细胞核提取方法
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细胞核提取方法(Ann.N.Y.Acad.Sci 1090:177-181(2006))
溶液配制
0.25 STC buffer(sucrose-Tirs-calcium buffer):
0.25M sucrose
50mM Tris-HCl(pH 9.0)
5mM CaCl2
20mM NH4Cl
1mM DTT(现用现加)
蛋白酶抑制剂
配好后加入0.2%(V/V)Triton-X-100
1 STC buffer
1M sucrose
50mM Tris-HCl(pH 9.0)
5mM CaCl2
20mM NH4Cl
1mM DTT(现用现加)
操作:
1、加入0.25STC(加入的体积根据细胞量)悬浮,使细胞破碎20min;
2、在2mlEP管中加入1ml 1STC,将悬液1ml缓慢加于其上,分成两层,离心1000rpm,6min,吸去上清,加0.25STC;
3、重复步骤2,离心10min。