新药临床前毒理学研究

急性毒性研究的受试物应能够代表临床试验受试物 和上市药品，与临床试验受试物和上市药品符合同 一质量标准。 如果受试物为复方制剂，建议进行各成分单独给药 的试验和按复方制剂比例联合给药的试验，以提示 有无增毒作用，或是否出现新的毒性。 如果受试物在贮存条件下易发生降解，建议以含降 解产物量最高的受试物进行急性毒性试验，并与临 床样品的急性毒性试验结果比较。
（2）毒理学研究手段 ）毒理学研究手段（动物毒性实验）：
①实验动物和人为药物反应的种属差异； ②实验动物的数量有限，那些发生率低的毒性反应，在少 量的动物中难以发现； ③常规毒性试验所用的动物多系实验室培育的品种，反应 较单一； ④毒性实验所用的动物都是健康的，而临床用药的病人则 可能同时患有多种疾病； ⑤动物毒性试验中采用大剂量的做法与临床用药相差甚远， 特别是那些毒性低、给药量很大的药，有时会给实验结果 造成假象。
能为开发新药提供线索。
5．判断毒性的可逆与否 动物出现毒性反应，必须搞清能否恢复， ．
一般来讲，可逆性毒性反应不影响新药注册，如有不可逆性损伤，则 一般不批准上临床。
6．解救措施 特别是作用强而猛、安全范围小的药物。 ．
第二节 急性毒性试验（ Acute
1、定义：
toxicology ）
指动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间 内所产生的毒性反应。
*FDA不要求LD50。 *在ICH会议上，认为LD50不再是急性毒性试验的 一般要求了，急性毒性研究的重点是暴露动物在死 亡之前出现的毒性及其与剂量的关系。 *但是对于毒性较大的动物及细胞毒类的抗癌药物， 推算Ⅰ期临床的起始剂量时，要求提供准确的LD50值。
8．MTD测定（最大给药量法） ． 测定（ 测定 最大给药量法） 当有些药物用最大允许浓度和最大允许容积给 予动物，仍未测出LD50时，可只求MTD值。即 用最大浓度和最大允许容积一次给药于20只动 物后，连续观察7~14天，未见任何动物死亡， 则MTD＞××g/kg。若仅有个别死亡，则宜写 成LD50＞××g/kg。
2．确定安全剂量范围 要知道单次或多次给药在多大范围内不 ．
仅有效(主要药效学)而且不产生毒性和不良反应，安全范围越大，则 作用越好。
3．发现毒性反应 通过动物的毒性反应症状为临床用药的安全性 ．
监护提供依据，预防毒性和不良反应的发生，一旦发生便可及时采取 措施。
4．寻找毒性靶器官 它不仅能为药物毒性防治提供依据，还有可 ．
3、内容(最终落实目标)：
①发现受试物可能引起的临床不良反应，包括不良 反应的性质、程度、量效和时效关系、可逆性等； ②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织； ③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全范围； ④提示临床试验中需重点监测的安全性指标； ⑤对毒性作用强、毒性症状发生迅速、安全范围小的 化合物，长期毒性研究还可以为临床试验中的解毒或 解救措施提供参考。
二、动物毒性反应对于临床试验的意义
长期毒性试验是动物非临床安全性评价的核心内 容，是能否过渡到临床试用的主要依据，也可为 临床安全用药剂量设计提供参考依据，并为临床 毒性和不良反应的监护及生理生化指标检测提供 依据； 动物长期毒性研究的结果一般不会完全再现于人 体临床试验。但如果没有试验或文献依据证明受 试物对动物的毒性反应与人体无关，在进行药物 进行药物 评价时必须首先假设人最为敏感， 评价时必须首先假设人最为敏感，长期毒性研究 中动物的毒性反应将会在临床试验中再现。 中动物的毒性反应将会在临床试验中再现
一般用不等浓度等容量 不等浓度等容量给药， 不等浓度等容量 见P45，表4-2：急性毒性试验不同动物给药途径相对应 的常用容量和最大容量。
小动物一般分4~6个剂量组。各剂量组组距一般以0.650.85为宜，具体根据药物毒性大小和预试结果而定。大 动物可用50％等量递升法，一般用6条犬。
5．观察记录 ．
ห้องสมุดไป่ตู้
3. 受试药
受试物应能够代表临床试验受试物和上市药品，与 临床试验受试物和上市药品符合同一质量标准。
4. 给药途径
一般要求同临床给药途径； 临床静脉注射(大鼠)时可用腹膜内注射代替，i.m.或 s.c.可变换注射部位，特殊情况另作说明。
5. 剂量及分组
一般设4个剂量组，剂量以mg/kg或ml/kg为计量单位。 一般以不等浓度等容量 不等浓度等容量给药。 不等浓度等容量 a.低剂量组：目的是寻找动物安全剂量范围，为临床剂 量设计作参考，一般应高于整体动物有效剂量，此剂量 下应不出现毒性反应； b.中剂量组：应使动物产生轻微的或中度的毒性反应； c.高剂量组：目的是为寻找毒性靶器官、毒性反应症状 及抢救措施提供依据，也为临床毒性和不良反应监测提 供参考，应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个 别动物死亡； d.空白对照组：溶媒或其他赋形剂。 若所用溶媒或赋形剂有毒性时则增加正常对照组，每组大 鼠雌雄各10只，3个月以上应增加到雌雄各20只，用大动 物时每组雌雄各2只，大剂量组宜各3只。
