褐飞虱PPT课件
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• GST 酶 活 性 的 测 定 ： 酶 标 板 内 加 入 1000uL 反 应 混 和 物 （ 30uL30mM CDNB 酶 作 用 物 ， 30uL30mM GSH和50uL酶液（稀释10倍 0.1M PH 7.5））.SHIMADZU UV-1800分光光度计在 340nm处测定吸光度，每个30秒读一次数，读10次。
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2、4 酶测定
• 酶液制取（冰上操作）：取约50头褐飞虱若虫于1000ul 磷酸钠缓冲液（0 .1M PH 7; 1mM EDTA,1mMDTT,1mM PTU,1mM PMSF和 20％的甘油）。匀浆液于4℃下，15000转速下离心 20min，取上清夜存于-80℃备用。
• 酯酶的酶活性测定：含96个孔的酶标板内加入200uL分析液（2uLα-乙酸萘底物和稀释了10倍 的酶液（0.2M PH 7.2）),混匀30℃孵育15min后加入染色试剂FAST Blue B,用酶标仪在600nm 处测定吸光度。
Fig. 1. Sampling sites of Nilaparvata lugens field populations in China. 1. Nanning, Guangxi; 2. Shaoguan, Guangdong; 3. Ningxiang, Hunan; 4. Nanchang, Jiangxi; 5. Hangzhou, Zhejiang;6. Wuxi, Jiangsu; 7. Hefei, Anhui; 8. Zhijiang, Hubei.
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2、3 生物测定
褐飞虱对杀虫剂敏感性测定方法——稻茎浸渍法。
稻茎的处理：连根挖取健壮一致的分蘖盛期至孕穗初期的稻株，洗净，剪成约10 cm长 的连根稻茎，3 株 1 组，在阴凉处晾至表面无水痕，将稻茎在药液中浸 30 s 后取出晾 干，以浸水的脱脂棉包住根部放入一次性500ml塑料杯中。
设计空白试验：选取标准一致的 3 龄中期若虫为试虫，每杯 20头，每个浓度重复 3 次， 以清水为对照 ( 含 0． 1% Triton X-100) 。
接虫生长环境：温度 27 ± 1℃ ，光周期 16L ∶ 8D，相对湿度 70-80％的恒温人工气候 箱中培养。处理后用脱脂棉保湿稻茎根，防稻茎干枯。
杀虫剂处理时间：异丙威、毒死蜱、醚菊酯杀虫剂处理72 h后，检查死亡率 ;
吡虫啉、噻虫嗪、氟虫胺、啶虫脒、噻虫啉杀虫剂处理 96 h 后检查死亡率。
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2.材料与方法
Байду номын сангаас
2.1供试昆虫种群
于2012 － 2014 年 采集中国八 个 省 21 稻 田 褐 飞 虱 田 间 种 群 ， 每 个 地 区采集 1500头褐飞虱成虫 和 6 00 褐 飞虱若虫，取虫龄一致的若虫或成虫在 26℃-27℃ 温 度 和 70-80％ 湿 度 、 光 照 16 小 时 水 稻 幼 苗 上 饲 养 至 下 一 代 ， 取 褐飞虱 3 龄中期若虫供药剂敏感性测 定
杀虫剂毒理学 Insecticide Toxicology
杀虫剂对田间褐飞虱抗性监测 及相关分析
Insecticide resistance monitoring and correlation analysis of insecticides in fieldpopulations of the brown planthopper Nilaparvata lugens (stål) in China 2012–
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2、2供试杀虫剂
杀虫剂 吡虫啉 毒死蜱 噻虫嗪
氟虫胺 噻虫啉 噻虫胺 异丙威 啶虫脒 乙虫氰 噻嗪酮 醚菊酯
纯度（％） 96 98 95
生产企业 河北威远生物化工有限公司 河北威远生物化工有限公司 湖北康宝泰精细化工有限公司
91 96 96 97.9 98.5
96.8 95
湖北康宝泰精细化工有限公司 湖北康宝泰精细化工有限公司 湖北康宝泰精细化工有限公司 江苏常隆化工有限公司 山东中农联合生物科技有限公司 南京盼丰化工有限公司 苏州奥特莱化工有限公司 苏州奥特莱化工有限公司
• P450酶活性的测定：含96个孔的酶标板内加入200uL分析液（100uL2mM p-NA,10uL9.6mM NADP和90uL的酶液（0.1M PH 7.8）），混匀30℃孵育，用Bio-Rad型酶标仪在405nm的波 长下，用吸光光度法记录吸光度，共记录15min.
