13第十二章第八节诺卡菌属40
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星形诺卡菌在SDA上的菌落特征（5~7d）
涂片染色镜检：G+纤细分枝菌丝， 培养物部分断裂成链杆状或球杆状， 呈T形或Ⅴ形排列， 亦可有呈关节孢子链状排列者。
星形诺卡菌
图12-26 N.asteroidees光镜图（结晶紫染色）
诺卡菌属中与人类有关的各菌种的生物学特性
不同种类产不同色素：橙红、粉红、黄、黄绿， 紫及其他颜色， 星形诺卡菌菌落：黄色或深橙色，表面无白色 菌丝。 巴西诺卡菌菌落表面有白色菌丝生长。 豚鼠耳炎诺卡菌类似星形诺卡菌：黄色或橘黄 色（图12一27）。 培养观察两周，若仍无生长，报告阴性。 液体培养基：菌膜，下部培养基澄清。
33
新鲜诺卡菌培养物经革兰染色为阳性的杆菌， 特别是菌龄较短，尚无菌丝体出现时，其形 态类似细菌，鉴定中应注意； 进行属内种的鉴别之前，首先应与其他形态 相似的革兰阳性杆菌做属间的鉴别； 相似菌类：棒状杆菌、链霉菌和放线菌。 经过属的鉴别认定为诺卡菌属后，再进行属 内鉴定。
34
诺卡菌属菌种的鉴别特性
7
巴西诺卡菌及星形诺卡菌因侵入皮下组 织，引起慢性化脓性肉芽肿，表现为皮 下肿胀、脓肿及多发性瘘管，如发生于 足部或腿部，称足分枝菌病 （mycotoma）。 本病也可能由、马杜拉放线菌及某些真 菌引起。
8
诺卡菌属感染 常发生在一些其他疾病或免疫障碍性 疾病晚期，尤其：库欣综合征、糖尿病 及长期应用糖皮质激素、免疫抑制剂或 广谱抗生素患者。 诺卡菌属感染亦可见于牛、犬等哺乳 动物，也可感染鸟和鱼类。
18
诺卡菌生长的菌落，所用培养基和孵 育时间差异非常大，在SDA ， HIA 斜 面，星状诺卡菌为橙红色或橘黄色， 皮瘟诺卡菌在Middlebrook 7H 1O琼脂 上颜色较暗，巴西诺卡菌为橙棕色， 豚鼠耳炎诺卡菌苍白色，南非诺卡菌 苍白或蓝紫色。
19
形态与放线菌相似，菌丝末端不膨大， 革兰染色时着色不均。 若为压碎颗粒，镜下为菌团，中央部位 为G+，边缘的棒状体为G－。结晶紫染色 （图12－26）。
17
气生菌丝中可见有2 - 3 双分生孢子的 短小分生孢子链，而基生菌丝则少见。 镜下形态观察比较理想方法是在斜面上 直接定点观察。用不含葡萄糖的玉米粉 琼脂斜面， 25℃培养2 -3 周，斜面培 养基菌落镜检时着重确认基生菌丝、气 生菌丝及芽生孢子。诺卡菌的基生菌丝 非常小，可形成双歧分枝式，菌丝分枝 常形成直角，次级分枝。
1.诺卡菌： 抗酸染色结果变异较大，不同菌龄，结果 会不一样，即在同一张涂片上，也会出现 部分菌体阳性，部分菌体阴性。是诺卡菌 抗酸性的特点。 2.诺卡菌属菌种的鉴别特性见表
38
小结 诺卡菌广泛分布于土壤中； 多为腐物寄生性的非病原菌； 本菌不是人体正常菌群，常引起外源性感染； 引起人或动物急性或慢性诺卡菌病，主要为 星形诺卡菌和巴西诺卡菌； 诺卡菌感染常发生在一些慢性进行性疾病或 免疫障碍性疾病晚期； 专性需氧，普通培养基或沙氏琼脂培养基室 温或37℃缓慢生长，45℃生长； 菌落大小不等，表面有皱褶，颗粒状。
