16小时和 38℃8小时处理共30天，光照为3000lx。（2）表面消毒选取盆栽香石竹植株叶腋间生出的侧芽为外植体，先用自来水冲洗半小时，用75%的酒精消毒30秒，再用2.5%次氯酸钙或次氯酸钠溶液处理15分钟,取出后用无菌蒸馏水清洗4次,用无菌滤纸吸去多余水分备用。

植物脱毒组培的方法和原理

植物脱毒组培的方法和原理
植物脱毒组培是一种通过细胞或组织培养技术去除植物组织中的病毒或其他病原体的方法。

其方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的母本植株：选择健康没有病毒污染的植物作为母本植株。

2. 提取母本组织：从母本植株中提取出组织，如叶片、茎段、种子等。

3. 建立细胞或组织培养：将提取的组织转移到营养培养基上，提供适宜的营养物质和激素，促使组织细胞分裂和生长。

4. 建立病毒感染模型：将营养培养基中加入病毒悬浮液或病毒感染的植物部分，使细胞或组织感染上病毒。

5. 选择抗病株系：在病毒感染的条件下，筛选出能够抵抗病毒感染的细胞或组织，这些细胞或组织可以表现出无病毒或低病毒含量的状态。

6. 培养和繁殖抗病株系：将筛选出的抗病细胞或组织进行继代培养，使其继续增殖和繁殖。

植物脱毒组培的原理主要基于以下几个方面：
1. 细胞或组织培养条件的控制：适宜的培养基成分和激素浓度能够促进细胞分裂和生长，同时也能够改变细胞的物质代谢和
抵抗能力，有利于抗病性的培养。

2. 细胞再分化的能力：在培养条件下，植物组织细胞有再分化为器官样组织的能力，可以通过再分化获得无病毒细胞或组织。

3. 病毒感染的选择性：某些植物病毒在体内能够引起明显的病症，但在体外无法复制，通过在体外培养条件下去除病毒复制的环境，可以选择出无病毒的细胞或组织。

4. 细胞或组织的抗病机制：植物组织细胞通过产生抗病蛋白、抗氧化物质等手段，形成对病毒感染的抵抗能力，通过培养和筛选可以选择出具有这种抗病机制的细胞或组织。

植物脱毒组培方法的应用可以用于繁殖无病毒植株、培育新品种、保存稀有植物等。

植物组织培养脱毒技术

茎尖脱毒主要包括表面灭菌、茎尖剥离、茎尖培养等步骤。
香石竹脱毒的具体操作过和如下：
（1）热处理将盆栽植株或离体瓶苗，在 36～38℃下处理2周，或每天在36℃16小时和 38℃8小时处理共30天，光照为3000lx。
（2）表面消毒选取盆栽香石竹植株叶腋间生出的侧芽为外植体，先用自来水冲洗半小时，用75%的酒精消毒30秒，再用2.5%次氯酸钙或次氯酸钠溶液处理15分钟,取出后用无菌蒸馏水清洗4次,用无菌滤纸吸去多余水分备用。
第三节脱毒苗的检测
经过脱毒处理的植株作为无病毒原原种或原种使用之前，必须针对特定的病毒进行检测，才能保证组培苗的内在质量。目前常用的植物病害检测方法有可见症状鉴定、寄主鉴定、抗血清检测、电镜检测、分子检测等。可见症状鉴定法较简单，但准确性差，对于不表现楞见症状的隐症病毒几乎无效；而电镜检测、分子检测虽然准确性高，但设备昂贵。目前生产上，国内外主要采用鉴别寄主和抗血清检测法检测植物病毒。
第一节常见植物病毒及其症状
一种病毒可侵染许多植物，而同种植物又可被许多病毒侵染。植物病毒对农作物的危害可使农业生产受到巨大的损失。在一年生种子繁殖作物上，可以采取一些预防措施，减轻当年病害的发生程度，一般不影响下一季的发病。木本植物一旦发病，以后连年都发病。营养繁殖的作物如马铃薯，番木瓜，草莓等，连年种植可以积累多种病毒侵染。马铃薯的退化，就是由多种病毒引起的。
一、植物病毒的发现
很多植物体内都带有植物病毒，由于人类视觉所限，形体越小的生物就越不易被发现，所以病毒的发现比其它生物要晚得多。直到19世纪末期，德国的A．Mayer发现烟草上出现深浅相间的绿色条纹，称之为烟草花叶病，并证实其具有传染性；后经俄国植物病理学家D．Ivanowski对烟草花叶病病原进行研究，认为它是由一种极小的“细菌”引起的；最终由荷兰人 M．W．Beijerinck首先提出烟草花叶病病原是一种“传染性的活性液体”或称“病毒”。此后，许多学者陆续发现了各种植物病毒。1935年美国人Stanley和Bawden揭示了烟草花叶病毒的化学本质不是纯蛋白而是核蛋白；1940年德国的Kausche等首次在电镜下视察到烟草花叶病毒的杆状外形。由此，病毒研究进入了更深入的领域。目前，人们不但能在实践生产中有效地防治病毒的侵染，而且能利用病毒作为遗传工程的载体改造植物。