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2、4 数据分析
• 数据分析依据和公式：根据Abbott公式计算死亡率和校正死亡率，利用概率分析求出 致死中浓度( LC50) 值及 95% 的置信区间，斜率。不同种杀虫剂相关性是运用计算通 过IBM SPSS 统计软件包来统计。
• 抗性倍数（RR）= 褐飞虱田间种群的 LC50值/褐飞虱敏感种群的LC50值。 • 抗性水平分级标准( 邵振润等) : • 抗性倍数为 5 及以下为敏感; 抗性倍数5 ～ 10 为低水平抗性; • 抗性倍数 10 ～ 100 为中等水平抗性; 抗性倍数100 以上为高水平抗性。 • 虫源：噻虫胺和醚菊酯的LC50敏感基线的建立所用虫源为在湖南省农业科学院实验室
2014
Xiaolei Zhang , Xun Liao a, Kaikai Mao ， Kaixiong Zhang , Hu Wan ,Jianhong Li
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1
• 1、背景介绍 • 2、材料和方法 • 3、结果 • 4、讨论
目录
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2
1、背景介绍
褐飞虱 Nilaparvata lugens 属半翅目飞虱科， 是我国、日本、菲律宾、韩国、印度等亚洲国家水 稻上的重要害虫之一。褐飞虱具有远距离迁飞习性， 通过刺吸水稻汁液和产卵直接危害水稻，还能够传 播病毒病，导致水稻大面积受害，所造成的经济损 失估计每年已超过3亿美元。一直以来，褐飞虱的防 治以化学防治为主。从20世纪50年代初至70年代常 用杀虫剂有滴滴涕和六六六等；从70年代至今常用 杀虫剂各种各样有有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除 虫菊酯类、新烟碱类杀虫剂、昆虫生长调节剂类、 吡啶类、苯基吡唑类等。由于对化学药剂的长时间 运用，褐飞虱已对以上药剂产生了不同程度的抗性。 褐飞虱危害水稻和传播病毒病
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2、4 酶测定
• 酶液制取（冰上操作）：取约50头褐飞虱若虫于1000ul 磷酸钠缓冲液（0 .1M PH 7; 1mM EDTA,1mMDTT,1mM PTU,1mM PMSF和 20％的甘油）。匀浆液于4℃下，15000转速下离心 20min，取上清夜存于-80℃备用。
• 酯酶的酶活性测定：含96个孔的酶标板内加入200uL分析液（2uLα-乙酸萘底物和稀释了10倍 的酶液（0.2M PH 7.2）),混匀30℃孵育15min后加入染色试剂FAST Blue B,用酶标仪在600nm 处测定吸光度。
Fig. 1. Sampling sites of Nilaparvata lugens field populations in China. 1. Nanning, Guangxi; 2. Shaoguan, Guangdong; 3. Ningxiang, Hunan; 4. Nanchang, Jiangxi; 5. Hangzhou, Zhejiang;6. Wuxi, Jiangsu; 7. Hefei, Anhui; 8. Zhijiang, Hubei.