14
如查见革兰染色反应与放线菌相同， 但萋-纳染色为弱抗酸性时，可报告 为"找到染色、形态疑似诺卡菌"。
15
触酶阳性 分解糖类，需氧，养{沙氏普通脂培养 基或35℃均能缓慢生长。的地表白有 皱褶，颗粒状，初代分离时，平板须 持续孵育一周，
16
培养过程中，这些微生物镜下形态与临 床标本直接检查相似，G+菌，具短或长的 分枝菌丝，直径＜1μm。可断裂形成杆状 或球形， 平板经35 ℃24-48h孵育后，如有细菌生 长，按常规鉴定， 无菌生长的平板还应继续孵育至第3 天。 如疑有诺卡菌，平板应持续孵育7 天证 实无菌生长，才能报告阴性。
临床微生物及检验精品课
三、形态、 培养特征
10
G+或不定，诺卡菌属菌体细胞呈多向分 枝(直径0.5~1.2μm. )细长分枝菌丝， 菌丝断裂后形成杆状或球状、无动力碎 片，丝状体呈粗细不等串珠状。常形成 气生菌丝（图12－25）（只能在显微镜 下观察到） 不形成芽胞。
抗酸染色弱阳性，且不均匀， 易被脱 色成阴性。 怀疑诺卡菌感染患者，准确诊断通常依 赖于涂片染色镜检和细菌培养分离鉴定 相结合方法；
四、种属鉴定
若镜检发现革兰染色及形态学特性 与放线菌相似， 但抗酸染色为弱抗酸 性时， 可报告送检标本肉眼观察的结果与 涂片革兰染色白细胞和细菌学显微镜 镜检的描述性报告“直接涂片见白细 胞内或白细胞外有大量或少量细菌形 似奴卡菌”。
32
诺卡菌据培养出菌落大小不同颜色或 涂片镜检有分枝菌丝及排列可初步鉴 定（表12-10）。 据生化反应、能否在45℃生长及抗生 素抗性试验来鉴定到种。
12
临床常用标本痰液、肺泡灌洗液、渗出物或
CSF 等。
如有可能将临床标本用两种涂片染色： 革兰染色和改良的Kinyoun 抗酸染色后镜检 (诺卡菌初染需要加长时间)，诺卡菌标本染 色时，脱色剂改用2% 硫酸水溶液。
13
抗酸染色直接用于痰标本时，适当增加标本 涂片厚度，提高检出率。 染厚涂片时，须掌握复染色时间。如背景过 深，影响镜检。 诺卡菌呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌延 长。 取培养菌落涂片染色时，呈两种现象，视野 中有些菌细胞阳性，另外一些阴性； 有时同一个菌体上，红色深浅亦有不同，观 察时应予注意。
皮瘟诺卡菌
一、临床意义
4
诺卡菌属：广泛分布于土壤的一群需氧放线 菌。 本菌属：DNA（G＋C）mo1%为64～72， 多数为腐物寄生性致病菌， 有的产抗结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌及抗 其他细菌的利福霉素，抗细菌、原虫、病毒 的蚁毒素等。 与人或动物致病性有关： 星形诺卡菌和巴西诺卡菌。 诺卡菌属主要引起外源感染，
星形诺卡菌→呼吸道→原发性及化脓性 肺部感染→类似肺结核症状； 肺部病灶转移至皮下组织→皮下脓肿、 溃疡和多发性瘘管； 也可扩散到其他器官→脑脓肿及腹膜炎； 组织病理变化主要表现为化脓性肉芽肿 样改变，感染组织内及脓汁内也有类似 “硫磺样颗粒”，淡黄色、红色或黑色， 称色素颗粒。