3、内容和要求 、 （1）内容： 急性毒性研究（Acute toxicology）
长期毒性研究（long-term toxicology）
特殊毒性研究（Special toxicology Test）
其他相关毒性研究
（2）要求：
1．给出毒性剂量 不仅要测出急性毒性的LD50，使我们粗浅了解 ．
该药单次给药的毒性剂量，还要了解连续长期给药产生毒性的剂量。
2、局限性
WHO在《临床前药物安全实验原则》一书中指出： “虽然事先对生物活性物质进行了最仔细彻底的 科学研究，但给人使用仍总是不可避免地冒一定 风险”。 造成风险的原因主要来自两方面：一方面是新药 本身；另一方面来自毒理学研究手段。
（1）新药本身 新药本身： 新药本身 不断改变化学结构和由之而产生的药理学特征， 往往超出人们原有的知识，超出经验和研究手 段所达到的预测能力。
2、方法：
定性观察：观察服药后动物有哪些中毒表现，其毒性反应出 定性观察 现和消失的速度如何，涉及哪些组织和器官，最主要的可能 毒性靶器官是什么，损伤的性质及可逆程度如何，中毒死亡 过程有哪些特征，可能的死亡原因是什么等。
定量观察：观察药物毒性反应与剂量的关系，主要指标有近 定量观察 似致死剂量，半数致死剂量和致死剂量，其中以LD50为主要 定量指标(小动物) 。
2.给药频率： 给药频率： 给药频率
原则上长期毒性研究中动物应每天给药；但给药周期为3个 月或3个月以上：可采取一周6天给药。
一、作用意义
1．了解新药急性毒性的强度 2．可计算新药相对毒性参数 3．为临床毒性不良反应提供参考依据 4．为长期毒性、蓄积性毒性和特殊毒性试验选择剂量提 供依据 5．其他方面：系列化合物的合格率分析(除理化性质为主 外)也须参考LD50，看生物效应有无明显差别，以抑制药 物转运
二、基本内容和要求(《药物非临床研究质量管理规 《
相关名 词
最大耐受量（Maximal tolerance dose, MTD）： 不引起受试对象死亡的最高剂量。 最小致死剂量（Minimal lethal dose, MLD）：引 起个别受试动物出现死亡的剂量 。 半数致死量（Median lethal dose, LD50）：在一 定试验条件下引起50%动物死亡的剂量。该值是 经统计学处理所得的结果。 未见反应剂量（No observed effect level, NOEL） 或未见不良反应剂量（No observed adverse effect level, NOAEL）
自主神经系统 呼吸系统 心血管系统 胃肠系统 生殖系统 皮肤、毛 黏膜 眼睛 其他
6．剖检 ．
对于所有的试验动物均应进行大体解剖，包括实验 过程中因濒死而处死的动物、死亡的动物以及试验 结束时仍存活而处死的动物。 任何器官出现体积、颜色、纹理改变时，均应记录 并进行组织病理学检查。
7．结果处理 ． 实验资料按表所列项目填充，用适宜统计方法 计算LD50值。若发现毒性反应有明显性别差异， 则应分别求它们不同性别的LD50 。
3.给药途径 给药途径
一类药及可溶于水的至少须两种给药途径，其中一种必 须是临床给药途径，和一种能使原型药物较完全进入循 环的途径（如静脉注射）。如果临床拟用途径为静脉给 药，则仅此一种途径即可。 其他类至少有一种临床给药途径。
4．剂量和分组 ．
给药剂量应从未见毒性剂量到出现严重毒性 (危及生命 的) 剂量，同时设阴性对照组（溶剂对照组）。
第四章 新药临床前毒理学研究
（Toxicology Study before Clinic） ）
药剂学教研室
杜 倩
第一节 研究目的和意义
1、研究意义
使上市新药在临床治疗剂量下无毒，提高临床 使用的安全性 安全性。 安全性 成功的例子：
如青霉素致敏导致许多病人死亡后，人们便进行多方 面的深入研究，了解到引起过敏反应的机制是由于青 霉素在人体内遇到蛋白质等物质后，生成青霉素酸等 半抗原，找出了与人类有同样反应的动物模型－豚鼠， 建立起检测这类药物的致敏方法 。
饲料应写明供应单位，若自己配的饲料应提供配方及 成分含量的检测报告。 各种实验动物均应在符合GLP要求的动物房内饲养。 动物室内温度、湿度、光照和通风条件均应写清楚。 笼养大鼠每笼不宜超过5只，雌雄分开，有条件时单 笼饲养，实验前至少适应观察1周。食量每天记录， 体重每周称1次。犬宜单笼饲养，定量喂食，Beagle 犬实验前至少训养2周，用标准饲料喂养。杂种犬要 预先检疫、驱虫，实验前至少驯养1月。猴实验前驯 养1月，用标准饲料喂养。
三、基本内容和要求
1. 动物
理想的动物应具有以下特点： ①对受试物的生物转化与人体相近；②对受试物敏感； ③已有大量历史对照数据。 要求两种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬或猴。 性别要求雌雄各半。 一般大鼠为雌、雄各10 - 30只，Beagle犬或猴为雌、 雄各3 - 6只。