细胞核提取方法

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细胞核提取方法(Ann.N.Y.Acad.Sci 1090:177-181(2006))

溶液配制

0.25 STC buffer(sucrose-Tirs-calcium buffer):

0.25M sucrose

50mM Tris-HCl(pH 9.0)

5mM CaCl2

20mM NH4Cl

1mM DTT(现用现加)

蛋白酶抑制剂

配好后加入0.2%(V/V)Triton-X-100

1 STC buffer

1M sucrose

50mM Tris-HCl(pH 9.0)

5mM CaCl2

20mM NH4Cl

1mM DTT(现用现加)

操作:

1、加入0.25STC(加入的体积根据细胞量)悬浮,使细胞破碎20min;

2、在2mlEP管中加入1ml 1STC,将悬液1ml缓慢加于其上,分成两层,离心1000rpm,6min,吸去上清,加0.25STC;

3、重复步骤2,离心10min。

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