《植物脱毒技术》课件

结论和要点
通过了解《植物脱毒技术》，我们可以看到它在农业、环境和食品安全领域的重要性，以及未来的发展潜力。
植物脱毒技术的分类
生物学方法
利用微生物、激素和其他生物因子来清除植物体内的有害物质。
化学方法
使用化学物质和药剂来解毒和恢复植物的健康状态。
遗传工程方法
通过基因编辑和转基因技术来提高植物对有害物质的抗性。
植物脱毒技术的应用
1
环境修复
2
清除受污染土壤和水源中的有害物质，
恢复生态平衡。
3
农业领域
《植物脱毒技术》PPT课件
欢迎来到《植物脱毒技术》的世界。
技术背景
植物脱毒技术是一种为清除植物体内的有害物质而采取的方法，主要应用于农业和生物科学领域。
植物脱毒技术的定义
植物脱毒技术是一套用于消除有毒物质、净化植物组织并恢复其生长能力的方法和策略。
提高农作物的生长质量和产量，减少农药的使用。
食品安全
确保食品中没有有害物质残留，保护人们的健康。
植物脱毒技术的优势
1 环保可持续
采用生物和自然方法，无污染且能循环利用。
2 经济效益
减少农药和化学物质的使用，降低生产成本。
3 提高品质
改善农作物的口感、色泽和储存性。
植物脱毒技术的未来展望
随着科学技术的发展，植物脱毒技术将不断创新，应用范围将进一步扩大，并对人类健康和环境保护产生重要影响。

植物组织培养脱毒方法综述

植物组织培养脱毒方法综述摘要：植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素，通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。

通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。

关键词：组织培养；脱毒；茎尖培养正文：植物病毒分布广、危害大，对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。

近年来。

随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。

目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。

因此，本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述，以期从中得到启示，进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。

植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等，其中由于茎尖培养脱毒效果好，是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径。

研究表明，如果将不同的方法结合起来应用效果会更好，通常将茎尖结合热处理来脱毒。

1、茎尖培养脱毒茎尖培养脱毒原理：在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。

病毒通过维管束和胞间连丝传播，在分生区内无维管束，病毒扩散慢，加之植物细胞不断分裂增生，所以病毒含量少，在茎尖生长点几乎检测不出病毒，因此切取茎尖愈小愈好，但实际操作中茎尖取太小不易培养成活，过大又不能去毒。

1．1 茎尖培养的方法及注意事项将消毒后的材料放置在20～40倍解剖显微镜下，用解剖刀剥取0．1～1 mm 的茎尖，迅速放入培养基中，如果在空气中暴露时间过长，就会因失水引起茎尖死亡。

赵军良等人的研究表明，带有一个叶原基的茎尖，脱毒效果最好，成活率最高[3]。

不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。

在菊花的茎尖培养中，在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除，在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1～2片叶原基的生长点，生长点大小约在0.3～0.5 mm左右。

《植物组织培养技术》植物脱毒与快繁

《植物组织培养技术》植物脱毒与快繁模块介绍本模块针对组培研发岗位的工作职责与任职要求，编排了试验方案设计和数据调查与分析二个实训项目，主要内容包括组培的基本理论、提高组培苗遗传稳定性的措施、组培试验方案的制订等，重点阐述了组培快繁的程序与类型、组培研究的技术路线与试验设计方法、组培快繁的常见问题、组培数据调查与分析方法等。

在理论学习的同时，开展项目实践活动，培养学生会设计组培试验、撰写试验方案、编制组培试验观察表和技术指标统计分析，具备组培研发工所要求的理论知识、技能水平和相应的职业素质。