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2、3 生物测定
褐飞虱对杀虫剂敏感性测定方法——稻茎浸渍法。
稻茎的处理：连根挖取健壮一致的分蘖盛期至孕穗初期的稻株，洗净，剪成约10 cm长 的连根稻茎，3 株 1 组，在阴凉处晾至表面无水痕，将稻茎在药液中浸 30 s 后取出晾 干，以浸水的脱脂棉包住根部放入一次性500ml塑料杯中。
设计空白试验：选取标准一致的 3 龄中期若虫为试虫，每杯 20头，每个浓度重复 3 次， 以清水为对照 ( 含 0． 1% Triton X-100) 。
接虫生长环境：温度 27 ± 1℃ ，光周期 16L ∶ 8D，相对湿度 70-80％的恒温人工气候 箱中培养。处理后用脱脂棉保湿稻茎根，防稻茎干枯。
杀虫剂处理时间：异丙威、毒死蜱、醚菊酯杀虫剂处理72 h后，检查死亡率 ;
吡虫啉、噻虫嗪、氟虫胺、啶虫脒、噻虫啉杀虫剂处理 96 h 后检查死亡率。
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2.材料与方法
Байду номын сангаас
2.1供试昆虫种群
于2012 － 2014 年 采集中国八 个 省 21 稻 田 褐 飞 虱 田 间 种 群 ， 每 个 地 区采集 1500头褐飞虱成虫 和 6 00 褐 飞虱若虫，取虫龄一致的若虫或成虫在 26℃-27℃ 温 度 和 70-80％ 湿 度 、 光 照 16 小 时 水 稻 幼 苗 上 饲 养 至 下 一 代 ， 取 褐飞虱 3 龄中期若虫供药剂敏感性测 定
杀虫剂毒理学 Insecticide Toxicology
杀虫剂对田间褐飞虱抗性监测 及相关分析
Insecticide resistance monitoring and correlation analysis of insecticides in fieldpopulations of the brown planthopper Nilaparvata lugens (stål) in China 2012–
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2、2供试杀虫剂
杀虫剂 吡虫啉 毒死蜱 噻虫嗪
氟虫胺 噻虫啉 噻虫胺 异丙威 啶虫脒 乙虫氰 噻嗪酮 醚菊酯
纯度（％） 96 98 95
生产企业 河北威远生物化工有限公司 河北威远生物化工有限公司 湖北康宝泰精细化工有限公司
91 96 96 97.9 98.5
96.8 95
湖北康宝泰精细化工有限公司 湖北康宝泰精细化工有限公司 湖北康宝泰精细化工有限公司 江苏常隆化工有限公司 山东中农联合生物科技有限公司 南京盼丰化工有限公司 苏州奥特莱化工有限公司 苏州奥特莱化工有限公司
• P450酶活性的测定：含96个孔的酶标板内加入200uL分析液（100uL2mM p-NA,10uL9.6mM NADP和90uL的酶液（0.1M PH 7.8）），混匀30℃孵育，用Bio-Rad型酶标仪在405nm的波 长下，用吸光光度法记录吸光度，共记录15min.
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2、4 数据分析
• 数据分析依据和公式：根据Abbott公式计算死亡率和校正死亡率，利用概率分析求出 致死中浓度( LC50) 值及 95% 的置信区间，斜率。不同种杀虫剂相关性是运用计算通 过IBM SPSS 统计软件包来统计。
• 抗性倍数（RR）= 褐飞虱田间种群的 LC50值/褐飞虱敏感种群的LC50值。 • 抗性水平分级标准( 邵振润等) : • 抗性倍数为 5 及以下为敏感; 抗性倍数5 ～ 10 为低水平抗性; • 抗性倍数 10 ～ 100 为中等水平抗性; 抗性倍数100 以上为高水平抗性。 • 虫源：噻虫胺和醚菊酯的LC50敏感基线的建立所用虫源为在湖南省农业科学院实验室
2014
Xiaolei Zhang , Xun Liao a, Kaikai Mao ， Kaixiong Zhang , Hu Wan ,Jianhong Li
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• 1、背景介绍 • 2、材料和方法 • 3、结果 • 4、讨论
目录
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1、背景介绍
褐飞虱 Nilaparvata lugens 属半翅目飞虱科， 是我国、日本、菲律宾、韩国、印度等亚洲国家水 稻上的重要害虫之一。褐飞虱具有远距离迁飞习性， 通过刺吸水稻汁液和产卵直接危害水稻，还能够传 播病毒病，导致水稻大面积受害，所造成的经济损 失估计每年已超过3亿美元。一直以来，褐飞虱的防 治以化学防治为主。从20世纪50年代初至70年代常 用杀虫剂有滴滴涕和六六六等；从70年代至今常用 杀虫剂各种各样有有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除 虫菊酯类、新烟碱类杀虫剂、昆虫生长调节剂类、 吡啶类、苯基吡唑类等。由于对化学药剂的长时间 运用，褐飞虱已对以上药剂产生了不同程度的抗性。 褐飞虱危害水稻和传播病毒病