细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法.doc

“动物的克隆”知识梳理与概念辨识

杨念文（舟山中学316000）

1．动物细胞培养和组织培养

动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

动物组织培养：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。培养过程中可以伴随组织分化。广义的组织培养包括细胞培养、组织培养和器官培养。动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养。

培养的过程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

培养的条件：①无菌、无毒的环境。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养（合成培养基成分）：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等天然成分。③适宜温度、pH：哺乳动物多以36.5℃±0.5℃为宜；多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。

动物细胞培养与植物组织培养的区别

2．原代培养和传代培养

原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养称为原代培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

传代培养：将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖，称为传代培养。严格地说，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶就称为传代培养。

3．细胞系与细胞株

细胞系：是指能够可连续传代培养的细胞群体，这个群体可能包含多个种类的细胞。原

代培养物开始第一次传代培养后的细胞称之为细胞系。其中，能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的细胞称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。无限细胞本质上已是发生转化（遗传物质改变）的细胞系，如肿瘤细胞。

细胞株：用单细胞分离增殖形成的或通过筛选细胞系获取的具有特殊性质纯化细胞群称细胞株。即是由一个祖先细胞经过增殖形成的细胞系，此细胞群体中所有细胞的生物学性能和理化性质都是一致的。可以说，细胞株是一种特殊的细胞系，细胞系的概念中包含细胞株。可连续多次传代的细胞株称为连续细胞株；可传代次数有限的细胞株称为有限细胞株。

动物的克隆培养法或细胞克隆即是建立细胞株。所以必须保证所建成的克隆来源于单个细胞。

4．细胞融合与细胞杂交

细胞融合：是指两个或多个细胞融合形成一个细胞的现象。

细胞杂交：细胞融合可以在基因型相同或不同的细胞间进行，其中基因型不同的细胞间融合就是细胞杂交。

动物细胞融合与植物细胞融合的比较

植物细胞融合（番茄－马铃薯植株）动物细胞融合（单克隆抗体）过程

第1步原生质体的制备（酶解法）正常小鼠的处理（注射灭活抗原）

第2步原生质体的融合（物化法）动物细胞融合（物化生法）

第3步杂种细胞的筛选和培养杂交瘤细胞的筛选和培养

第4步杂种植株鉴定提纯单克隆抗体（特异性强、灵敏度高）原理/理论基础细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖

融合前处理酶解法除去细胞壁：纤维素酶、果胶酶注射特定抗原法免疫处理正常小鼠

促融因子

物理法：电激、离心、振动

化学法：聚乙二醇、CaCl2等

物化法：与植物相同

生物法：灭活的仙台病毒意义和用途

①克服有性远缘杂交不亲和性，获得杂

种植株；②克服有性杂交的母系遗传，

获得细胞质基因的杂合子，是研究细胞

质遗传的有力手段

制备单克隆抗体的技术之一，有助于疾

病的诊断、治疗、预防

5．动物体细胞核移植和克隆动物

动物核移植：是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。

体细胞核移植的大致过程如下图：

克隆动物：用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。动物的克隆繁殖的理论基础是细胞核的全能性，属于无性繁殖。

与新个体产生相关的个体有三个：体细胞核供体、卵细胞细胞质供体、代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样，因此新个体性状与体细胞核供体基本相同。