抗氧化实验

抗氧化实验：,
1，熊果酸对超氧阴离子自由基（O-2·）的清除实验
本实验采用邻苯三酚自氧化法，即采用邻苯三酚自氧化法产生超氧阴离子，生成有色中间产物，吸光度随之增加，使吸光度值与反应时间呈良好的线性关系。

但是加入抗氧化性物质后会对其产生清除作用，从而对其进行抗氧化性能的评价。

取试管，加入不同浓度的熊果酸溶液（5mg/10mL）各50、100、200uL以及200uL Vc 进行阳性对照，同时分别取相同体积的甲醇做对照。

在试管中分别加入50mmol/L，pH8.3K2HPO4-KH2PO4缓冲液4.5mL.在25℃水浴锅保温10min，加入预热至25℃的50mmol/L邻苯三酚的盐酸溶液10uL迅速摇匀，倾入1cm的比色杯中，以缓冲液调零，在325nm处，每隔30s测吸光度1次，连续测定15min。

2熊果酸对羟自由基（·OH）的清除实验
(1) 本实验采用Feton体系法产生羟自由基，即:H2O2+Fe2+ OH +H2O+Fe3+。

然后在体系中加入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收，可以利用该吸光度值来表示羟自由基的含量。

取不同的试管分别加入0.5mg/mL熊果酸标准品各50、100、200uL以及200uL甘露醇作为阳性对照。

再分别加入1mL9mmol/L水杨酸-乙醇溶液，1mL9mmol/L FeSO4，1mL8.8mmol/L H2O2, 用双蒸水补齐至5mL，充分摇匀，迅速倒入1cm的比色杯中，于510nm处测定其吸光度值，以甲醇调零。

可以根据吸光度值判断样品对羟自由基的清除作用。

（2）羟基自由基清除能力的测定。

量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml和1.0ml样品溶液于试管中，用蒸馏水补齐至1ml，依次加入0.15mol/L FeSO41ml、2mmol/L水杨酸1ml，最后加6mmol/L H2O2 1ml启动反应，37℃反应1h，测510nm的吸光度。

不加样品的阴性对照
管吸光值为A0，样品管的吸光值为A，清除率（%）=（A0-A）×100/A0。

3,DPPH自由基清除能力的测定
量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml样品溶液于试管中，用蒸馏水补齐至1ml，依次加入6.5×10-4mol/L DPPH溶液2.5ml、70%乙醇0.5ml，摇匀，避光30min后于517nm下测吸光度值。

不加样品的为阴性对照吸光值为A0，样品的吸光值为A。

清除率（%）=（A0-A）×100/A0。

4，还有那个事清除H2O2的，我查不到实验方法。

你看看吧，谢啦啊。