星形奴卡菌引起原发性化脓性肺部感染， 出现类似结核症状； 肺部病灶向其他组织器官扩散，形成皮 下脓肿、多发性瘘管、脑脓肿、腹膜炎 等。 组织病理变化主要表现为化脓性肉芽肿 样改变，感染组织内及脓汁内有类似 “硫磺样颗粒”，淡黄色、红色或黑色， 称色素颗粒。
图12-25 诺卡菌光镜图（革兰染色）
专性需氧，普通培养基或沙氏培养基 室温或37℃缓慢生长，最高可达45℃， 培养24~48h后：小菌落，淡黄色粗颗 粒样，边缘陷入培养基内， 表面有白垩样或天鹅绒样气中菌丝体， 触之坚硬，不易浮悬于生理盐水中。 泥土气味，菌落：橘黄、黄褐或红色。
星形诺卡菌在血琼脂平板上的菌落特征（5~7d）
35
36
(1)与棒状杆菌属鉴别：该属菌种不形成菌丝， 可延长培养时间，有无菌丝体出现，极易与 诺卡菌区别。 (2)诺卡菌与链霉菌和放线菌区别： 诺卡菌细胞壁结构与链霉菌、放线菌不同， 诺卡菌对溶菌酶耐受，不被其破坏，链霉菌 和放线菌都敏感。诺卡菌具弱抗酸性，抗酸 染色阳性，链霉菌和放线菌阴性。
37
第八节 诺卡菌属
临床微生物及检验精品课
一
二
分类
临床意义
形态和培养特征 种属鉴定
2
三
四
诺卡菌属 诺卡菌属（Nocordio）属诺卡菌科，22个种，广
泛分布于土壤，与医学相关的13 个菌种：
脓肿诺卡菌
新星诺卡菌
豚鼠耳炎诺卡菌
非洲诺卡菌
星形诺卡菌 巴西诺卡菌 短链诺卡菌 肉色诺卡菌
少食诺卡菌
假巴西诺卡菌 南非诺卡菌 老种诺卡菌
星形诺卡菌在SDA上的菌落特征（5~7d）
涂片染色镜检：G+纤细分枝菌丝， 培养物部分断裂成链杆状或球杆状， 呈T形或Ⅴ形排列， 亦可有呈关节孢子链状排列者。
星形诺卡菌
图12-26 N.asteroidees光镜图（结晶紫染色）
诺卡菌属中与人类有关的各菌种的生物学特性
不同种类产不同色素：橙红、粉红、黄、黄绿， 紫及其他颜色， 星形诺卡菌菌落：黄色或深橙色，表面无白色 菌丝。 巴西诺卡菌菌落表面有白色菌丝生长。 豚鼠耳炎诺卡菌类似星形诺卡菌：黄色或橘黄 色（图12一27）。 培养观察两周，若仍无生长，报告阴性。 液体培养基：菌膜，下部培养基澄清。
33
新鲜诺卡菌培养物经革兰染色为阳性的杆菌， 特别是菌龄较短，尚无菌丝体出现时，其形 态类似细菌，鉴定中应注意； 进行属内种的鉴别之前，首先应与其他形态 相似的革兰阳性杆菌做属间的鉴别； 相似菌类：棒状杆菌、链霉菌和放线菌。 经过属的鉴别认定为诺卡菌属后，再进行属 内鉴定。
34
诺卡菌属菌种的鉴别特性
7
巴西诺卡菌及星形诺卡菌因侵入皮下组 织，引起慢性化脓性肉芽肿，表现为皮 下肿胀、脓肿及多发性瘘管，如发生于 足部或腿部，称足分枝菌病 （mycotoma）。 本病也可能由、马杜拉放线菌及某些真 菌引起。
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诺卡菌属感染 常发生在一些其他疾病或免疫障碍性 疾病晚期，尤其：库欣综合征、糖尿病 及长期应用糖皮质激素、免疫抑制剂或 广谱抗生素患者。 诺卡菌属感染亦可见于牛、犬等哺乳 动物，也可感染鸟和鱼类。
