实验三环境和人体微生物的检验及无菌操作技术
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菌保持25-27℃，3-5天；细菌35-37℃，1-2天。
具体分工
小组成员 菌样
1 口腔-a 2 鼻腔-b
3 头发-c
4 空气-d
5
10-5
6
10-5
7
10-6
8
10-6
培养平板
备注
A B A 倒平板:12套A
A BA
12套B
A BA
A BA
A B B 作土壤悬液
A B B 作土壤稀释液:
A B B 10-2、 10-3、 10-4、
图1 从土壤中分离微生物操作过程
实验程序Ⅱ
（环境及人体各部位取菌样 ）
共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、 头发、空气和土壤稀释液中的10-5、10-6
两个稀释浓度（无菌吸管分别取0.2ml， 无菌操作加到平板上）
➢ 口腔: 将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽3-5次， 使口腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即 可。 ➢ 鼻腔：取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插 入到鼻孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出 棉棒，合上皿盖。 ➢ 头发：将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到 平板表面，合上皿盖。 ➢ 空气：选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止3-5分 钟，使空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。 ➢ 10-5 、10-6的土壤稀释液：无菌移液枪分别取0.2ml，无 菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。
每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、 表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整 齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同 环境下微生物的数量、种类和特点。
实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、察氏一号培养基； 土 样：地面以下5-10cm的土壤； 其 他：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、
稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5mL，放入 4.5mL无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制 成10-3～10-6的稀释液。
(注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土 液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高 于前一次，以减少稀释中的误差。)
土样的稀释方法示意图
记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器。
实 验 程 序 Ⅰ（无菌操作技术 ）
倒平板
在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌 固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3~1/2或 者覆盖皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无 菌平板。
实 验 程 序 Ⅱ （土样的稀释分离 ）
制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无 菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌1015min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬浊液。
实验三 环境和人体微生物 的检验及无菌操作技术
目的要求
掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检 测环境和人体中微生物的存在，体会微生 物分布的广泛性。
学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离 微生物的方法。
实验原理
自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的 微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把 取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的 各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的 微生物集体群落。
A
B B 10-5、 10-6、
结果与思考题
无菌倒平板时注意的事项有哪些？ 平板接种后为什么要倒置培养？ 通过本次试验你学到了什么？有什么体会？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实 验 程 序 Ⅲ （标记、培养 ）
标记： 培养类别-组别- 样品类别-姓名
1、按培养基类别：细菌培养基--A，霉菌培养基--B
2、按4个大组：Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、Ⅳ
3、按样品类别：10-5、10-6、口腔--a、鼻腔--b、 头发 --c、空气--d
4、按个人标记：姓名
培养：
将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养。霉
具体分工
小组成员 菌样
1 口腔-a 2 鼻腔-b
3 头发-c
4 空气-d
5
10-5
6
10-5
7
10-6
8
10-6
培养平板
备注
A B A 倒平板:12套A
A BA
12套B
A BA
A BA
A B B 作土壤悬液
A B B 作土壤稀释液:
A B B 10-2、 10-3、 10-4、
图1 从土壤中分离微生物操作过程
实验程序Ⅱ
（环境及人体各部位取菌样 ）
共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、 头发、空气和土壤稀释液中的10-5、10-6
两个稀释浓度（无菌吸管分别取0.2ml， 无菌操作加到平板上）
➢ 口腔: 将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽3-5次， 使口腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即 可。 ➢ 鼻腔：取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插 入到鼻孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出 棉棒，合上皿盖。 ➢ 头发：将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到 平板表面，合上皿盖。 ➢ 空气：选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止3-5分 钟，使空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。 ➢ 10-5 、10-6的土壤稀释液：无菌移液枪分别取0.2ml，无 菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。
每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、 表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整 齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同 环境下微生物的数量、种类和特点。
实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、察氏一号培养基； 土 样：地面以下5-10cm的土壤； 其 他：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布棒、
稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5mL，放入 4.5mL无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制 成10-3～10-6的稀释液。
(注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土 液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高 于前一次，以减少稀释中的误差。)
土样的稀释方法示意图
记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器。
实 验 程 序 Ⅰ（无菌操作技术 ）
倒平板
在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌 固体培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3~1/2或 者覆盖皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无 菌平板。
实 验 程 序 Ⅱ （土样的稀释分离 ）
制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无 菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌1015min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬浊液。
实验三 环境和人体微生物 的检验及无菌操作技术
目的要求
掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检 测环境和人体中微生物的存在，体会微生 物分布的广泛性。
学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离 微生物的方法。
实验原理
自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的 微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把 取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的 各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的 微生物集体群落。
A
B B 10-5、 10-6、
结果与思考题
无菌倒平板时注意的事项有哪些？ 平板接种后为什么要倒置培养？ 通过本次试验你学到了什么？有什么体会？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实 验 程 序 Ⅲ （标记、培养 ）
标记： 培养类别-组别- 样品类别-姓名
1、按培养基类别：细菌培养基--A，霉菌培养基--B
2、按4个大组：Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、Ⅳ
3、按样品类别：10-5、10-6、口腔--a、鼻腔--b、 头发 --c、空气--d
4、按个人标记：姓名
培养：
将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养。霉