基因工程与蛋白质工程

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考点突破·核心探究
考点1
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DNA重组技术的基本工具
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1．基因工程的概念 目的基因 (1)供体：提供______________ 。 体外 。 (2)操作环境：_________ 分子 水平。 (3)操作水平：________ 基因重组 。 (4)原理：_____________ (5)受体：表达目的基因。
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专题一
基因工程与蛋白质工程
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[考纲要求] 1．基因工程的诞生(Ⅰ)。 2.基因工程的原理及技术(Ⅱ)。 3.基因工程的应用(Ⅱ)。 4.蛋白质工程(Ⅰ)。
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④下图中的图1和图2分别表示的是EcoRⅠ限制酶 和SmaⅠ限制酶的作用示意图。EcoRⅠ限制酶识别的 GAATTC ，切割位点在________ G和A 之间； 碱基序列是____________ SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是____________ CCCGGG ，切割位 G和 C 专一性 。 点在_________之间；说明限制酶具有___________
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2．限制酶选择的注意事项
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(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可 选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲 不能选择SmaⅠ。
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毒等。
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能自我复制 限制酶切割位点 ②质粒的特点有一个至多个____________ 有特殊的_________ 标记基因
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受体 (6)本质：性状在________ 体内的表达。 远缘杂交不亲和 的障碍，定向改 (7) 优点：克服 _________________ 遗传性状 造生物的_______________ 。 2．DNA重组技术的基本工具 限制酶 (1)限制性核酸内切酶(简称：_________) 原核 生物中分离纯化出来的。 ①来源：主要是从_____ 核苷酸序列 ②作用：识别特定的 _________________ 并切开相 磷酸二酯键 。 应两个核苷酸之间的______________ 黏性末端 或平末端。 ③结果：产生___________
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③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，
可使用两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，如 图甲可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒
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上也有这两种限制酶的切点)。
(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致，以 确保具有相同的黏性末端。 ②插入的目的基因的表达需要调控序列，用作载体 的质粒的插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止 子，所以所选限制酶的切点应该“前有启动子，后有终 止子”。
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(5) 不同 DNA 分子用同一种限制酶切割产生的黏性 末端都相同，同一个 DNA 分子用不同的限制酶切割，
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产生的黏性末端一般不相同。 (6) 限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破
坏标记基因，以便于进行检测。
(7) 基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体 不同。基因工程中的载体是 DNA 分子，能将目的基因
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导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性
有关。 (8)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。
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1．概念不清导致错误，巧辨基因工程操作工具的8
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个易错点 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2) 限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适 宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3) 在 切 割目 的 基 因 和 载 体 时 要 求 用 同 一 种 限 制 酶，目的是产生相同的黏性末端。 (4) 将一个基因从 DNA 分子上切割下来，需要切两 处，同时产生4个黏性末端。
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(2)DNA连接酶 ① 种 类 ： 按 来 源 可 分 为 E·coliDNA 连 接 酶 和 T4DNA连接酶 _________________________ 。 ②作用：将双链 DNA 片段“缝合”起来，恢复被 磷酸二酯键 。 限制酶切开的两个核苷酸之间的_____________ (3)载体 质粒 ①种类： ________ 、 λ 噬菌体的衍生物、动植物病