18
诺卡菌生长的菌落，所用培养基和孵 育时间差异非常大，在SDA ， HIA 斜 面，星状诺卡菌为橙红色或橘黄色， 皮瘟诺卡菌在Middlebrook 7H 1O琼脂 上颜色较暗，巴西诺卡菌为橙棕色， 豚鼠耳炎诺卡菌苍白色，南非诺卡菌 苍白或蓝紫色。
19
形态与放线菌相似，菌丝末端不膨大， 革兰染色时着色不均。 若为压碎颗粒，镜下为菌团，中央部位 为G+，边缘的棒状体为G－。结晶紫染色 （图12－26）。
17
气生菌丝中可见有2 - 3 双分生孢子的 短小分生孢子链，而基生菌丝则少见。 镜下形态观察比较理想方法是在斜面上 直接定点观察。用不含葡萄糖的玉米粉 琼脂斜面， 25℃培养2 -3 周，斜面培 养基菌落镜检时着重确认基生菌丝、气 生菌丝及芽生孢子。诺卡菌的基生菌丝 非常小，可形成双歧分枝式，菌丝分枝 常形成直角，次级分枝。
1.诺卡菌： 抗酸染色结果变异较大，不同菌龄，结果 会不一样，即在同一张涂片上，也会出现 部分菌体阳性，部分菌体阴性。是诺卡菌 抗酸性的特点。 2.诺卡菌属菌种的鉴别特性见表
38
小结 诺卡菌广泛分布于土壤中； 多为腐物寄生性的非病原菌； 本菌不是人体正常菌群，常引起外源性感染； 引起人或动物急性或慢性诺卡菌病，主要为 星形诺卡菌和巴西诺卡菌； 诺卡菌感染常发生在一些慢性进行性疾病或 免疫障碍性疾病晚期； 专性需氧，普通培养基或沙氏琼脂培养基室 温或37℃缓慢生长，45℃生长； 菌落大小不等，表面有皱褶，颗粒状。
14
如查见革兰染色反应与放线菌相同， 但萋-纳染色为弱抗酸性时，可报告 为"找到染色、形态疑似诺卡菌"。
15
触酶阳性 分解糖类，需氧，养{沙氏普通脂培养 基或35℃均能缓慢生长。的地表白有 皱褶，颗粒状，初代分离时，平板须 持续孵育一周，
16
培养过程中，这些微生物镜下形态与临 床标本直接检查相似，G+菌，具短或长的 分枝菌丝，直径＜1μm。可断裂形成杆状 或球形， 平板经35 ℃24-48h孵育后，如有细菌生 长，按常规鉴定， 无菌生长的平板还应继续孵育至第3 天。 如疑有诺卡菌，平板应持续孵育7 天证 实无菌生长，才能报告阴性。
临床微生物及检验精品课
三、形态、 培养特征
10
G+或不定，诺卡菌属菌体细胞呈多向分 枝(直径0.5~1.2μm. )细长分枝菌丝， 菌丝断裂后形成杆状或球状、无动力碎 片，丝状体呈粗细不等串珠状。常形成 气生菌丝（图12－25）（只能在显微镜 下观察到） 不形成芽胞。
抗酸染色弱阳性，且不均匀， 易被脱 色成阴性。 怀疑诺卡菌感染患者，准确诊断通常依 赖于涂片染色镜检和细菌培养分离鉴定 相结合方法；
四、种属鉴定
若镜检发现革兰染色及形态学特性 与放线菌相似， 但抗酸染色为弱抗酸 性时， 可报告送检标本肉眼观察的结果与 涂片革兰染色白细胞和细菌学显微镜 镜检的描述性报告“直接涂片见白细 胞内或白细胞外有大量或少量细菌形 似奴卡菌”。
32
诺卡菌据培养出菌落大小不同颜色或 涂片镜检有分枝菌丝及排列可初步鉴 定（表12-10）。 据生化反应、能否在45℃生长及抗生 素抗性试验来鉴定到种。
