兰花组织培养

将切面为45度端插入培养基中
塞子消毒后塞住瓶口 瓶口处再以酒精灯消毒，覆盖上铝箔纸避免感染
成功长出新株体
消毒不彻底瓶内发霉
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔 达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气 候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐－ 5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数 十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿 色而得名。
观赏植物 组织培养之兰花
一、兰花组织培养常用于： 1、无性系快速繁殖； 2、茎尖培养脱毒； 3、培育新品种； 4、种质资源的保存； 5、次生代谢产物的生产。。
二、常见组织培养的兰花种类
三、兰花工业
兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有 450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、 亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍 奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的 兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。
铁皮石斛的组织培养技术路线 外植体 培养基
丛生芽
生根发育
完整植株
初代培养基的设计 诱导培养基
MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】
MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：
BA10ml,NAA5ml
来自百度文库
蔗糖：30g 琼脂：6.8g
生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在 生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2 周后即生根，以长成完整植株。
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外植体的选择
优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段
1 接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。 2 苗的高度为1～2cm时,丛生芽增殖倍数最高数。 3 生长发育健壮苗优先
外植体的处理
Text 1
摘去叶片和 膜质叶鞘， 剪成约2cm 长带节的小 段。
Text 2
用洗洁剂 清洗后置 流水下冲 20~30 min。
Text 3
在超净工作台上 用75%的酒精消 30s0.1%HgCl2 灭菌5min后，用 无菌水冲洗5~6 次，放入垫有干 无菌滤纸的培养 皿中，以吸去多 余水分，茎段两 端各切 0.2~0.3cm。
IBA
BA
NAA
土豆汁
香蕉汁 IAA
生根培养基的设计 生根培养基
1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培
养物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段
2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中
• 茎段各的时诱期导时的间培在5养~1条1天件之间
• 初代培养 • 无菌处理
• 继代培养（增殖培养）
壮苗培养
生根培养
炼苗（移栽驯化）
组培中可能出现的问题
• 污染
• 变异
• 玻璃化
• 褐化
• 黄化
蝴 蝶 兰 组 织 培 养
蝴蝶兰花梗生长点组织培养
使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切 下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到 药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从 被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要 移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相 连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植， 所以， 也有人将其称为切片苗。
2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身， 可重覆此一动作2～3次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中， 藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒 精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一 方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。
（3）将花梗两端切除 芽尖端切90度另一端则呈45度斜切
兰花组培的外植体
• 种子
• 茎尖
• 茎段
• 叶片
•根
兰花组培的途径
• 原球茎途径
种子萌发时先是胚的膨大,种皮破裂,40天时肉眼可见浅 黄色的原胚呈球状,称为原球茎.。兰花茎尖等外植体在 组培中也可诱导产生原球茎，并且原球茎还可以切割成 若干小块，分别形成新的若干原球茎丛。
兰花的组织培养过程
• 培养温度23~25℃，光照强度2000lx， 光照时间10h/d
继代培养基的设计 增殖培养基
MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： BA5ml,NAA2ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml
增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖 培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长 调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。
1）将蝴蝶兰的花梗由植株上剪下，如果已开花的部份可以剪下?弃， 留下未开花的节，再将花梗裁剪适当长度，再将包覆在梗节生长点 外的苞片，小心的剥除，勿伤及生长点，置入超音波震荡器中，以 稀释的漂白水溶液消毒。如无震荡器时，可置入装有稀释过的漂白 水溶液的试管中，手动的大力摇晃试管，也可达到消毒的目的。
• 贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的 流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅 5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快繁 已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方 法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁 殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始用 茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织 培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰花工 业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方法进行 繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。
一般来说，以花梗生长点来进行组织培养，分生数量约在20棵 以上，称之为花梗苗，若是以花梗生长点来进行组织培养，分生数 量在20棵以上，就称为分生苗。而花梗苗与分生苗这两者它们都是 属于无性繁殖。在理论上，遗传的特性与原植株的特性是一样的， 但是却因为培养基的比例调配或是药物的刺激，常常会发生整批分 生的植株 在形态上与原植株不同的情况。 花梗生长点组织培养具体操作：