模块结构设计见表1。

表1 模块结构设计项目1 蔬菜组培与快繁/马铃薯脱毒与快繁一、学习目标（一）终极目标掌握植物脱毒与鉴定技术，培育马铃薯等蔬菜脱毒、快繁与脱毒苗的鉴定技术。

（二）促成目标1.熟悉植物脱毒的意义、原理与方法，能够运用脱毒技术培育马铃薯等蔬菜脱毒苗；2.掌握脱毒苗鉴定技术，清楚马铃薯等蔬菜脱毒苗鉴定方法；3.清楚马铃薯等蔬菜脱毒苗的保存与无病毒苗繁育体系、方法；4.提高操作水平和分析解决问题能力，培养团队精神、敬业精神、责任意识。

二、学习内容1．蔬菜组织培养概况；2.马铃薯组培概况；3.马铃薯脱毒种薯繁育流程；4.脱毒苗的优势(含病毒的种类、传染途径、表现症状与危害)；5.植物脱毒技术；6.脱毒苗鉴定技术；7.马铃薯脱毒苗培育与鉴定；8.马铃薯脱毒苗快繁与微型薯诱导；9.马铃薯等蔬菜脱毒苗的保存与繁殖；10.甘薯脱毒与快繁技术要点（拓展）；11.大蒜脱毒与快繁技术要点（拓展）；12.紫背天葵组培与快繁技术（拓展）；13.结球甘蓝组培与快繁技术（拓展）。

三、知识点1.蔬菜组织培养概况；2.马铃薯组培概况；3.马铃薯脱毒种薯繁育流程；4.脱毒苗的含义、实质与培育优势(含病毒的种类、传染途径、表现症状与危害)；5.植物脱毒技术（热处理、微茎尖培养、其它脱毒方法）；6.脱毒苗鉴定技术（指示植物法、嫁接法等）；7.马铃薯脱毒苗培育与鉴定；8.马铃薯脱毒苗快繁与微型薯诱导（实验室诱导、温室生产）。

2021-2022年高中生物第五章植物的组织培养技术5.2植物种苗脱毒技术1素材中图版

2021-2022年高中生物第五章植物的组织培养技术5.2植物种苗脱毒技术1素材中图版——茎尖脱毒的实例（一）、茎尖脱毒1、茎尖脱毒的依据。

病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。

2、茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键（1）、被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分布脱毒之前，应了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置，以确定培养茎尖的大小（2）、母体植株的选择和预处理母体的选择：欲脱毒材料的品种典型性：关系到脱毒以后的脱毒苗是否保持原品种的特征特性植体健康程度选择：应选感病轻、带毒量少的健康植株作为脱毒的外植体材料，这样更容易获得脱毒株。

外植体预处理：（3）、茎尖的剥离在剥取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下（8~40倍），一只手用镊子将其按住，另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。

但要注意解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。

当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来，为了提高成活率，可带1-2枚幼叶，然后将其接到培养基上。

接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。

剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。

可在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止茎尖变干。

将接种好的茎尖置于25℃左右的温度下。

每天以16小时 xx-3000lx的光照条件下培养。

由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。

微茎尖需数月才能成功。

继代培养得到足够的检测苗、进行病毒检测。

（4）、脱毒效果检测A 指示植物鉴定(indicator test plants) 所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。

每种病毒都有自己敏感的植物，例如：马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、心叶烟、毛叶曼佗罗大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜、苋色蓠菊花病毒：矮牵牛、豇豆指示植物鉴定病毒的方法a.摩擦接种法：取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），磨成匀奖，将其涂抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。

第六章——植物组培脱毒

植物脱毒的方法
• 1、通过热处理消除病毒 • 基本原理： • 在高于正常的某一温度范围（35－40℃)下，植物组织中的很多病毒可被部分地或完
全钝化，但很少伤害甚至不伤害寄主组织。 • 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能
钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。 • 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。
易感病毒园艺作物常见病毒种类
植物组培脱毒实验的作用：
1、能够有效地保持优良品种的优良性状。任何一种优良品种均需有一个稳定地保存其遗传性状的繁殖方法。离体无性繁殖可以很好地保持品种的优良特性，是无性繁殖品种繁育的理想途径。 2、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用。组培快繁繁殖周期短，不受季节限制，繁殖系数高，繁殖速度是任何其他方法所不能比的。 3、生产无病毒种苗，防止品种退化。 4、提高农产品的商品率，节约耕地，便于运输。离体繁殖的种苗体积小，易携带，运输十分方便。
植物脱毒的方法
3，通过茎尖培养消除病菌 1）原理及依据病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少；病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争。 2）操作程序外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。
植物脱毒的方法 • 茎尖脱毒可以使用茎尖为外植体，也可以使用茎的顶端分生组织为外植
茎尖
3.2剥取茎尖的方法
• 工具：解剖镜（体视显微镜），解剖针，解剖刀。 • 为了防止茎尖变干，要在衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行解剖。 • 茎尖外植体要用75％酒精浸蘸一下或0.1％的次氯酸钠消毒（10分钟）。 • 在剖取茎尖时，要把茎芽置于解剖镜下，一手用一把细镊子将其按住，