12
临床常用标本痰液、肺泡灌洗液、渗出物或
CSF 等。
如有可能将临床标本用两种涂片染色： 革兰染色和改良的Kinyoun 抗酸染色后镜检 (诺卡菌初染需要加长时间)，诺卡菌标本染 色时，脱色剂改用2% 硫酸水溶液。
13
抗酸染色直接用于痰标本时，适当增加标本 涂片厚度，提高检出率。 染厚涂片时，须掌握复染色时间。如背景过 深，影响镜检。 诺卡菌呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌延 长。 取培养菌落涂片染色时，呈两种现象，视野 中有些菌细胞阳性，另外一些阴性； 有时同一个菌体上，红色深浅亦有不同，观 察时应予注意。
皮瘟诺卡菌
一、临床意义
4
诺卡菌属：广泛分布于土壤的一群需氧放线 菌。 本菌属：DNA（G＋C）mo1%为64～72， 多数为腐物寄生性致病菌， 有的产抗结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌及抗 其他细菌的利福霉素，抗细菌、原虫、病毒 的蚁毒素等。 与人或动物致病性有关： 星形诺卡菌和巴西诺卡菌。 诺卡菌属主要引起外源感染，
星形诺卡菌→呼吸道→原发性及化脓性 肺部感染→类似肺结核症状； 肺部病灶转移至皮下组织→皮下脓肿、 溃疡和多发性瘘管； 也可扩散到其他器官→脑脓肿及腹膜炎； 组织病理变化主要表现为化脓性肉芽肿 样改变，感染组织内及脓汁内也有类似 “硫磺样颗粒”，淡黄色、红色或黑色， 称色素颗粒。
星形奴卡菌引起原发性化脓性肺部感染， 出现类似结核症状； 肺部病灶向其他组织器官扩散，形成皮 下脓肿、多发性瘘管、脑脓肿、腹膜炎 等。 组织病理变化主要表现为化脓性肉芽肿 样改变，感染组织内及脓汁内有类似 “硫磺样颗粒”，淡黄色、红色或黑色， 称色素颗粒。
图12-25 诺卡菌光镜图（革兰染色）
专性需氧，普通培养基或沙氏培养基 室温或37℃缓慢生长，最高可达45℃， 培养24~48h后：小菌落，淡黄色粗颗 粒样，边缘陷入培养基内， 表面有白垩样或天鹅绒样气中菌丝体， 触之坚硬，不易浮悬于生理盐水中。 泥土气味，菌落：橘黄、黄褐或红色。
星形诺卡菌在血琼脂平板上的菌落特征（5~7d）
35
36
(1)与棒状杆菌属鉴别：该属菌种不形成菌丝， 可延长培养时间，有无菌丝体出现，极易与 诺卡菌区别。 (2)诺卡菌与链霉菌和放线菌区别： 诺卡菌细胞壁结构与链霉菌、放线菌不同， 诺卡菌对溶菌酶耐受，不被其破坏，链霉菌 和放线菌都敏感。诺卡菌具弱抗酸性，抗酸 染色阳性，链霉菌和放线菌阴性。
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第八节 诺卡菌属
临床微生物及检验精品课
一
二
分类
临床意义
形态和培养特征 种属鉴定
2
三
四
诺卡菌属 诺卡菌属（Nocordio）属诺卡菌科，22个种，广
泛分布于土壤，与医学相关的13 个菌种：
脓肿诺卡菌
新星诺卡菌
豚鼠耳炎诺卡菌
非洲诺卡菌
星形诺卡菌 巴西诺卡菌 短链诺卡菌 肉色诺卡菌
少食诺卡菌
假巴西诺卡菌 南非诺卡菌 老种诺卡菌