植物组织培养技术植物脱毒快繁技术

愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可
能会产生变异植株。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
理由：①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；② 有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。
缺点：植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
（二）茎尖微体嫁接
1. 概念：将无病毒茎尖（ 0.4~1.0mm ）嫁接在培养基上培养的实生砧木上，以获得脱毒苗木的技术。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
无病毒植株培育的意义
1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果树等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境栽培去病毒植物可减少药剂的使用。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
4、影响微茎尖成活及脱毒的因素（1）母体材料病毒侵染程度
被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
1、愈伤组织培养脱毒
愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病毒，由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的愈伤组织中病毒含量下降，甚至检测不出病毒。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
愈伤组织的某些细胞不带病毒原因：
1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；
2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。

植物组织培养项目六植物脱毒技术

双链RNA法（电泳）互补DNA检测法（DNA分子杂交法）
5）电镜检测法
用电子显微镜直接观察经脱毒培养的叶片，检查是否有病毒粒子存在，还可测量病毒颗粒的大小、形状（杆状、线状、球状）和结构。
二、脱毒苗的保存
1. 隔离保存：避免脱毒苗再次感染病毒，脱毒
苗需隔离与保存，最好将无病毒母本园建立
在相对隔离的山上（300 目的防虫网室），
管理得当可保存5 ~ 10 年。
2. 长期保存
将无病毒苗原种的器官或幼小植株接种在培养基上，低温离体保存。
1）低温保存： 1-9 ℃ 的低温、并低光照保存，只需半年或1年更换1次培养基（最小生长法）
2）冷冻保存（超低温保存）：液氮（-196 ℃）
①材料选择
植方式移入蛭石、河沙、椰壳等基质中培养。
3. 理化方法脱毒
1）物理方法
① 高温处理（热处理 / 温热疗法）：病毒对热
不稳定，高于常温的温度（ 35-40 ℃ ）下钝
化失活。
温汤处理：50 ℃左右热水中浸泡数分钟至几小时（适用于离体材料和休眠器官的处理）
热风处理：盆栽植物移入室内或生长箱中， 35-40 ℃
2）茎尖大小与脱毒效果：顶端分生组织即生长点（最大直
径0.1 mm）；也可是带1-3个幼叶原基的茎尖（0.3-0.5 mm）最适合作外植体，脱毒效果好。
方法
1）取样与消毒：取植株顶芽或侧芽梢段消毒方法：剪取顶芽梢段（侧芽） 3-5 cm 。剥去大
叶，自来水冲洗干净，用 75%酒精浸泡 30 s左右，再
处理几十分钟至数月。处理温度和处理时间因植物种类、器官类别、生理状况、待脱除病毒的种类等而异。变温处理可消除病毒但不伤及植物。

植物组织培养技术：3-任务三植物组培快繁技术

已离体培养植株（试管苗）
❖ 多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下的植物可以保持培养料间的一致性，提高实验的可重复性，也便于培养技术的规范。
❖ 某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的生长点部位作为起始培养的材料。
任务四、植物脱毒技术
植物病毒对园艺植物的危害；脱毒技术；脱毒苗鉴定；脱毒苗的保存和繁殖。
任务五、常见园艺植物的脱毒与快速繁殖
马铃薯、苹果、草莓、兰花的脱毒快繁。
主要内容
1. 外植体选择与处理 2. 外植体培养 3. 试管苗驯化移栽 4. 快繁过程中出现的问题及解决办法
回顾知识点： ❖ 什么是外植体？
因此，外植体的采集尽量选用植物体最幼态的组织。
2、材料取材
(4)外植体的大小：外植体越大，污染率越高，但也不能过小，越小成活率越低。在通常情况下，叶片、花瓣等的面积约为5mm²，茎段为0.5cm²，除非是用于去除病毒，否则不宜将外植体切得
过小。
一、外植体选择与处理
（二）外植体处理
1、外植体预处理首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用刷子刷洗。把材料切割成适当大小，以能放入灭菌容器为宜。置于自来水下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁轻度为宜。细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。洗时可加入洗衣粉清洗，然后用自来水清洗洗衣粉水。目的是去除轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。最理想的清洗物质是表面活性物质——吐温。